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非放射性EMSA法检测AP-1蛋白DNA结合活性实验优化 被引量:3
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作者 房军帆 杜俊英 +1 位作者 梁宜 方剑乔 《长春中医药大学学报》 2014年第4期600-603,共4页
目的探索一种方案简便,仪器要求较低,且有效的非放射性凝胶电泳迁移率(EMSA)的检测方法。方法以AP-1蛋白为实验对象,自制退火缓冲液合成生物素标记AP-1探针,抽提炎症大鼠脊髓背角处核蛋白(无需纯化),取10μg核蛋白与探针室温反应30 min... 目的探索一种方案简便,仪器要求较低,且有效的非放射性凝胶电泳迁移率(EMSA)的检测方法。方法以AP-1蛋白为实验对象,自制退火缓冲液合成生物素标记AP-1探针,抽提炎症大鼠脊髓背角处核蛋白(无需纯化),取10μg核蛋白与探针室温反应30 min。小型聚丙烯酰胺非变性凝胶电泳后将探针湿转至正电子加强尼龙膜上,紫外交联,ECL显影。通过正常探针与变性探针的竞争实验,证明方法的可靠性。结果自制退火缓冲液成功合成生物素标记AP-1探针;炎症大鼠脊髓背角处AP-1蛋白与正常探针的结合后产生明显滞后条带,且结合力远高于变异探针。结论优化后的非放射性EMSA方案,有效降低了实验花费和仪器要求,且结果可信。 展开更多
关键词 凝胶电泳迁移率(emsa) AP-1 凝胶电泳 实验优化
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EMSA法分析STAT5信号分子与周期蛋白cyclin D1的相互作用 被引量:1
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作者 郭德煌 邱丽玲 +3 位作者 柳晓兰 罗庆良 董波 毛秉智 《生物技术通报》 CAS CSCD 2001年第6期31-33,共3页
利用蛋白凝胶电脉迁移率变动分析法 (EMSA)分析STAT5信号分子与周期蛋白cyclinD1的相互作用。探针位于cyclinD1启动子区的 - 2 48到 - 2 2 0之间 ,该区域包含SATAT5与cyclinD1的结合序列TTN5AA。STAT5与cyclinD1共形成a、b两条蛋白滞后... 利用蛋白凝胶电脉迁移率变动分析法 (EMSA)分析STAT5信号分子与周期蛋白cyclinD1的相互作用。探针位于cyclinD1启动子区的 - 2 48到 - 2 2 0之间 ,该区域包含SATAT5与cyclinD1的结合序列TTN5AA。STAT5与cyclinD1共形成a、b两条蛋白滞后带 ,当用点突变的探针作用时 ,仅剩下滞后带a。 展开更多
关键词 凝胶电脉迁移率变动分析 STAT5 周期蛋白D1 信号分子 相互作用 细胞 emsa
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一种快速鉴定Femu2p-C_2H_2蛋白与TTGGGTBOX相互作用的EMSA实验法 被引量:1
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作者 费小雯 吴小霞 +1 位作者 范新照 邓晓东 《热带生物学报》 2013年第4期365-368,共4页
分析了电泳迁移率(EMSA)技术研究进展及其优缺点,并在此基础上进行实验方法改进。通过检测TTGGGT Box及其突变体与Femu2p-C2H2蛋白的相互作用,探索并总结出一套快速、简便、经济适用的EMSA实验法,该方法可用于DNA结合蛋白和其相关的DNA... 分析了电泳迁移率(EMSA)技术研究进展及其优缺点,并在此基础上进行实验方法改进。通过检测TTGGGT Box及其突变体与Femu2p-C2H2蛋白的相互作用,探索并总结出一套快速、简便、经济适用的EMSA实验法,该方法可用于DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的特异性竞争反应分析。 展开更多
关键词 电泳迁移率(emsa)实验法 Femu2p-C2H2蛋白 TTGGGT Box 特异性竞争反应
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播娘蒿转录因子DsCBF1突变体的构建及其蛋白质的EMSA试验分析 被引量:3
