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西安地区EV71-VP1基因分析 被引量:3
1
作者 黄娜 张国成 +3 位作者 许东亮 豆玉凤 刘颖悦 杨晓蕾 《现代生物医学进展》 CAS 2010年第10期1854-1856,共3页
目的:通过在原核表达系统初步构建EV71-VP1,对西安地区肠道病毒71型(EV71)的外壳蛋白VP1基因进行分析。方法:采集西安地区手足口病患儿的疱液、咽部分泌物进行病毒分离和RT-PCR检测;通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增肠道病毒71型(E... 目的:通过在原核表达系统初步构建EV71-VP1,对西安地区肠道病毒71型(EV71)的外壳蛋白VP1基因进行分析。方法:采集西安地区手足口病患儿的疱液、咽部分泌物进行病毒分离和RT-PCR检测;通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增肠道病毒71型(EV71)外壳蛋白VP1基因,构建重组表达质粒PQE30/VP1,转化到大肠杆菌BL21中,对VP1基因进行遗传学分析。结果:对肠道病毒71型(EV71)西安地方株VP1基因测序,并将其与阜阳株(序列号为EU913471)相比较,表明我国西安地区EV71分离株与阜阳株有较大差别,核苷酸差异约为4%。结论:西安地方株VP1基因与阜阳株相比,其核苷酸差异较为明显。这将为西安地区EV71的分子流行病学研究以及EV71所致疾病的预防和控制,打下良好的基础。 展开更多
关键词 肠道病毒71 VP1基因 逆转录聚合酶链反应 大肠杆菌BL21
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Construction of Plant Expression Vector for Hand,Foot and Mouth Virus EV71-VP1 Gene and Its Expression in Tomato
2
作者 Wang Mei-liang Zhao Yue +5 位作者 Wang Yu-dan Li Xin-zhi Zhang Yao Chen Xiu-ling Qiu You-wen Wang Ao-xue 《Journal of Northeast Agricultural University(English Edition)》 2023年第4期53-62,共10页
EV71-type virus is one of the main pathogens causing the occurrence of hand,foot and mouth disease(HFMD),and VP1 protein,a factor that directly determines the antigenicity of the virus,has been isolated.The tomato was... EV71-type virus is one of the main pathogens causing the occurrence of hand,foot and mouth disease(HFMD),and VP1 protein,a factor that directly determines the antigenicity of the virus,has been isolated.The tomato was selected as a bioreactor for the production of an edible EV71 vaccine designed for the VP1 capsid protein.Using molecular biology techniques,the fusion gene EV71-VP1 was cut from vector PGEX-4T-2,a vector containing the p2300-EV71 gene with CaMV35S promoter and TL regulatory elements was constructed,and the hypocotyl and cotyledons of tomato were transformed using Agrobacterium(EHA105)-mediated method,screened,elongated and rooted,and finally 20 resistant tomato plants were obtained.Five transgenic positive seedlings were obtained by digestion and PCR