目的探讨长链非编码RNA EPB41L4A-AS1通过AKT调控子宫颈癌细胞自噬的作用和机制。方法运用小干扰RNA(siRNA)敲低子宫颈癌细胞HeLa中的EPB41L4A-AS1后,应用Western blot技术检测p62、LC3和AKT的蛋白表达水平,qRT-PCR检测AKT1和AKT2的mRN...目的探讨长链非编码RNA EPB41L4A-AS1通过AKT调控子宫颈癌细胞自噬的作用和机制。方法运用小干扰RNA(siRNA)敲低子宫颈癌细胞HeLa中的EPB41L4A-AS1后,应用Western blot技术检测p62、LC3和AKT的蛋白表达水平,qRT-PCR检测AKT1和AKT2的mRNA表达水平。在GFP-LC3稳定过表达的HeLa细胞中转染siEPB41L4A-AS1,利用共聚焦扫描显微镜检测外源性LC3形成的自噬小体的变化。在HeLa细胞中转染siEPB41L4A-AS1,利用免疫荧光技术和荧光显微镜检测内源性LC3形成的自噬小体的变化。基因集富集(gene set enrichment analysis,GSEA)分析AKT和自噬通路在EPB41L4A-AS1高表达组和低表达组子宫颈癌患者中的富集情况。结果与对照组相比,敲低EPB41L4A-AS148 h后HeLa细胞中p62表达水平显著下降(10%血清组:1.00±0 vs 0.39±0.17,无血清组:1.00±0 vs 0.55±0.14,P<0.05);LC3-Ⅱ与LC3-Ⅰ比值显著上升(10%血清组:1.00±0 vs 1.92±0.19,无血清组:1.00±0 vs 14.35±3.89,P<0.05);AKT1的mRNA(P<0.01)和蛋白(1.00±0 vs 1.82±0.14,P<0.01)水平均显著上调。GFP-LC3稳定过表达的HeLa细胞和未经处理的HeLa细胞在敲低EPB41L4A-AS1后,细胞内自噬小体的数量显著增多(P<0.05),且体积增大(P<0.05)。GSEA分析发现AKT和自噬通路在EPB41L4A-AS1低表达组子宫颈癌患者中显著富集。结论EPB41L4A-AS1可能通过AKT抑制子宫颈癌细胞的自噬水平。展开更多
文摘目的探讨长链非编码RNA EPB41L4A-AS1通过AKT调控子宫颈癌细胞自噬的作用和机制。方法运用小干扰RNA(siRNA)敲低子宫颈癌细胞HeLa中的EPB41L4A-AS1后,应用Western blot技术检测p62、LC3和AKT的蛋白表达水平,qRT-PCR检测AKT1和AKT2的mRNA表达水平。在GFP-LC3稳定过表达的HeLa细胞中转染siEPB41L4A-AS1,利用共聚焦扫描显微镜检测外源性LC3形成的自噬小体的变化。在HeLa细胞中转染siEPB41L4A-AS1,利用免疫荧光技术和荧光显微镜检测内源性LC3形成的自噬小体的变化。基因集富集(gene set enrichment analysis,GSEA)分析AKT和自噬通路在EPB41L4A-AS1高表达组和低表达组子宫颈癌患者中的富集情况。结果与对照组相比,敲低EPB41L4A-AS148 h后HeLa细胞中p62表达水平显著下降(10%血清组:1.00±0 vs 0.39±0.17,无血清组:1.00±0 vs 0.55±0.14,P<0.05);LC3-Ⅱ与LC3-Ⅰ比值显著上升(10%血清组:1.00±0 vs 1.92±0.19,无血清组:1.00±0 vs 14.35±3.89,P<0.05);AKT1的mRNA(P<0.01)和蛋白(1.00±0 vs 1.82±0.14,P<0.01)水平均显著上调。GFP-LC3稳定过表达的HeLa细胞和未经处理的HeLa细胞在敲低EPB41L4A-AS1后,细胞内自噬小体的数量显著增多(P<0.05),且体积增大(P<0.05)。GSEA分析发现AKT和自噬通路在EPB41L4A-AS1低表达组子宫颈癌患者中显著富集。结论EPB41L4A-AS1可能通过AKT抑制子宫颈癌细胞的自噬水平。