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作者 陈麒名 常菲菲 +5 位作者 李茜 刘博 田磊 陈天盈 徐辉 乔代蓉 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期179-183,共5页
CBF(C-repeat binding factor)是调控植物冷驯化相关基因表达的调控转录激活因子,可与下游冷应答基因启动子的核心序列CBT/DRE元件(CCGAC)特异性地结合,启动耐寒基因的表达,提高植物的抗寒能力.为揭示播娘蒿(Descurainia sophia)的抗寒... CBF(C-repeat binding factor)是调控植物冷驯化相关基因表达的调控转录激活因子,可与下游冷应答基因启动子的核心序列CBT/DRE元件(CCGAC)特异性地结合,启动耐寒基因的表达,提高植物的抗寒能力.为揭示播娘蒿(Descurainia sophia)的抗寒机制,研究播娘蒿转录因子Ds CBF1蛋白AP2区域编码氨基酸对启动下游抗寒基因表达的作用.首先分析Ds CBF1蛋白AP2区域编码氨基酸的疏水性,设计重叠延伸PCR引物,定点突变Ds CBF1基因;然后构建p ET32a-Ds CBF1突变体原核表达载体,通过冻融法转化入宿主大肠杆菌BL21(DE3)中,进行原核表达,并通过镍离子亲和层析纯化Ds CBF1突变体蛋白;最后利用化学发光法EMSA试验(Electrophoretic mobility shift assay)方法分析Ds CBF1蛋白与含有CRT/DRE元件的DNA探针之间的相互作用.EMSA试验分析显示,播娘蒿Ds CBF1的AP2区域的57位苯丙氨酸F(TTT)和68位缬氨酸V(GTT)分别突变为精氨酸R(CGT)和谷氨酸E(GAA),导致播娘蒿顺式调控因子Ds CBF1蛋白与下游冷响应基因的CRT/DRE元件结合效率出现明显下降趋势,说明播娘蒿Ds CBF1蛋白AP2区域编码氨基酸位点的突变影响了播娘蒿的抗寒能力.本研究表明播娘蒿Ds CBF1的AP2区域的57位苯丙氨酸F(TTT)和68位缬氨酸V(GTT)位点对于播娘蒿的冷驯化具有十分重要的作用. 展开更多
关键词 播娘蒿 CRT/DRE元件 AP2区域 重叠延伸PCR p ET32a-Ds CBF1突变体 emsa
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对组织有效实施EMSA的基本条件
5
作者 王建刚 《信息技术与标准化》 2002年第2期48-50,共3页
ISO14000是各类组织实施环境管理的重要工具。如何依据此标准建立组织的EMS并保证其有效性,是摆在组织面前的问题。为此,本文在ISO14000系列标准的基础上结合认证实践,从四个方面探讨了组织有效实施EMSA的基本条件。
关键词 环境管理体系 ISO14000 国际标准 emsa
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银染法用于EMSA分析检测三链核酸形成
6
作者 周钢 朱敏 胡维新 《实用预防医学》 CAS 2003年第4期439-441,共3页
目的 探讨银染法在三链形成的电泳迁移率改变分析 (EMSA)中的可行性 ,从而为三链核酸研究提供有效的非同位素检测方法。 方法 三链形成反应后进行 EMSA分析 ,然后用银染显示电泳形成的 DNA区带。 结果 银染法显示出三链的 EMSA滞后... 目的 探讨银染法在三链形成的电泳迁移率改变分析 (EMSA)中的可行性 ,从而为三链核酸研究提供有效的非同位素检测方法。 方法 三链形成反应后进行 EMSA分析 ,然后用银染显示电泳形成的 DNA区带。 结果 银染法显示出三链的 EMSA滞后带 ,并揭示三链形成的平台效应。 结论 本文首次表明银染法可用于三链形成的 EMSA分析快速检测 ,且 SOX9基因内含子 展开更多
关键词 三链核酸 银染法 电泳迁移率改变分析
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基于EMSA-YOLOv5的息烽县中坝水库裂缝检测 被引量:1
7
作者 李其吉 《水利科技与经济》 2024年第11期157-160,共4页
水库大坝表面裂缝检测,对于确保水库结构安全和功能完整性至关重要。研究提出一种新的裂缝检测方法,该方法结合EMSA(高效多头自注意力模块)与YOLOv5目标检测框架,创建一个专门用于检测大坝裂缝的模型。通过利用EMSA的细致注意力机制,该... 水库大坝表面裂缝检测,对于确保水库结构安全和功能完整性至关重要。研究提出一种新的裂缝检测方法,该方法结合EMSA(高效多头自注意力模块)与YOLOv5目标检测框架,创建一个专门用于检测大坝裂缝的模型。通过利用EMSA的细致注意力机制,该模型能够更精确地捕捉裂缝特征,并提高在复杂背景下的识别率。结果表明,该模型在检测精度方面展示出良好性能。研究结果可为大坝、水库等水利工程设施提供可靠的裂缝监测工具,同时也为水库安全监控系统的发展开辟新的技术路径。 展开更多