assay,among which three plants were detected by RT-PCR to be capable of transcriptional translation at the RNA level.The experimental results aimed to explore new material support for the preparation of transgenic plant oral vaccines against EV71 infection and provide a theoretical basis for accelerating the development of transgenic plant vaccines in the future. 展开更多
关键词 HAND foot and mouth disease(HFMD) ev71-vp1 TOMATO plant transgenic vaccine vector construction
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中国EV71病毒VP1蛋白生物信息学分析 被引量:6
3
作者 李建强 李薇 +3 位作者 张予超 高晶晶 赵祖波 杨俊杰 《微生物学免疫学进展》 2010年第4期1-5,共5页
以肠道病毒71型(Enterovirus71,EV71)VP1蛋白基因序列为基础,利用生物软件对EV71病毒中国分离株VP1蛋白进行进化树、N-糖基化位点、二级结构及抗原位点的预测和分析。结果显示国内分离株多为C4亚型,有3株湖南分离株为A型,提示疫苗的研... 以肠道病毒71型(Enterovirus71,EV71)VP1蛋白基因序列为基础,利用生物软件对EV71病毒中国分离株VP1蛋白进行进化树、N-糖基化位点、二级结构及抗原位点的预测和分析。结果显示国内分离株多为C4亚型,有3株湖南分离株为A型,提示疫苗的研发应着重于预防C4b亚型EV71疫苗的研发。 展开更多
关键词 手足口病 ev71病毒 VP1蛋白 生物信息学分析
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手足口病病毒EV71衣壳蛋白VP1基因特征分析 被引量:2
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作者 赵曦 刘明石 +1 位作者 陈绮娴 陈奇丹 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第10期939-942,共4页
目的分析幼童手足口病病毒EV71衣壳蛋白VP1基因特征,为手足口病临床预防和控制提供指导。方法随机收集604例手足口病幼童患者标本,培养病毒株并分离鉴定。采用RT-PCR扩增EV71及其VP1区基因,经基因产物测序分析毒株的核苷酸和氨基酸序列... 目的分析幼童手足口病病毒EV71衣壳蛋白VP1基因特征,为手足口病临床预防和控制提供指导。方法随机收集604例手足口病幼童患者标本,培养病毒株并分离鉴定。采用RT-PCR扩增EV71及其VP1区基因,经基因产物测序分析毒株的核苷酸和氨基酸序列同源性。结果604例手足口病幼童患者标本中,男性患者369例(61.09%)和女性235例(38.91%);(34.60%).1~岁179例(29.64%),2~岁216例(35.76%)和3~岁209例(34.60%)。共分离出病毒129株,分离率21.36%,其中EV71 61株(占47.29%),CoxA16 28株(占21.71%),其他肠道病毒40株(占31.01%)。61株EV71的VP1区基因序列间核苷酸同源性95.7%~100.0%,氨基酸同源性97.3%~100.0%。与C4a亚型代表株的核苷酸同源性96.4%~98.9%,氨基酸同源性99.0%~100.0%。与CoxA16原始株G-10、A、B基因型代表株VP1区以及C4b、C5亚型代表株的核苷酸同源性分别为66.0%~68.9%、78.6%~82.8%、83.2%~85.5%、95.2%~97.4%和84.5%~87.6%,氨基酸同源性分别为71.4%~75.7%、90.5%~93.6%、95.1%~96.0%、99.0%~99.8%和97.6%~99.4%。结论手足口病发病以3~4岁男性幼童为主,且以EV71为主。所分离的EV71流行株属于C4亚型。 展开更多
关键词 手足口病 ev71 VP1 同源性分析
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中国大陆EV71病毒分离株的分子流行病学研究 被引量:8
5
作者 江丽凤 叶鹏凌 +3 位作者 高风华 冯谦谨 郭中敏 陆家海 《热带医学杂志》 CAS 2011年第12期1341-1345,1353,共6页
