目的探讨蛋白质EPB41(erythrocyte membrane protein band 4.1)对食管癌细胞恶性表型的影响,并基于Wnt/β-catenin信号通路介导的脂肪酸氧化(fatty acid oxidation,FAO)探讨可能的潜在机制。方法将对数生长期的KYSE30细胞及KYSE150细胞...目的探讨蛋白质EPB41(erythrocyte membrane protein band 4.1)对食管癌细胞恶性表型的影响,并基于Wnt/β-catenin信号通路介导的脂肪酸氧化(fatty acid oxidation,FAO)探讨可能的潜在机制。方法将对数生长期的KYSE30细胞及KYSE150细胞各分为5组,检测mRNA和蛋白质表达、细胞增殖和迁移率、ATP水平、NADPH/NADP^(+)比率、活性氧(ROS)和GSH水平。结果在KYSE30细胞中,转染EPB41 siRNA组细胞克隆数、细胞迁移率、ATP水平、NADPH/NADP^(+)比率、ROS水平、细胞中Wnt3a、β-catenin和核β-catenin蛋白质表达均明显增加(P<0.05),且脂肪酸氧化抑制剂和Wnt通路抑制剂可逆转EPB41的作用;在KYSE150细胞中,转染EPB41过表达载体oe-EPB41组细胞克隆数、细胞迁移率、ATP水平、NADPH/NADP^(+)比率、ROS水平、细胞中Wnt3a、β-catenin和核β-catenin蛋白质表达均明显降低(P<0.05),且脂肪酸氧化诱导剂和Wnt通路激活剂可逆转EPB41的作用。结论EPB41在食管癌细胞中的表达下调,EPB41过表达可通过抑制FAO途径来抑制食管癌细胞的增殖和迁移,这可能是通过调控Wnt/β-catenin信号通路转导来实现。展开更多
目的探讨Erythrocyte Membrane Protein Band 4.1 Like 3(EPB41L3)基因对胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法分析TCGA数据库中EPB41L3在胶质瘤和正常组织中的表达差异及预后。Western blotting检测人正常胶质细胞(NHA)和人胶质瘤...目的探讨Erythrocyte Membrane Protein Band 4.1 Like 3(EPB41L3)基因对胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法分析TCGA数据库中EPB41L3在胶质瘤和正常组织中的表达差异及预后。Western blotting检测人正常胶质细胞(NHA)和人胶质瘤细胞中(U251,LN229、SNB19)的EPB41L3蛋白表达。U251细胞过表达EPB41L3后,CCK-8法、EDU法测定细胞增殖,划痕实验和Transwell实验测定细胞迁移和侵袭,蛋白印迹法测定细胞AKT磷酸化水平及上皮间质化(EMT)相关蛋白的表达。结果EPB41L3在胶质瘤组织中较正常组织显著低表达,Kaplan-Meier生存分析显示高表达EPB41L3组OS及PFS更高。胶质瘤细胞中的EPB41L3的蛋白表达水平明显降低,过表达能显著提高EPB41L3表达。过表达EPB41L3组与对照组相比细胞的增殖活性、迁移率、侵袭率均显著降低,p-AKT蛋白表达水平均显著下调,N-cadherin表达量显著降低,E-cadherin表达量显著上调。结论EPB41L3在胶质瘤细胞中表达下调,过表达EPB41L3能够降低胶质瘤细胞的AKT磷酸化水平,以及上皮间质化,发挥抑癌基因的作用。展开更多
目的探讨长链非编码RNA EPB41L4A-AS1通过AKT调控子宫颈癌细胞自噬的作用和机制。方法运用小干扰RNA(siRNA)敲低子宫颈癌细胞HeLa中的EPB41L4A-AS1后,应用Western blot技术检测p62、LC3和AKT的蛋白表达水平,qRT-PCR检测AKT1和AKT2的mRN...目的探讨长链非编码RNA EPB41L4A-AS1通过AKT调控子宫颈癌细胞自噬的作用和机制。方法运用小干扰RNA(siRNA)敲低子宫颈癌细胞HeLa中的EPB41L4A-AS1后,应用Western blot技术检测p62、LC3和AKT的蛋白表达水平,qRT-PCR检测AKT1和AKT2的mRNA表达水平。在GFP-LC3稳定过表达的HeLa细胞中转染siEPB41L4A-AS1,利用共聚焦扫描显微镜检测外源性LC3形成的自噬小体的变化。在HeLa细胞中转染siEPB41L4A-AS1,利用免疫荧光技术和荧光显微镜检测内源性LC3形成的自噬小体的变化。基因集富集(gene set enrichment analysis,GSEA)分析AKT和自噬通路在EPB41L4A-AS1高表达组和低表达组子宫颈癌患者中的富集情况。结果与对照组相比,敲低EPB41L4A-AS148 h后HeLa细胞中p62表达水平显著下降(10%血清组:1.00±0 vs 0.39±0.17,无血清组:1.00±0 vs 0.55±0.14,P<0.05);LC3-Ⅱ与LC3-Ⅰ比值显著上升(10%血清组:1.00±0 vs 1.92±0.19,无血清组:1.00±0 vs 14.35±3.89,P<0.05);AKT1的mRNA(P<0.01)和蛋白(1.00±0 vs 1.82±0.14,P<0.01)水平均显著上调。GFP-LC3稳定过表达的HeLa细胞和未经处理的HeLa细胞在敲低EPB41L4A-AS1后,细胞内自噬小体的数量显著增多(P<0.05),且体积增大(P<0.05)。GSEA分析发现AKT和自噬通路在EPB41L4A-AS1低表达组子宫颈癌患者中显著富集。结论EPB41L4A-AS1可能通过AKT抑制子宫颈癌细胞的自噬水平。展开更多