关键词 裂缝分割 深度学习 emsa YOLOv5 中坝水库
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融合全局特征和局部特征的行人遮挡目标检测 被引量:1
8
作者 徐升 苏庆华 +2 位作者 万开政 戚翔宇 张智超 《计算机科学与应用》 2025年第1期28-36,共9页
在遮挡图像中,行人目标通常被其他物体部分或完全遮挡,导致其外观特征不完整、边缘模糊,甚至与背景或遮挡物混淆。行人遮挡目标的检测需要算法能够在特征缺失的情况下,仍然准确识别和定位目标。为了解决这一挑战,本文基于YOLOv10提出一... 在遮挡图像中,行人目标通常被其他物体部分或完全遮挡,导致其外观特征不完整、边缘模糊,甚至与背景或遮挡物混淆。行人遮挡目标的检测需要算法能够在特征缺失的情况下,仍然准确识别和定位目标。为了解决这一挑战,本文基于YOLOv10提出一种融合多尺度自注意力机制(Efficient Multi-directional Self-Attention, EMSA)的多尺度感知能力的YOLOv10改进方法。首先在YOLOv10中的C2f中融合MSDA注意力机制,增强了模型在多尺度上的特征捕捉能力,提升了对不同尺度遮挡目标的检测能力,通过自适应地加权不同通道的特征,提高了对遮挡目标特征的关注;其次基于动态聚焦机制引入新的损失函数Focaleriou,动态调整损失焦点,提高对不同尺度目标的检测能力,同时改善边界框回归损失收敛速度,之后添加了小目标检测头,增强小遮挡目标的特征提取能力;最后使用公开数据集Citypersons进行消融实验。结果表明,该融合了MSDA注意力机制的模型平均精度(Map@0.5)达到了62.3%,相较于官方YOLOv10n提升了2.2%。实验结果表明该EMSA注意力能够有效改进行人遮挡目标的检测,满足自动驾驶、监控等应用场景下的行人遮挡场景的检测需求。In occluded images, pedestrian targets are often partially or completely blocked by other objects, leading to incomplete appearance features, blurred edges, and even confusion with the background or occluding objects. Detecting occluded pedestrian targets requires algorithms capable of accurately recognizing and localizing targets despite missing features. To address this challenge, this paper proposes an improved YOLOv10 method with enhanced multi-scale perception by integrating an Efficient Multi-directional Self-Attention (EMSA) mechanism. Firstly, the MSDA attention mechanism is incorporated into the C2f module of YOLOv10 to enhance the model’s ability to capture features at multiple scales, improving the detection of occluded targets of various sizes. By adaptively weighting features across channels, the method increases focus on occluded target features. Secondly, a novel loss function, Focaleriou, is introduced based on a dynamic focusing mechanism. This adjusts the