目的了解1987-2010年中国大陆肠道病毒71型(EV71)分离株的分子流行病学特点及其种系进化、基因分型和遗传变异性。方法从GenBank/NCBI上获得中国大陆来源的具有完整VP1或近似完整VP1基因的核苷酸序列信息的413株EV71毒株进行分析,采用ME... 目的了解1987-2010年中国大陆肠道病毒71型(EV71)分离株的分子流行病学特点及其种系进化、基因分型和遗传变异性。方法从GenBank/NCBI上获得中国大陆来源的具有完整VP1或近似完整VP1基因的核苷酸序列信息的413株EV71毒株进行分析,采用MEGA5.0软件,构建系统进化树,计算相同或不同基因型及基因亚型毒株的核苷酸与氨基酸的相似性。结果 1987-2010年,中国大陆20个省、市或地区均分离到具有完整VP1序列的毒株,且2008年以来数量陡增;中国大陆流行的主要是C型,只有2008年安徽和2009年湖北发现了A型;各基因型在43、58、142、164、167、184、240、249、292等氨基酸位点发生了特异性变异;从健康人体内分离的HQ129932毒株与其他序列比较,氨基酸无特异性变异。结论 C型株可能具有更强的传染力;氨基酸位点变异对于EV71病毒进化有重要意义;VP1基因与疾病的严重程度无明显关联;应加强C4a亚型疫苗候选疫苗株对其他基因型毒株的交叉保护作用研究。 展开更多
关键词 ev71病毒分离株 氨基酸 VP1基因
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2016年盐城市手足口病病原学特征及EV71和CVA16型肠道病毒VP1基因特征 被引量:11
6
作者 陈国清 李春香 +4 位作者 王瑶 李峰 徐士林 李长城 邵荣标 《江苏预防医学》 CAS 2017年第6期647-650,共4页
目的了解2016年盐城市手足口病肠道病毒病原谱分布特征,并对鉴定为EV71、CVA16型肠道病毒VP1基因进行分子进化特征分析。方法收集疑似手足口病咽肛拭子标本,采用实时荧光RT-PCR方法检测通用、EV71和CVA16型肠道病毒核酸,以RT-PCR法扩增... 目的了解2016年盐城市手足口病肠道病毒病原谱分布特征,并对鉴定为EV71、CVA16型肠道病毒VP1基因进行分子进化特征分析。方法收集疑似手足口病咽肛拭子标本,采用实时荧光RT-PCR方法检测通用、EV71和CVA16型肠道病毒核酸,以RT-PCR法扩增其VP1基因全长编码区并进行序列分析,采用MegAlign、mafft、MEGA等软件进行核苷酸及氨基酸序列比对及基因种系进化特征分析。结果 2016年盐城市共收集疑似手足口病标本504份,检出肠道病毒核酸阳性165份,阳性率32.74%,EV71型、CVA16型、其他型别分别占4.37%、6.94%、21.43%。对EV71、CVA16型肠道病毒遗传进化树分析显示,盐城地区EV71和CVA16代表株分别属于C4a、B1b基因亚群进化分支,未发生基因亚群的转换,在各自进化分支中形成3条传播主链,远离各自原型株。结论 2016年盐城市手足病病原谱为多种基因型的肠道病毒共同流行。其他肠道病毒为优势病原体,EV71和CVA16仍占有一定比例。 展开更多
关键词 手足口病 ev71 CVA16 VP1基因 序列分析
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2014年-2015年淮南市手足口病EV71型病毒分离株VP1基因特征分析 被引量:1
7
作者 曾凡荣 史永林 +2 位作者 刘江 余寿杰 魏志军 《中国卫生检验杂志》 CAS 2018年第7期816-818,共3页
目的了解淮南市手足口病EV71型病毒分离株VP1基因遗传特征及进化关系。方法使用RD细胞对EV71型荧光PCR阳性标本进行病毒分离,盲传2代接种出现CPE后,收集培养物上清,提取病毒RNA,RT-PCR扩增VP1基因,对扩增产物进行基因序列测定,采用DNASt... 目的了解淮南市手足口病EV71型病毒分离株VP1基因遗传特征及进化关系。方法使用RD细胞对EV71型荧光PCR阳性标本进行病毒分离,盲传2代接种出现CPE后,收集培养物上清,提取病毒RNA,RT-PCR扩增VP1基因,对扩增产物进行基因序列测定,采用DNAStar 7.1和Mega 5.0软件对测序结果与国内外参考毒株进行基因亲缘性进化分析。结果 7株毒株基因测序显示VP1区核苷酸长度均为891 nt,其核苷酸同源性为93.5%~100%,氨基酸同源性为98.3%~100%;基因进化分析显示,与安徽阜阳、山东、河南EV71型毒株亲缘性较近,处于同一进化C4a分支。结论淮南市分离到的7株EV71型病毒VP1区基因核苷酸和氨基酸序列变异较小,与阜阳、山东、河南流行的C4a亚型存在共循环流行。 展开更多
关键词 手足口病 ev71 VP1 PCR
