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一种快速鉴定Femu2p-C_2H_2蛋白与TTGGGTBOX相互作用的EMSA实验法
被引量：
1
1
作者
费小雯
吴小霞
+1 位作者
范新照
邓晓东
《热带生物学报》
2013年第4期365-368,共4页
分析了电泳迁移率(EMSA)技术研究进展及其优缺点,并在此基础上进行实验方法改进。通过检测TTGGGT Box及其突变体与Femu2p-C2H2蛋白的相互作用,探索并总结出一套快速、简便、经济适用的EMSA实验法,该方法可用于DNA结合蛋白和其相关的DNA...
分析了电泳迁移率(EMSA)技术研究进展及其优缺点,并在此基础上进行实验方法改进。通过检测TTGGGT Box及其突变体与Femu2p-C2H2蛋白的相互作用,探索并总结出一套快速、简便、经济适用的EMSA实验法,该方法可用于DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的特异性竞争反应分析。
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关键词
电泳迁移率(
emsa
)实验法
Femu2p-C2H2蛋白
TTGGGT
Box
特异性竞争反应
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职称材料
金黄色葡萄球菌双组分系统反应调节蛋白AgrA的原核表达、纯化及活性鉴定
被引量：
2
2
作者
张旭宁
权春善
+3 位作者
廖颖玲
柳科欢
熊文
范圣第
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第5期32-40,共9页
AgrA作为金黄色葡萄球菌双组分信号转导系统(two-component signal transduction system,TCST)的反应调节因子,能调控细菌毒力因子的表达,在金黄色葡萄球菌致病过程中起着重要的作用。采用无限制克隆法构建AgrA表达载体,在AgrA蛋白的C...
AgrA作为金黄色葡萄球菌双组分信号转导系统(two-component signal transduction system,TCST)的反应调节因子,能调控细菌毒力因子的表达,在金黄色葡萄球菌致病过程中起着重要的作用。采用无限制克隆法构建AgrA表达载体,在AgrA蛋白的C端融合绿色荧光蛋白(GFP)标签,通过实时监测GFP的荧光强度来快速检测重组蛋白的表达水平。首先利用单因素实验,筛选出宿主菌株BL21-(DE3)-PlysS;其次,结合Box-Behnken试验设计,筛选出最优蛋白质表达条件:诱导时间为22h、转速为222r/min、诱导剂浓度为0.5mmol/L,AgrA产量达到5.56mg/L。最后,基于AgrA蛋白LytTR区域的非放射性凝胶阻滞实验(non-radioactive electrophoretic mobility shift assay,EMSA)验证了AgrA的生物活性。提出了反应调节蛋白AgrA在大肠杆菌高效可溶性表达的策略,为双组分信号转导系统的体外研究奠定基础,也为其他反应调节蛋白的可溶性表达与分离纯化提供了一个可行借鉴。
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关键词
金黄色葡萄球菌
AgrA
GFP
响应面分析
emsa
原文传递
题名
一种快速鉴定Femu2p-C_2H_2蛋白与TTGGGTBOX相互作用的EMSA实验法
被引量：
1
1
作者
费小雯
吴小霞
范新照
邓晓东
机构
海南医学院基础医学部
中国热带农业科学院热带生物技术研究所
出处
《热带生物学报》
2013年第4期365-368,共4页
基金
国家自然科学基金项目(31360051
31160050
+4 种基金
30860028)
海南重大科技项目(ZDZX2013023-1)
中央级公益性科研院所基本科研业务费(1630052013009
ITBB110507
130305)
文摘
分析了电泳迁移率(EMSA)技术研究进展及其优缺点,并在此基础上进行实验方法改进。通过检测TTGGGT Box及其突变体与Femu2p-C2H2蛋白的相互作用,探索并总结出一套快速、简便、经济适用的EMSA实验法,该方法可用于DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的特异性竞争反应分析。
关键词
电泳迁移率(
emsa
)实验法
Femu2p-C2H2蛋白
TTGGGT
Box
特异性竞争反应
Keywords
emsa method
Femu2p-C2H2 protein
TFGGGT Box
specific competitive response
分类号
Q816 [生物学—生物工程]
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职称材料
题名
金黄色葡萄球菌双组分系统反应调节蛋白AgrA的原核表达、纯化及活性鉴定
被引量：
2
2
作者
张旭宁
权春善
廖颖玲
柳科欢
熊文
范圣第
机构
大连工业大学生物工程学院
大连民族学院生物技术与资源利用国家民委一教育部重点实验室
大连民族学院生命科学学院
出处
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第5期32-40,共9页
文摘
AgrA作为金黄色葡萄球菌双组分信号转导系统(two-component signal transduction system,TCST)的反应调节因子,能调控细菌毒力因子的表达,在金黄色葡萄球菌致病过程中起着重要的作用。采用无限制克隆法构建AgrA表达载体,在AgrA蛋白的C端融合绿色荧光蛋白(GFP)标签,通过实时监测GFP的荧光强度来快速检测重组蛋白的表达水平。首先利用单因素实验,筛选出宿主菌株BL21-(DE3)-PlysS;其次,结合Box-Behnken试验设计,筛选出最优蛋白质表达条件:诱导时间为22h、转速为222r/min、诱导剂浓度为0.5mmol/L,AgrA产量达到5.56mg/L。最后,基于AgrA蛋白LytTR区域的非放射性凝胶阻滞实验(non-radioactive electrophoretic mobility shift assay,EMSA)验证了AgrA的生物活性。提出了反应调节蛋白AgrA在大肠杆菌高效可溶性表达的策略,为双组分信号转导系统的体外研究奠定基础,也为其他反应调节蛋白的可溶性表达与分离纯化提供了一个可行借鉴。
关键词
金黄色葡萄球菌
AgrA
GFP
响应面分析
emsa
Keywords
Staphylococcus aureus
AgrA
GFP
Response surface
method
emsa
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
一种快速鉴定Femu2p-C_2H_2蛋白与TTGGGTBOX相互作用的EMSA实验法
费小雯
吴小霞
范新照
邓晓东
《热带生物学报》
2013
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
金黄色葡萄球菌双组分系统反应调节蛋白AgrA的原核表达、纯化及活性鉴定
张旭宁
权春善
廖颖玲
柳科欢
熊文
范圣第
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2015
2
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参考文献
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