牛冠状病毒单克隆抗体制备及亚型鉴定

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作者 范昊宇 蒋蔚 +13 位作者 汪萍 宫震 韩翔舒 白航飞 刘姝悦 李月 张立雪 付修龙 杜玮 阿依江·木合塔尔 平继辉 朱启运 蒋松 夏俊 《畜牧与兽医》 北大核心 2025年第12期116-123,共8页

旨在制备牛冠状病毒(Bovine coronavirus,BCoV)单克隆抗体(MAb),为BCoV疫苗制备和建立免疫胶体金等特异性检测方法奠定基础。使用原核表达系统制备重组BCoV N蛋白,BCoV灭活全病毒液免疫BALB/c小鼠;以N蛋白和全病毒为抗原,通过间接ELISA... 旨在制备牛冠状病毒(Bovine coronavirus,BCoV)单克隆抗体(MAb),为BCoV疫苗制备和建立免疫胶体金等特异性检测方法奠定基础。使用原核表达系统制备重组BCoV N蛋白,BCoV灭活全病毒液免疫BALB/c小鼠;以N蛋白和全病毒为抗原,通过间接ELISA法检测抗体效价。经细胞融合与5轮亚克隆,筛选出分泌目标抗体的单克隆细胞株。采用腹水法制备单克隆抗体并纯化,通过间接免疫荧光试验(IFA)和Western blot验证抗体反应性与特异性。结果:筛选出3株针对BCoV N蛋白的杂交瘤细胞株(2D12C、3D6E、4D1F),分泌的单克隆抗体轻链均为Kappa链,2D12C与4D1F重链为IgG2a亚型,3D6E重链为IgG1亚型;IFA试验表明3株单克隆抗体均能与BCoV发生特异性结合;Western blot证明3株单克隆抗体与BCoV和重组表达BCoV N蛋白均反应良好,且3株单克隆抗体与感染牛轮状病毒、牛传染性鼻气管炎病毒、牛病毒性腹泻病毒及牛副流感病毒3型的细胞均不发生特异性反应。综上,制备了3株特异性较高、生物学活性良好的BCoV单克隆抗体,为后续疫苗制备及检测方法研究奠定了基础。 展开更多

关键词 牛冠状病毒 N蛋白 单克隆抗体 间接elsia

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酶联免疫法快速测定水产品中呋喃唑酮、呋喃它酮代谢物 被引量：16

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作者 宋琍琍 张晓辉 +3 位作者 张海琪 王扬 孔蕾 马文俊 《浙江农业学报》 CSCD 2008年第4期296-299,共4页

采用ELISA方法对水产品中AOZ和AMOZ残留进行检测，结果表明：方法最低检测限为0．3μg／kg，向样品中添加浓度为0．5，1．0，3．0μg／kg三个梯度标准品溶液时，AOZ平均回收率范围为86．8％～96．9％，RSD为7．54％～10．22％，AMOZ平... 采用ELISA方法对水产品中AOZ和AMOZ残留进行检测，结果表明：方法最低检测限为0．3μg／kg，向样品中添加浓度为0．5，1．0，3．0μg／kg三个梯度标准品溶液时，AOZ平均回收率范围为86．8％～96．9％，RSD为7．54％～10．22％，AMOZ平均回收率范围为84．0％～95．4％，RSD为7．03％～12．89％；利用该方法与LC—MS-MS比对试验，样品阴、阳性判断结果一致。 展开更多

关键词 水产品 呋喃唑酮 呋喃它酮 elsia

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抗人降钙素原特异性单克隆抗体的制备鉴定及初步应用 被引量：9

3

作者 郑怡麟 何莹 +2 位作者 陈安 易维京 胡川闽 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期523-526,共4页

目的获得抗人降钙素原(procalcitonin,PCT)单克隆抗体,并鉴定其基本特性。方法从NCBI数据库中获得PCT编码序列,以原核表达系统表达PCT重组蛋白,经镍亲和层析柱纯化,获得筛选单克隆抗体的筛选原;综合应用多种生物信息学分析软件预测PCT... 目的获得抗人降钙素原(procalcitonin,PCT)单克隆抗体,并鉴定其基本特性。方法从NCBI数据库中获得PCT编码序列,以原核表达系统表达PCT重组蛋白,经镍亲和层析柱纯化,获得筛选单克隆抗体的筛选原;综合应用多种生物信息学分析软件预测PCT中潜在的B细胞表位肽,用合成肽对BALB/c小鼠进行免疫,纯化单克隆抗体,通过间接ELISA、Western blot和免疫组化鉴定获得的单克隆抗体。将获得的单克隆抗体作为捕获抗体,经过配对建立检测重组PCT的ELISA体系,并初步对临床血清进行了检测。结果成功获得3株PCT特异性单克隆抗体,分别为2-D7、2-H12和4-H12,亚类分别为IgG1和IgG2a,最高效价为1∶1 024 000,亲和力最高可达到1.3×109L/mol;选取2-D7经Western blot鉴定能够检测重组PCT蛋白,经免疫组化证实能特异性识别甲状腺组织中PCT蛋白,经过配对成功建立了检测重组PCT的ELISA体系,运用建立体系检测临床血清PCT含量时发现正常组与细菌培养阳性组之间具有显著差异。结论成功表达了人PCT重组蛋白,获得了3株高特异性和高亲和力的PCT单克隆抗体,成功建立了检测重组PCT的ELISA体系,并初步用于临床样本检测。 展开更多

关键词 降钙素原 原核表达 单克隆抗体 特性鉴定 elsia检测

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栉孔扇贝急性病毒性坏死病毒(AVNV)卵内的垂直传播途径 被引量：6