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2013年克拉玛依市手足口病EV71型VP1基因特征分析 被引量:1
8
作者 刘佳 夏玛丽 +3 位作者 黄江河 黎美芝 郭秀梅 李淑华 《中国卫生检验杂志》 CAS 2015年第2期238-240,244,共4页
目的掌握2013年克拉玛依市手足口病EV71 VP1基因特征。方法 real-time PCR方法筛选手足口病患者中EV71阳性病例,RT-PCR方法扩增VP1基因片段,结合已知亚型利用Mega软件分析测序结果。结果 59例样本中由肠道病毒引起53例,阳性率为89.8%,其... 目的掌握2013年克拉玛依市手足口病EV71 VP1基因特征。方法 real-time PCR方法筛选手足口病患者中EV71阳性病例,RT-PCR方法扩增VP1基因片段,结合已知亚型利用Mega软件分析测序结果。结果 59例样本中由肠道病毒引起53例,阳性率为89.8%,其中EV71 36例(67.9%)、CA16 10例(18.9%)、非EV71非CA16的其他肠道病毒7例(13.2%)。男性、女性中各病原阳性率差异无统计学意义(χ^2=3.1504,P=0.207)。12株测序毒株全部为C4亚型,与C4亚型相比较基因距离为0.031~0.046,部分氨基酸序列存在变异,12例EV71至少可以划分为2个传播链,lineage 2较lineage 1序列差异较大。结论各病原对于不同性别人群侵袭力无差异,2013年克拉玛依市手足口病主要病原为EV71。克拉玛依市EV71全部是C4亚型,属于中国大陆广泛流行的基因亚型;lineage 1为2013年克拉玛依市流行的优势分支,分支内同源性较大。lineage 1将来是否继续成为克拉玛依市流行分支,需要对EV71进行连续性监测。 展开更多
关键词 手足口病 肠道病毒71 VP1基因
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EV71病毒对树鼩原代肾上皮细胞感染模型的建立 被引量:3
9
作者 杨铭 胡晓星 +5 位作者 王文广 张莉 董书维 冯悦 代解杰 夏雪山 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期117-122,共6页
目的建立EV71对树鼩原代肾细胞的感染模型。方法胰蛋白酶消化法获得树鼩的原代肾细胞,用EV71感染树鼩肾细胞,测定1、2、4、6和8 d培养上清病毒滴度,分别用Western blot和间接免疫荧光法检测细胞中EV71病毒VP1蛋白的表达,以确定EV71病毒... 目的建立EV71对树鼩原代肾细胞的感染模型。方法胰蛋白酶消化法获得树鼩的原代肾细胞,用EV71感染树鼩肾细胞,测定1、2、4、6和8 d培养上清病毒滴度,分别用Western blot和间接免疫荧光法检测细胞中EV71病毒VP1蛋白的表达,以确定EV71病毒对树鼩原代肾细胞的感染性。结果对分离得到的树鼩原代肾细胞进行传代纯化和形态鉴别,建立以树鼩原代肾细胞为主的细胞培养。用EV71病毒感染树鼩原代肾细胞,感染后48~96 h病毒滴度可达到1.3×10~6TCID_(50)/m L,说明EV71病毒可有效感染树鼩原代肾细胞并有效增殖。Western blot检测发现,EV71病毒VP1蛋白可在感染后2~8 d的树鼩原代肾细胞中有效检出,间接免疫荧光法则在感染后2~6 d细胞的细胞质中检测到病毒VP1蛋白的分布。结论在成功建立树鼩原代肾细胞培养的基础上,确定了EV71病毒对树鼩原代肾细胞的感染性和病毒增殖特性,初步建立了EV71树鼩原代肾细胞感染模型。 展开更多
关键词 树鼩原代肾细胞 ev71 病毒增殖 VP1蛋白 感染模型
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2016年上海市普陀区手足口病病原谱及EV71和Cox A16病毒分离株VP1基因特征分析 被引量:6
10
作者 李晓君 唐海丰 +2 位作者 何鑫 胡焰 顾文超 《海南医学》 CAS 2018年第20期2911-2914,共4页