focus of the loss dynamically, enhancing the detection of targets at different scales and improving the convergence speed of bounding box regression loss. Additionally, a small-object detection head is added to strengthen feature extraction for small occluded targets. Finally, ablation experiments are conducted on the public Citypersons dataset. Results show that the model incorporating the MSDA attention mechanism achieves a mean average precision (mAP@0.5) of 62.3%, which is 2.2% higher than the official YOLOv10n. Experimental findings demonstrate that the EMSA attention mechanism effectively improves the detection of occluded pedestrian targets, meeting the requirements for scenarios such as autonomous driving and surveillance under occluded pedestrian conditions. 展开更多
关键词 遮挡目标检测 emsa多尺度自注意力 YOLO 动态聚焦
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赤红球菌转录因子DevR的DNA结合活性分析
9
作者 李秋月 彭仁 《生物技术》 2025年第1期6-13,共8页
[目的]构建重组质粒pET-21b-devr,表达并纯化转录因子DevR,并进行DNA结合活性分析。[方法]对赤红球菌的转录因子DevR进行生物信息学分析,并对devr基因进行密码子优化,构建重组表达质粒pET-21b-devr,导入到大肠杆菌BL21(DE3)中进行异源表... [目的]构建重组质粒pET-21b-devr,表达并纯化转录因子DevR,并进行DNA结合活性分析。[方法]对赤红球菌的转录因子DevR进行生物信息学分析,并对devr基因进行密码子优化,构建重组表达质粒pET-21b-devr,导入到大肠杆菌BL21(DE3)中进行异源表达,利用SDS-PAGE和Western Blotting检测表达情况。采用包涵体结合镍离子亲和层析的方法进行蛋白纯化,然后对其DNA结合活性进行分析。[结果]ProtParam工具分析表明DevR蛋白由216个氨基酸残基组成,分子量为23401.99 Da,亲水性总平均值为-0.071,含有一个REC结构域和一个LuxR型HTH结构域。在25℃、0.8 mmol/L的IPTG诱导条件下,重组蛋白DevR表达量最大,体外EMSA证实了转录因子DevR具有DNA结合活性。[结论]成功获得纯度>95%、浓度>1 mg/mL的DevR重组蛋白,并证明其具有DNA结合活性,为进一步揭示DevR与赤红球菌有机溶剂耐受性之间的关系奠定基础。 展开更多
关键词 赤红球菌 生物信息学 转录因子 重组质粒 异源表达 蛋白纯化 emsa DNA结合活性
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小麦m^(6)A结合蛋白编码基因TaECT3的克隆与功能分析
10
作者 王嘉宽 石婷瑞 +3 位作者 马宇航 马羽彤 周芮西 李增林 《麦类作物学报》 北大核心 2025年第10期1316-1323,共8页
