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小鼠EVL基因的克隆和真核表达载体的构建
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作者 邹海 韩骅 +2 位作者 高方 曹秀丽 徐骁 《现代生物医学进展》 CAS 2012年第24期4606-4610,共5页
目的:构建小鼠EVL(Ena/VASP like)基因的真核表达载体,为深入研究EVL的功能奠定基础。方法:采用PCR方法,从小鼠cDNA文库中,扩增出1245bp的EVL编码区片段,经电泳、胶回收后连接入pMD-18T载体中,测序鉴定正确。用BamH I和HincII双酶切,定... 目的:构建小鼠EVL(Ena/VASP like)基因的真核表达载体,为深入研究EVL的功能奠定基础。方法:采用PCR方法,从小鼠cDNA文库中,扩增出1245bp的EVL编码区片段,经电泳、胶回收后连接入pMD-18T载体中,测序鉴定正确。用BamH I和HincII双酶切,定向克隆EVL编码区片段到真核表达载体pcDNA3.1中,用限制性内切酶酶切鉴定重组质粒正确后。将重组质粒转染入HELA细胞中,以RT-PCR检测EVL的mRNA的表达,以Western Blot检测EVL蛋白的表达。结果:酶切鉴定结果显示小鼠EVL编码区基因被成功克隆入真核表达载体pcDNA3.1中;RT-PCR和Western Blot结果以及免疫荧光染色显示Hela细胞中有EVL的mRNA和蛋白的表达。结论:成功获得pcDNA3.1-EVL的真核表达载体,为进一步深入研究EVL蛋白的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 evl蛋白 基因克隆 真核表达
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沉默EVL表达抑制肝癌细胞SMMC-7721的增殖和迁移能力
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作者 鲁呈韬 简强 李铮 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期1185-1191,共7页
Ena/VASP样蛋白(Ena/VASP like protein,EVL)是Ena/VASP家族成员之一,它参与肌动蛋白细胞骨架重组,以及细胞迁移、收缩环形成和细胞间附着.EVL在肝癌SMMC-7721细胞中高表达.抑制EVL蛋白表达后,SMMC-7721细胞的增殖与迁移能力降低.为研究... Ena/VASP样蛋白(Ena/VASP like protein,EVL)是Ena/VASP家族成员之一,它参与肌动蛋白细胞骨架重组,以及细胞迁移、收缩环形成和细胞间附着.EVL在肝癌SMMC-7721细胞中高表达.抑制EVL蛋白表达后,SMMC-7721细胞的增殖与迁移能力降低.为研究EVL在肝癌细胞的功能,构建了靶向shRNA干扰表达载体,稳定转染肝癌SMMC-7721细胞.MTT实验和细胞集落形成实验显示,与转染对照比较,沉默EVL蛋白表达可明显抑制SMMC-7721肝癌细胞的增殖、集落形成能力.Transwell实验证明,沉默EVL表达导致SMMC-7721细胞迁移能力降低.进而,流式细胞术揭示,沉默EVL表达的SMMC-7721细胞G0/G1期细胞比例增多.研究结果提示,EVL蛋白可促进肝癌细胞的增殖与迁移;该结果可解释EVL在肝癌细胞中高表达的意义. 展开更多
关键词 Ena/VASP样蛋白(evl) RNA干扰 肝癌细胞 迁移 增殖 肝癌
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