目的了解上海市普陀区手足口病病原学特点,分析肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A组16型(Cox A16) VP1基因的特征,为手足口病的防治提供科学依据。方法收集2016年上海市普陀区手足口病患者的咽拭子标本,采用实时荧光定量PCR法(Real-time ... 目的了解上海市普陀区手足口病病原学特点,分析肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A组16型(Cox A16) VP1基因的特征,为手足口病的防治提供科学依据。方法收集2016年上海市普陀区手足口病患者的咽拭子标本,采用实时荧光定量PCR法(Real-time PCR)进行核酸检测,并用RD细胞对核酸检测结果为EV71和Cox A16的标本进行病毒分离,收获的阳性分离株利用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法扩增病毒VP1区核苷酸序列,测序后分析其同源性并构建系统进化树。结果 2016年上海市普陀区共检测234份手足口病标本,阳性标本138份,阳性率为58.97%(138/234)。其中EV71阳性率为11.54%(27/234)、Cox A16阳性率为18.80%(44/234)、Cox A6阳性率为27.78%(65/234)和其他肠道病毒阳性率0.85%(2/234)。病毒分离培养阳性株包括10株EV71和20株Cox A16,10株EV71分离株均为C4a型,VP1区核苷酸和氨基酸序列同源性分别为93.6%~99.9%和98.7%~100.0%;20株Cox A16分离株均为B1b亚型,VP1区核苷酸和氨基酸序列同源性分别为93.4%~100.0%和98.2%~100.0%。结论 2016年上海市普陀区手足口病呈现Cox A6、EV71和Cox A16共同流行,而EV71流行株属于C4a亚型,Cox A16流行株属于B1b亚型,均与国内大部分地方的流行株基因亚型基本一致。 展开更多
关键词 手足口病 病原谱 肠道病毒71 柯萨奇病毒A组16型 VP1基因
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毕氏酵母表达的EV71 VP1蛋白免疫原性研究
11
作者 阮美生 周天龙 +1 位作者 黎荣 郭龙华 《热带医学杂志》 CAS 2015年第11期1467-1470,共4页
目的研究毕氏酵母表达的肠道病毒71(EV71)VP1的免疫原性,为研究EV71的亚单位疫苗提供实验依据。方法用生物信息学分析EV71的VP1序列,优化在酵母表达的密码子。表达质粒p PICZa A-VP1电转毕氏酵母,并在甲醇诱导下表达VP1,VP1用Ni-NTA亲... 目的研究毕氏酵母表达的肠道病毒71(EV71)VP1的免疫原性,为研究EV71的亚单位疫苗提供实验依据。方法用生物信息学分析EV71的VP1序列,优化在酵母表达的密码子。表达质粒p PICZa A-VP1电转毕氏酵母,并在甲醇诱导下表达VP1,VP1用Ni-NTA亲合层析得到纯化并用Western blot分析鉴定。用小鼠模型评估其免疫原性和疫苗效果。结果重组的VP1能有效诱导BALB/c小鼠产生抗-VP1抗体,免疫后的血清中抗VP1抗体能中和EV71病毒。对新生小鼠的被动保护进一步证实了VP1接种的小鼠抗血清的预防效应。结论重组VP1蛋白保留了其免疫原性,是一种候选的EV71疫苗。 展开更多
关键词 肠道病毒71 VP1 疫苗
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小鼠抗EV71衣壳蛋白VP1单克隆抗体的制备 被引量:6
12
作者 周湧超 徐志刚 +3 位作者 杨澜 陈新宇 段志良 文金生 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期462-468,共7页
目的制备肠道病毒71型(EV71)衣壳蛋白VP1特异性小鼠单克隆抗体(mAb)并检测其特异性。方法合成编码EV71-VP1的基因并克隆入原核表达质粒p ET21a;采用重组表达的VP1免疫BALB/c小鼠,将小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤SP2/0细胞融合并采用ELISA筛选... 目的制备肠道病毒71型(EV71)衣壳蛋白VP1特异性小鼠单克隆抗体(mAb)并检测其特异性。方法合成编码EV71-VP1的基因并克隆入原核表达质粒p ET21a;采用重组表达的VP1免疫BALB/c小鼠,将小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤SP2/0细胞融合并采用ELISA筛选可分泌抗VP1的m Ab的杂交瘤细胞株;将杂交瘤细胞注入小鼠腹腔,采用蛋白G亲和层析法从腹水中纯化mAb,并采用SDS-PAGE和Western blot法检测m Ab的纯度和特异性;EV71感染Vero细胞,采用间接免疫荧光细胞化学染色和Western blot法评估所制备m Ab识别EV71的能力。结果成功表达了EV71-VP1,制备出了4株杂交瘤细胞(6E、8D、9F和10C),杂交瘤细胞所分泌的小鼠m Ab均可识别EV71。结论成功制备了小鼠抗EV71衣壳蛋白VP1的m Ab。 展开更多
关键词 肠道病毒71型(ev71) 衣壳蛋白VP1 单克隆抗体(mAb)
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杨梅素体外抗EV71病毒作用的研究 被引量:3