N^(6)-甲基腺苷(m^(6)A)作为真核生物RNA中最丰富的表观转录修饰类型,通过动态的“写入-擦除-阅读”机制调控植物生长发育及逆境响应。ECT家族蛋白作为m^(6)A阅读结合蛋白,通过识别m^(6)A修饰位点参与RNA代谢调控。为明晰小麦TaECT3作为... N^(6)-甲基腺苷(m^(6)A)作为真核生物RNA中最丰富的表观转录修饰类型,通过动态的“写入-擦除-阅读”机制调控植物生长发育及逆境响应。ECT家族蛋白作为m^(6)A阅读结合蛋白,通过识别m^(6)A修饰位点参与RNA代谢调控。为明晰小麦TaECT3作为m^(6)A结合蛋白响应逆境胁迫的机理,从小麦材料Fielder中克隆到TaECT3基因CDS全长,对其进行生物信息学分析。结果表明,TaECT3基因的编码区(CDS)长度为1854 bp,编码617个氨基酸,其编码蛋白含有一个ECT家族蛋白典型的YTH保守结构域。TaECT3蛋白分子量为66.93 kDa,等电点为6.48,是亲水性稳定蛋白。其二级结构以无规则卷曲(79.74%)和α-螺旋(13.45%)为主,三级结构模拟显示该蛋白具有m^(6)A结合口袋。经系统进化分析,小麦TaECT3与大麦HvECT3、高粱SbECT3和短柄草BdDF3A之间有较近的亲缘关系,暗示它们之间可能功能保守。EMSA试验显示TaECT3重组蛋白特异性结合m^(6)A修饰RNA;亚细胞定位其可能位于细胞膜;qRT-PCR分析表明,高温(37℃,6 h)和PEG8000模拟干旱(15%,6 h)处理后,小麦Fielder中TaECT3的表达显著上调和下调。以上结果说明小麦TaECT3作为m^(6)A结合蛋白可能参与高温与干旱胁迫响应。 展开更多
关键词 小麦 TaECT3 m^(6)A结合蛋白 基因克隆 亚细胞定位 emsa
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茶树BZR1基因家族的鉴定及CsBZR1-5响应干旱胁迫的分子机理研究 被引量:2
11
作者 董圆 张永恒 +1 位作者 肖烨子 余有本 《茶叶科学》 北大核心 2025年第1期15-28,共14页
BZR1转录因子是油菜素内酯(Brassinosteroid,BR)信号转导途径中的关键转录因子,在植物生长发育以及胁迫响应过程中发挥重要的调节作用。基于茶树基因组数据,鉴定并克隆了6个茶树BZR1家族成员,分析了它们的基因结构、编码蛋白的亚细胞定... BZR1转录因子是油菜素内酯(Brassinosteroid,BR)信号转导途径中的关键转录因子,在植物生长发育以及胁迫响应过程中发挥重要的调节作用。基于茶树基因组数据,鉴定并克隆了6个茶树BZR1家族成员,分析了它们的基因结构、编码蛋白的亚细胞定位和转录激活活性,并探究了它们在不同组织和干旱胁迫下的表达模式。结果表明,6个茶树BZR1成员的内含子个数为2或3,其编码蛋白都包含典型的bHLH特征结构域;亚细胞定位结果显示,除了CsBZR1-1定位于细胞质和细胞核,其余CsBZR1s均定位于细胞核;转录激活活性分析表明,CsBZR1s在酵母中均具有转录激活活性;不同组织中的表达模式分析显示,CsBZR1s在茶树不同组织中的表达具有特异性,其中CsBZR1-1和CsBZR1-6的表达模式较为相似;干旱胁迫下的表达模式分析表明,6个CsBZR1基因均响应干旱胁迫,其中CsBZR1-5的表达持续被PEG模拟的干旱胁迫诱导。此外,ABA合成途径中的关键酶基因CsNCED1在干旱胁迫下与CsBZR1-5的表达模式高度相似,凝胶电泳迁移试验(Electrophoretic mobility shift azssay,EMSA)分析发现,CsBZR1-5能够与CsNCED1启动子上的E-box元件结合,说明CsBZR1-5可能参与调控了CsNCED1对干旱胁迫的响应过程。本研究系统分析了6个CsBZR1的基本特征和功能,为进一步阐明CsBZR1成员在茶树生长发育和干旱胁迫响应中的调控作用奠定了基础。 展开更多
关键词 茶树 CsBZR1s基因 亚细胞定位 转录自激活 凝胶电泳迁移试验
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PLAGL2对SP-C基因表达调控的作用靶点研究
12
作者 邓飞涛 柴新群 +3 位作者 邹丽 吴超英 张建初 王泽华 《中国优生与遗传杂志》 2008年第8期15-16,共2页
目的研究PLAGL2对SP-C基因表达调控的作用靶点。方法定点诱变技术分别突变掉SP-C基因启动子上PLAGL2的结合位点以及PLAGL2的第6、7位锌指结构域序列并获得相应的突变体;凝胶电泳迁移实验研究PLAGL2及其突变体分别与SP-C基因启动子及其... 目的研究PLAGL2对SP-C基因表达调控的作用靶点。方法定点诱变技术分别突变掉SP-C基因启动子上PLAGL2的结合位点以及PLAGL2的第6、7位锌指结构域序列并获得相应的突变体;凝胶电泳迁移实验研究PLAGL2及其突变体分别与SP-C基因启动子及其突变体之间的相互结合作用。结果PLAGL2能与同位素标记的SP-C基因启动子片段相结合形成蛋白-DNA复合物,而两者的突变体却不能与相应的蛋白或DNA片段发生相互作用。结论PLAGL2通过其第6?7位锌指结构与SP-C基因启动子上PLAGL2的核心和簇结合位点序列相互结合从而实现对SP-C基因的表达调控。 展开更多
