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非洲猪瘟EP364R蛋白的原核表达及间接ELISA方法的建立 被引量：3
1
作者 卢丽飞 党佳佳 +4 位作者 吴青萍 邹延林 奚媖牡 耿鑫梅 黄伟坚 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2023年第5期79-86,共8页
本研究根据非洲猪瘟病毒(ASFV)Georgia 2007/1毒株的EP364R基因序列(GenBank登录号:FR682468.1)合成EP364R基因序列,通过PCR技术扩增目的基因EP364R,并克隆到pET-32a(+)载体,成功构建了重组质粒pET-32a-EP364R,鉴定正确后将其转化至大... 本研究根据非洲猪瘟病毒(ASFV)Georgia 2007/1毒株的EP364R基因序列(GenBank登录号:FR682468.1)合成EP364R基因序列,通过PCR技术扩增目的基因EP364R,并克隆到pET-32a(+)载体,成功构建了重组质粒pET-32a-EP364R,鉴定正确后将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中成功诱导表达,纯化后的重组蛋白利用SDS-PAGE、Western blot进行鉴定。以纯化的pET-32a-EP364R重组蛋白为诊断抗原,成功建立了检测ASFV的间接ELISA抗体检测方法。将建立的间接ELISA检测方法与法国ID-Vet非洲猪瘟抗体试剂盒分别对临床84份血清进行检测,总符合率达89.3%,表明该方法具有良好的特异性、敏感性和重复性。为ASFV的快速诊断、流行病学调查和血清学抗体检测提供了快速实用的检测手段。 展开更多
关键词 非洲猪瘟 间接ELISA ep364r 原核表达
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非洲猪瘟病毒EP364R蛋白在杆状病毒表达系统中的表达及鉴定
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作者 杨扬 张妍 +10 位作者 张俊杰 管志欣 李昱昊 孙卿 李宗杰 李蓓蓓 刘珂 邵东华 邱亚峰 魏建超 马志永 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2023年第6期146-150,共5页
非洲猪瘟病毒(ASFV)EP364R蛋白是ASFV的ERCC4核酸酶结构域。为了获得具有免疫原性的EP364R蛋白,本研究将ASFV EP364R基因构建到杆状病毒表达载体上,将重组质粒转座DH10Bac感受态中,经过3次蓝白斑筛选,获得重组BacmidEP364R质粒,将Bacmid... 非洲猪瘟病毒(ASFV)EP364R蛋白是ASFV的ERCC4核酸酶结构域。为了获得具有免疫原性的EP364R蛋白,本研究将ASFV EP364R基因构建到杆状病毒表达载体上,将重组质粒转座DH10Bac感受态中,经过3次蓝白斑筛选,获得重组BacmidEP364R质粒,将Bacmid-EP364R质粒转染至细胞中,收获上清,在正常细胞中传三代,以获得重组杆状病毒rBac-EP364R。使用Western blot和间接免疫荧光(IFA)实验鉴定重组蛋白得到表达及其免疫原性。本研究结果显示,在感染的细胞可检测到EP364R蛋白的表达,并可被His单克隆抗体特异性识别。结果表明杆状病毒系统成功表达EP364R蛋白并具有良好的反应活性,为后续开展ASFV血清学诊断和亚单位疫苗的研究奠定基础。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 ep364r 杆状病毒表达 免疫原性
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