13
作者 李文淼 张洋 王伟 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期508-513,共6页
目的初步探究杨梅素抗肠道病毒71型(EV71)的活性及其机制。方法采用EV71感染非洲绿猴肾细胞(Vero细胞)模型,采用致细胞病变(CPE)法和空斑实验观察杨梅素的抗病毒效果。以不同浓度的杨梅素处理细胞,结合结晶紫染色的方法检测杨梅素的细... 目的初步探究杨梅素抗肠道病毒71型(EV71)的活性及其机制。方法采用EV71感染非洲绿猴肾细胞(Vero细胞)模型,采用致细胞病变(CPE)法和空斑实验观察杨梅素的抗病毒效果。以不同浓度的杨梅素处理细胞,结合结晶紫染色的方法检测杨梅素的细胞毒性。以免疫印迹法检测杨梅素对VP1蛋白表达的影响。应用RT-PCR的方法评价杨梅素对VP1基因表达的影响。结果杨梅素在2.5~20μmol·L^-1的浓度下预处理病毒能够显著抑制EV71感染诱导的细胞死亡,且这种抑制作用具有剂量依赖性,IC50为5.6μmol·L^-1。与病毒组相比,杨梅素在2.5~20μmol·L^-1的浓度下还能够显著降低病毒滴度。免疫印迹和RT-PCR的结果显示,杨梅素还能够明显降低病毒衣壳蛋白VP1的基因和蛋白表达。结论杨梅素具有显著的体外抗EV71病毒活性。 展开更多
关键词 肠道病毒71 杨梅素 抗病毒 VP1蛋白 免疫印迹法 RT-PCR
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外周血中抗EV71 VP1特异性抗体分泌细胞检测方法的建立
14
作者 赵培培 陈建国 《中国血液流变学杂志》 CAS 2023年第1期115-119,共5页
目的应用酶联免疫斑点(ELISPOT)技术,建立一种检测外周血中抗EV71VP1特异性抗体分泌细胞的方法,并评价该方法在检测EV71感染诊断中的应用价值。方法无菌分离外周血中单个核细胞,建立一系列特异性ELISPOT检测外周血VP1抗原特异性抗体分... 目的应用酶联免疫斑点(ELISPOT)技术,建立一种检测外周血中抗EV71VP1特异性抗体分泌细胞的方法,并评价该方法在检测EV71感染诊断中的应用价值。方法无菌分离外周血中单个核细胞,建立一系列特异性ELISPOT检测外周血VP1抗原特异性抗体分泌细胞的参数:包括抗原最佳包被浓度、反应体系中细胞浓度以及HRP标记抗体工作浓度的确定,与ELISA比较,检测方法的敏感性和特异性。结果当抗原包被浓度为20μg/mL时,不同细胞浓度反应曲线最稳定;细胞浓度为5×10^(6)/mL时,不同包被浓度形成的斑点数适量,易于计数;HRP标记抗体释稀度为1:10000时,背景最浅容易识别。ELISPOT敏感性为90.0%,特异性96.7%。与ELISA检测抗EV71抗体方法比较,ELISPOT优于ELISA。结论该方法有较高的特异性和灵敏度,有望成为诊断EV71感染的一种理想方法。 展开更多
关键词 肠道病毒71 VP1蛋白 外周血 酶联免疫斑点
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EV71 infection correlates with viral IgG preexisting at pharyngolaryngeal mucosa in children
15
作者 Jingchang Xue Yaoming Li +3 位作者 Xiaoyi Xu Jie Yu Hu Yan Huimin Yan 《Virologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2015年第2期146-152,共7页
Enterovirus 71(EV71) infection causes severe central nervous system damage, particularly for children under the age of 5 years old, which remains a major public health burden worldwide. Clinical data released that chi... Enterovirus 71(EV71) infection causes severe central nervous system damage, particularly for children under the age of 5 years old, which remains a major public health burden worldwide. Clinical data released that children may be repeatedly infected