关键词 PLAGL2 SP—C基因 emsa 竞争性emsa 定点诱变PCR
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改进ViT的RGB-T多模态交互跟踪算法研究 被引量:1
13
作者 吴波 张荣芬 刘宇红 《计算机工程与应用》 北大核心 2025年第7期267-277,共11页
针对之前的RGB-T目标跟踪工作中,直接将可见光RGB和热红外TIR图像的特征连接在一起,或者从搜索图像中抽取候选框,对孤立的RGB和TIR候选框对进行融合,导致无法充分利用不同模态之间的互补信息,还引入了冗余背景噪声的问题,提出了一种基... 针对之前的RGB-T目标跟踪工作中,直接将可见光RGB和热红外TIR图像的特征连接在一起,或者从搜索图像中抽取候选框,对孤立的RGB和TIR候选框对进行融合,导致无法充分利用不同模态之间的互补信息,还引入了冗余背景噪声的问题,提出了一种基于改进ViT(vision Transformer)的多模态交互的RGB-T跟踪算法。使用高效多头自注意力(efficient multi-head self-attention,EMSA),加强各个注意力头部之间的信息交互;引入AdaptMLP模块,可以更灵活地处理数据,强化模型的非线性表达能力;设计了MHT(MLP-mixer hybrid Transformer)模块,在Transformer模块的注意力分支提取特征的同时,MLP-Mixer分支在空间和通道上对输入进行特征信息提取,将两个分支的特征进行融合;将MHT模块输出的特征信息馈送到TBSI(bridging search region interaction with template)层中,进行跨模态信息交互。在公开的大规模RGB-T数据集LasHeR测试集上进行测试,得到的精确度、归一化精度和成功率分别为66.9%、63.5%和53.5%,分别比基准算法提高了1.8、1.6和1.3个百分点。实验结果表明,所提算法能够提高跟踪器的性能。 展开更多
关键词 RGB-T跟踪 混合多层感知机 多模态交互 模板融合 高效多头自注意力
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启动子分析方法的研究进展 被引量:19
14
作者 王秋岩 何淑雅 +2 位作者 马云 李俐娟 李斌元 《现代生物医学进展》 CAS 2015年第14期2794-2800,共7页
启动子是基因表达调控的重要顺式元件,其结构与功能的研究是分子生物学的研究热点之一。对启动子与DNA结合蛋白的研究能从转录水平上阐明基因表达的调控机制,从而为更好地构建基因表达调控网络奠定基础,而且启动子与结合蛋白的研究能够... 启动子是基因表达调控的重要顺式元件,其结构与功能的研究是分子生物学的研究热点之一。对启动子与DNA结合蛋白的研究能从转录水平上阐明基因表达的调控机制,从而为更好地构建基因表达调控网络奠定基础,而且启动子与结合蛋白的研究能够帮助我们寻找新的蛋白质。近年来,启动子的研究方法日益增多,大多是借助于DNA和蛋白质相互作用的特性。本文从原核和真核启动子的基本结构、分类入手,对常用的和改进的几种启动子分析方法进行介绍。如生物信息学分析方法、酵母单杂交(Y1H)技术、瞬时转染法(Transient Transfection)、染色质免疫共沉淀(Ch IP)技术、凝胶阻滞分析(EMSA)试验和DNA足纹(DNase I footprinting)分析法等,从原理、优缺点和最新应用等方面的研究进展进行了综述。对近年来出现的新技术新方法的应用前景作了展望,为启动子的结构与功能研究提供借鉴。 展开更多
关键词 启动子 功能分析 酵母单杂交 emsa DNA足纹分析
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抗人TNF单克隆抗体对TNF诱导的NF-κB核转位的抑制作用 被引量:6
15
作者 朱参胜 欧阳为明 +3 位作者 刘雪松 梁晓聪 宋朝君 金伯泉 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期585-587,共3页