文摘目的探讨蛋白质EPB41(erythrocyte membrane protein band 4.1)对食管癌细胞恶性表型的影响,并基于Wnt/β-catenin信号通路介导的脂肪酸氧化(fatty acid oxidation,FAO)探讨可能的潜在机制。方法将对数生长期的KYSE30细胞及KYSE150细胞各分为5组,检测mRNA和蛋白质表达、细胞增殖和迁移率、ATP水平、NADPH/NADP^(+)比率、活性氧(ROS)和GSH水平。结果在KYSE30细胞中,转染EPB41 siRNA组细胞克隆数、细胞迁移率、ATP水平、NADPH/NADP^(+)比率、ROS水平、细胞中Wnt3a、β-catenin和核β-catenin蛋白质表达均明显增加(P<0.05),且脂肪酸氧化抑制剂和Wnt通路抑制剂可逆转EPB41的作用;在KYSE150细胞中,转染EPB41过表达载体oe-EPB41组细胞克隆数、细胞迁移率、ATP水平、NADPH/NADP^(+)比率、ROS水平、细胞中Wnt3a、β-catenin和核β-catenin蛋白质表达均明显降低(P<0.05),且脂肪酸氧化诱导剂和Wnt通路激活剂可逆转EPB41的作用。结论EPB41在食管癌细胞中的表达下调,EPB41过表达可通过抑制FAO途径来抑制食管癌细胞的增殖和迁移,这可能是通过调控Wnt/β-catenin信号通路转导来实现。
文摘目的探讨Erythrocyte Membrane Protein Band 4.1 Like 3(EPB41L3)基因对胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法分析TCGA数据库中EPB41L3在胶质瘤和正常组织中的表达差异及预后。Western blotting检测人正常胶质细胞(NHA)和人胶质瘤细胞中(U251,LN229、SNB19)的EPB41L3蛋白表达。U251细胞过表达EPB41L3后,CCK-8法、EDU法测定细胞增殖,划痕实验和Transwell实验测定细胞迁移和侵袭,蛋白印迹法测定细胞AKT磷酸化水平及上皮间质化(EMT)相关蛋白的表达。结果EPB41L3在胶质瘤组织中较正常组织显著低表达,Kaplan-Meier生存分析显示高表达EPB41L3组OS及PFS更高。胶质瘤细胞中的EPB41L3的蛋白表达水平明显降低,过表达能显著提高EPB41L3表达。过表达EPB41L3组与对照组相比细胞的增殖活性、迁移率、侵袭率均显著降低,p-AKT蛋白表达水平均显著下调,N-cadherin表达量显著降低,E-cadherin表达量显著上调。结论EPB41L3在胶质瘤细胞中表达下调,过表达EPB41L3能够降低胶质瘤细胞的AKT磷酸化水平,以及上皮间质化,发挥抑癌基因的作用。
文摘目的探讨长链非编码RNA EPB41L4A-AS1通过AKT调控子宫颈癌细胞自噬的作用和机制。方法运用小干扰RNA(siRNA)敲低子宫颈癌细胞HeLa中的EPB41L4A-AS1后,应用Western blot技术检测p62、LC3和AKT的蛋白表达水平,qRT-PCR检测AKT1和AKT2的mRNA表达水平。在GFP-LC3稳定过表达的HeLa细胞中转染siEPB41L4A-AS1,利用共聚焦扫描显微镜检测外源性LC3形成的自噬小体的变化。在HeLa细胞中转染siEPB41L4A-AS1,利用免疫荧光技术和荧光显微镜检测内源性LC3形成的自噬小体的变化。基因集富集(gene set enrichment analysis,GSEA)分析AKT和自噬通路在EPB41L4A-AS1高表达组和低表达组子宫颈癌患者中的富集情况。结果与对照组相比,敲低EPB41L4A-AS148 h后HeLa细胞中p62表达水平显著下降(10%血清组:1.00±0 vs 0.39±0.17,无血清组:1.00±0 vs 0.55±0.14,P<0.05);LC3-Ⅱ与LC3-Ⅰ比值显著上升(10%血清组:1.00±0 vs 1.92±0.19,无血清组:1.00±0 vs 14.35±3.89,P<0.05);AKT1的mRNA(P<0.01)和蛋白(1.00±0 vs 1.82±0.14,P<0.01)水平均显著上调。GFP-LC3稳定过表达的HeLa细胞和未经处理的HeLa细胞在敲低EPB41L4A-AS1后,细胞内自噬小体的数量显著增多(P<0.05),且体积增大(P<0.05)。GSEA分析发现AKT和自噬通路在EPB41L4A-AS1低表达组子宫颈癌患者中显著富集。结论EPB41L4A-AS1可能通过AKT抑制子宫颈癌细胞的自噬水平。