by different members in enterovirus and get even worsen. Mucosa, especially epithelium of alimentary canal, was considered the primary site of EV71 infection. It has been elusive whether the preexsiting viral antibody in mucosa plays a role in EV71 infection. To answer this question, we respectively measured viral antibody response and EV71 RNA copy number of one hundred throat swab specimens from clinically confirmed EV71-infected children. The results released that low-level of mucosal Ig G antibody against EV71 broadly existed in young population. More importantly, it further elucidated that the children with mucosal preexsiting EV71 Ig G were prone to be infected, which suggested a former viral Ig G mediated enhancement of viral infection in vivo. 展开更多
关键词 ev71 clinical infection MUCOSAL Ig G VP1 VP2 3D
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2008年珠海肠道病毒71型分子流行病学研究 被引量:8
16
作者 张丽荣 林毅雄 +4 位作者 李红霞 魏泉德 方艳梅 郑予柯 张静涛 《实用预防医学》 CAS 2009年第1期54-57,共4页
目的通过扩增VP1节段的核苷酸序列,对2008年珠海暴发流行的EV 71进行种系进化分析。方法选取10例手足口病暴发流行中的EV71阳性病例标本用一对特异引物进行VP1全基因核苷酸序列扩增,由生物技术公司在ABI3730型自动测序仪上测序,序列结果... 目的通过扩增VP1节段的核苷酸序列,对2008年珠海暴发流行的EV 71进行种系进化分析。方法选取10例手足口病暴发流行中的EV71阳性病例标本用一对特异引物进行VP1全基因核苷酸序列扩增,由生物技术公司在ABI3730型自动测序仪上测序,序列结果用Claxter、DNA Star、Mega软件进行分析。结果本文的10株病毒与C基因型代表株比较接近,核苷酸同源性在88.2%~99.2%之间,氨基酸同源性在98.7%~99.7%之间;尤其与C4基因型最为相近,与C4基因型相比较核苷酸同源性在97.6%~99.2%之间,氨基酸同源性在99.3%~99.7%之间;而与A、B基因型代表株比较差异较大,核苷酸同源性只在81.8%~84.4%之间,氨基酸同源性在94.6%~98.0%之间;说明本文的10株病毒皆属于EV71病毒C基因型、C4亚型。结论珠海和新会的病毒株可能与阜阳和浙江分离的EV71病毒有相同的起源,均属于C4亚型,并且C4亚型病毒在中国大陆可能有较广泛的分布和传播,因此加强各地流行的EV71病毒基因特征分析,进而探索EV71病毒的可能进化途径,对于肠道病毒的基础研究和防范EV71在中国的大规模暴发与流行具有重要意义。 展开更多
关键词 肠道病毒71 VP1 分子流行病学
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临床手足口病肠道病毒71型VP1基因分析 被引量:4
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作者 王杨 李祎 +4 位作者 彭传梅 张胜 陈婉婷 卫波 高辉 《中国实验诊断学》 2018年第5期811-814,共4页