目的 :鉴定 3株抗人TNF单克隆抗体 (mAb)D2、E6和F6对TNF诱导的NF κB核转位的抑制作用。方法 :将不同浓度的 3株mAb及无关mAb分别与TNF溶液孵育后 ,加入到ECV30 4细胞培养液中。孵育 1h后收获细胞 ,从中提取核蛋白并测定其含量 ,用电... 目的 :鉴定 3株抗人TNF单克隆抗体 (mAb)D2、E6和F6对TNF诱导的NF κB核转位的抑制作用。方法 :将不同浓度的 3株mAb及无关mAb分别与TNF溶液孵育后 ,加入到ECV30 4细胞培养液中。孵育 1h后收获细胞 ,从中提取核蛋白并测定其含量 ,用电泳迁移率变动分析 (EMSA)检测核提取液中NF κB的核转位。结果 :3株抗TNFmAb均可抑制TNF诱导的ECV30 4细胞中NF κB的核转位。其中mAbD2的抑制作用最强 ,其次为mAbF6和E6 ,无关对照抗体也有一定的非特异性反应。抑制作用与加入的mAb呈良好的剂量依赖关系 ,在 10mg/L和 0 .1mg/L条件下 ,mAbD2的抑制率分别为 94 .2 %和75 .1% ,mAbE6分别为 6 4 .9%和 2 8.6 % ,mAbF6分别为 70 .3%和 4 9.5 % ,无关对照抗体分别为 2 0 .0 %和 11.1%。结论 :mAbD2、E6和F6可特异性地抑制TNF诱导的NF κB核转位 。 展开更多
关键词 肿瘤坏死因子 单克隆抗体 NF-ΚB 电泳迁移率变动分析(emsa)
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一种改进的核转录因子的电泳迁移率改变分析法 被引量:54
16
作者 王勇 黄文华 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期119-120,共2页
目的 建立一种简便、实用、成功率高的电泳迁移率改变分析法。方法 参照国内外介绍的实验方法并加以改进 ,并结合本室的实际情况。主要步骤为核蛋白快速抽提与定量 ,探针标记与纯化 ,DNA与蛋白质的结合 ,电泳及显影。结果 此方法操... 目的 建立一种简便、实用、成功率高的电泳迁移率改变分析法。方法 参照国内外介绍的实验方法并加以改进 ,并结合本室的实际情况。主要步骤为核蛋白快速抽提与定量 ,探针标记与纯化 ,DNA与蛋白质的结合 ,电泳及显影。结果 此方法操作时间较短 ,简化了核蛋白抽提 ,且省去了繁锁的干胶步骤 ,图像清晰 ,有可比性及重复性。结论 此方法本室运用过多次 ,稳定可靠 ,值得应用与推广。 展开更多
关键词 核转录因子 电泳迁移率 emsa NF-KB
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大蒜素对胃癌细胞NFκB活性的影响 被引量:14
17
作者 扈启宽 李文梅 +1 位作者 赵喜荣 吕有勇 《解放军药学学报》 CAS 2002年第1期7-10,共4页
目的 研究大蒜素对肿瘤细胞中核转录因子B(NFκB)活性的影响 ,探讨大蒜素抗肿瘤的作用机制。方法 用凝胶滞留 (EMSA)方法分析应用大蒜素处理前后人胃癌细胞系BGC 82 3的细胞核蛋白中NFκB的DNA结合活性。结果 用大蒜素处理后可观察... 目的 研究大蒜素对肿瘤细胞中核转录因子B(NFκB)活性的影响 ,探讨大蒜素抗肿瘤的作用机制。方法 用凝胶滞留 (EMSA)方法分析应用大蒜素处理前后人胃癌细胞系BGC 82 3的细胞核蛋白中NFκB的DNA结合活性。结果 用大蒜素处理后可观察到肿瘤细胞有增殖减慢及诱导分化等现象 ,大蒜素处理后NFκB结合DNA的活性降低。 展开更多
关键词 大蒜素 emsa NFkB活性 胃癌细胞 抑制作用
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大豆乙烯响应因子GmERF6的功能分析 被引量:3
18
作者 翟莹 赵艳 +3 位作者 杨晓杰 孙天国 张军 姚雅男 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期73-77,共5页
GmERF6是从大豆中克隆到的一个新的ERF转录抑制子基因,对其功能作了进一步的分析。亚细胞定位试验结果显示GmERF6蛋白定位于细胞核中;利用原核表达纯化GmERF6蛋白并进行凝胶阻滞分析(EMSA),结果显示,GmERF6蛋白在体外可以与GCC-box元件... GmERF6是从大豆中克隆到的一个新的ERF转录抑制子基因,对其功能作了进一步的分析。亚细胞定位试验结果显示GmERF6蛋白定位于细胞核中;利用原核表达纯化GmERF6蛋白并进行凝胶阻滞分析(EMSA),结果显示,GmERF6蛋白在体外可以与GCC-box元件特异结合;对GmERF6转基因拟南芥干旱条件下的种子萌发率和植株表型进行观察,结果证实GmERF6提高了转基因拟南芥的抗旱性,表明该基因可作为培育抗旱材料的候选基因。 展开更多
关键词 大豆 GmERF6 亚细胞定位 emsa 抗旱性
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血管紧张素II对血管内皮细胞三种转录因子作用的影响 被引量:6
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作者 王华 斯琴 +3 位作者 王小明 郭恒怡 李素敏 吴其夏 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期196-199,共4页
目的和方法 :分别采用凝胶迁移率改变法 (EMSA)和Western -blot的方法从基因转录水平探讨AngII对血管内皮细胞株ECV30 4的影响。结果 :(1)EMSA结果表明 ,AngII组核抽提物与 3种探针的结合活性均高于正常对照组 ,与NF -κB ,SP - 1和AP ... 目的和方法 :分别采用凝胶迁移率改变法 (EMSA)和Western -blot的方法从基因转录水平探讨AngII对血管内皮细胞株ECV30 4的影响。结果 :(1)EMSA结果表明 ,AngII组核抽提物与 3种探针的结合活性均高于正常对照组 ,与NF -κB ,SP - 1和AP - 1探针结合活性分别为正常对照组的 10 98倍 ,3 97倍和 1 33倍 ,说明AngII对血管内皮细胞的作用机制可能与NF -κB ,SP - 1和AP - 1等转录因子的转录活性增加有关。进一步证实NF -κB ,AP -1在内皮细胞功能失调发病机制中的重要作用 ,同时发现转录因子SP - 1也可能参与此过程。 (2 )Western -blot结果表明 ,AngII处理后细胞核内NF -κB含量明显增加 ,提示AngII能够增加血管内皮细胞转录因子NF -κB的核转位 ,进一步验证了EMSA的结论。而细胞核内SP - 1和AP - 1的含量较对照组略有增加 ,提示AngII对SP - 1和AP - 1的核转位无明显影响而可能主要是促进转录因子与相应顺式调控元件的结合活性。结论 :AngII对内皮细胞 3种重要的转录因子的活性有不同程度的影响 。 展开更多
关键词 血管紧张素Ⅱ 转录因子 血管内皮细胞 emsa WESTERN-BLOT 基因转录
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播娘蒿转录因子DsCBF与CRT/DRE元件的相互作用 被引量:2
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作者 王乐 李晶 +4 位作者 曹瑜 张玲 巨艳 乔代蓉 曹毅 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期609-612,共4页
CBF(C-repeat binding factor)是调控植物冷驯化相关基因表达的一种调控转录激活因子,CBF蛋白AP2结合domain可与COR基因启动子CBT/DRE元件特异性地结合,启动耐寒基因COR的表达.为研究播娘蒿DsCBF的功能,构建pET32a-DsCBF原核表达载体,... CBF(C-repeat binding factor)是调控植物冷驯化相关基因表达的一种调控转录激活因子,CBF蛋白AP2结合domain可与COR基因启动子CBT/DRE元件特异性地结合,启动耐寒基因COR的表达.为研究播娘蒿DsCBF的功能,构建pET32a-DsCBF原核表达载体,通过冻融法转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,进行原核表达,并通过镍亲和层析纯化CBF蛋白.利用EMSA(Electrophoretic mobility shift assay)分析DsCBF蛋白与播娘蒿DsCOR基因的启动子上CRT/DRE元件的相互作用.EMSA结果显示,DsCBF蛋白与含有CCGAC核心序列及TATA-box和AT-TA回文结构的50bp探针结合有滞后现象,表明与DsCOR启动子上的CRT/DRE元件有特异性结合;而与仅有CCGAC的CRT/DRE核心序列的40bp探针结合则无滞后现象,表明DsCBF与蛋白结合的识别可能与TATA-box和AT-TA回文结构有关. 展开更多
关键词 播娘蒿 CBF CRT/DRE emsa 银染
原文传递
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