目的对临床手足口病(HFMD)的病原体肠道病毒71型(EV71)分离株VP1基因测序分析,从分子水平探究HFMD的分子遗传进化变迁情况。方法收集2015年1月至2016年12月期间在延安医院临床就诊疑似HFMD患者590例,采集粪便标本,用实时荧光PCR法进行E... 目的对临床手足口病(HFMD)的病原体肠道病毒71型(EV71)分离株VP1基因测序分析,从分子水平探究HFMD的分子遗传进化变迁情况。方法收集2015年1月至2016年12月期间在延安医院临床就诊疑似HFMD患者590例,采集粪便标本,用实时荧光PCR法进行EV71病毒核酸检测,对EV71检测阳性粪便样本进行逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增VP1目的基因,扩增阳性产物进行测序和序列比对,分析同源性并确定其所属基因亚型,并构建种系遗传进化发育树。结果共检出EV71型50例,检出率为8.47%(50/590例),2015年检出28例,2016年检出22例。50例中≤5岁35例,5-18岁13例,≥18岁2例;男性占64.00%(32/50例),女性36.00%(18/50例),女性患者中包括2例成人HFMD患者。检出的50株EV71毒株均为EV71C4亚型。检出的EV71毒株与国内北京和安徽以及马来西亚地区的毒株遗传距离为0.026,与浙江、广东地区毒株的遗传距离为1.52,与澳大利亚地区毒株的遗传距离为2.11。结论亲缘关系进化树显示,EV71毒株2年间未发生大的基因遗传变异。EV71毒株与北京、安徽以及马来西亚EV71流行毒株遗传距离较近,与浙江、广东等地的EV71流行毒株遗传距离较远,与澳大利亚分离的EV71毒株遗传距离最远。 展开更多
关键词 手足口病 肠道病毒71 VP1基因 DNA测序 系统发育树
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肠道病毒71型多表位-mGITRL真核表达质粒的构建、表达及其免疫原性研究 被引量:1
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作者 毛镇伟 刘海冰 +4 位作者 郑东 彭辉勇 王瑞 苏兆亮 陈建国 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期797-800,共4页
目的:构建肠道病毒71型(EV71)多表位-mGITRL真核表达质粒并对其免疫原性进行研究。方法:串联已证实的VP1表位并合成(VP1’);PCR扩增获得mGITRL,克隆至真核共表达载体pIRES中。对重组质粒进行测序鉴定后,以脂质体介导法转染至COS7细胞,通... 目的:构建肠道病毒71型(EV71)多表位-mGITRL真核表达质粒并对其免疫原性进行研究。方法:串联已证实的VP1表位并合成(VP1’);PCR扩增获得mGITRL,克隆至真核共表达载体pIRES中。对重组质粒进行测序鉴定后,以脂质体介导法转染至COS7细胞,通过Western blot方法检测其在COS7细胞中的表达。将构建好的重组质粒免疫小鼠,应用ELISA法检测小鼠血清中抗VP1的抗体滴度。结果:PCR扩增出目的基因,测序证实真核共表达载体pIRES-VP1’-mGITRL构建成功,Western blot结果显示目的基因在COS7细胞和肌细胞中过表达。小鼠血清中检测出高滴度的抗VP1抗体。结论:成功扩增出目的基因并构建VP1表位的重组真核共表达载体pIRES-VP1’-mGITRL,在COS7细胞和肌细胞中过表达,并获得高滴度的抗VP1抗体。 展开更多
关键词 ev71 VP1 mGITRL 表位
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2008~2011年贵州省肠道病毒71型分子流行特征分析 被引量:7
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作者 阎岩 郭军 +2 位作者 周敬祝 唐光鹏 王定明 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期176-179,共4页
为研究贵州省肠道病毒71型(EV71)的基因型和分子流行特征,监测了全省报告的手足口病病例,选择2008年以来贵州全省部分EV71阳性标本进行病毒分离及VP1全基因测序(含重症病例、死亡病例和轻症病例),与国内外近年流行毒株及各亚型代表株进... 为研究贵州省肠道病毒71型(EV71)的基因型和分子流行特征,监测了全省报告的手足口病病例,选择2008年以来贵州全省部分EV71阳性标本进行病毒分离及VP1全基因测序(含重症病例、死亡病例和轻症病例),与国内外近年流行毒株及各亚型代表株进行基因比对,分析同源性及基因亚型。2008年、2009年及2011年贵州省流行的主要病原为EV71,获得109株参比序列毒株的同源性为95.3%~99.7%,贵州省毒株与邻省及山东省、上海市、南京市、吉林省和宁波市代表株的同源性最高,轻症与重死病例的核苷酸及氨基酸序列无明显的特征性差异,未出现不同基因亚型病毒的输入或改变,仍属C4a亚型。同地区、同年度内的核苷酸序列差异小于跨地区、跨年度差异。 展开更多
关键词 肠道病毒71型(ev71) 手足口病 VP1基因 贵州
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