4

作者 于佐安 王崇明 +2 位作者 李赟 任伟成 蔡玉勇 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期1031-1036,共6页

急性病毒性坏死病毒已被证实为是一种对养殖栉孔扇贝危害极大的病原体,探讨其传播途径是防控扇贝"大规模死亡症"的前提之一。将亲贝各放在一独立育苗水体内产卵、孵化,并进行幼虫培育。通过春季和秋季室内人工育苗,从40个独... 急性病毒性坏死病毒已被证实为是一种对养殖栉孔扇贝危害极大的病原体,探讨其传播途径是防控扇贝"大规模死亡症"的前提之一。将亲贝各放在一独立育苗水体内产卵、孵化,并进行幼虫培育。通过春季和秋季室内人工育苗,从40个独立育苗水体中,采获亲贝、卵各23个家系样品,受精卵、D形幼虫、壳顶幼虫各12个家系样品,眼点幼虫2个家系样品。采用间接ELISA法、间接免疫荧光技术和电子显微镜技术对亲贝、卵和发育各期的幼虫进行定性和定位的检测。结果发现,栉孔扇贝的性腺组织中存在病毒粒子,而卵、受精卵及各期发育幼虫体内均未检测到病毒。由此可以判断:AVNV可以感染栉孔扇贝的性腺,但并不存在卵内垂直传播的可能性。 展开更多

关键词 AVNV 垂直传播 间接elsia 间接免疫荧光 电子显微镜技术

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食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇三种检测方法的比较研究 被引量：11

5

作者 王俊双 许定花 孙秀兰 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期287-290,共4页

对谷物中DON的检测方法进行了研究,确定了各检测方法的参数,HPLC方法最低检出限为52μg/L,加标回收率为78.92%,相对标准偏差RSD为1.88%,精密度很高;ELISA方法的最低检出限为10μg/L,加标回收率为104%,RSD为5.8%;金标试剂条检测可做出一... 对谷物中DON的检测方法进行了研究,确定了各检测方法的参数,HPLC方法最低检出限为52μg/L,加标回收率为78.92%,相对标准偏差RSD为1.88%,精密度很高;ELISA方法的最低检出限为10μg/L,加标回收率为104%,RSD为5.8%;金标试剂条检测可做出一个标准的颜色反映系列,重现性很好,最低检出限为1000μg/L,加标回收率也很高。金标检测方法简便、快速,适用于现场检测,是未来检测方法的发展方向。 展开更多

关键词 呕吐毒素 HPLC elsia 金标

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乙型肝炎病毒血清学标志物与DNA检测结果的对比分析 被引量：35

6

作者 王平忠 周永兴 《世界华人消化杂志》 CAS 1999年第10期918-919,共2页

关键词 乙型肝炎病毒 DNA病毒 PCR elsia

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血液保养液对抗-HCV检测影响的探讨 被引量：5

7

作者 伍伟健 陈小锋 +1 位作者 郭如华 罗海玲 《中国输血杂志》 CAS CSCD 2008年第11期856-857,共2页

目的探讨CPD血液保养液(以下简称CPD)对抗-HCV检测的影响。方法用CPD以5%的幅度对3种浓度的抗-HCV阳性质控物进行梯度稀释后用ELISA方法进行平行检测,观察S/CO值变化情况。随机抽取抗-HCV阳性和阴性献血者各60名,对其试管样本和血袋管... 目的探讨CPD血液保养液(以下简称CPD)对抗-HCV检测的影响。方法用CPD以5%的幅度对3种浓度的抗-HCV阳性质控物进行梯度稀释后用ELISA方法进行平行检测,观察S/CO值变化情况。随机抽取抗-HCV阳性和阴性献血者各60名,对其试管样本和血袋管样本做ELISA检测比较。结果阳性质控实验组的S/CO值均随保养液的量增加而逐渐降低;阳性物浓度降低5%,S/CO值均有明显降低(P(0.05);其中阳性物浓度95%的S/CO值降低极显著(P(0.01)。试管和血袋管的抗-HCV阳性样本检测结果有差异,弱阳性样本较为明显。结论CPD对ELSIA检测抗-HCV弱阳性样本影响明显,易造成弱阳性样本的漏检。 展开更多

关键词 血液保养液(CPD) 抗-HCV elsia

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血清CA72-4和CA125检测在卵巢上皮性恶性肿瘤中的应用 被引量：9

8

作者 胡雷光 戴湘茹 +3 位作者 叶宇冰 刘鹥雯 任关仁 陆丽华 《上海医学检验杂志》 北大核心 2001年第6期365-366,共2页

目的通过血清中肿瘤标志糖蛋白抗原 (CA) 72 - 4和 CA12 5的检测 ,观察其阳性检出率与卵巢上皮性恶性肿瘤的关系。方法卵巢上皮性恶性肿瘤患者 38例和良性肿瘤患者 6 4例的血清样品 ,分别用酶联免疫吸附试验 (EL SIA)和化学发光测定 CA7... 目的通过血清中肿瘤标志糖蛋白抗原 (CA) 72 - 4和 CA12 5的检测 ,观察其阳性检出率与卵巢上皮性恶性肿瘤的关系。方法卵巢上皮性恶性肿瘤患者 38例和良性肿瘤患者 6 4例的血清样品 ,分别用酶联免疫吸附试验 (EL SIA)和化学发光测定 CA72 - 4和 CA12 5。结果与良性组相比 ,卵巢上皮性恶性肿瘤 ,CA72 - 4、CA12 5和CA72 - 4和 /或 CA12 5的灵敏度分别为 78.9%、6 5 .8%和 89.5 % ,其特异性为 39.1～ 6 8.8% ,卡方检验统计 ,P<0 .0 5差异有显著性 ;在卵巢上皮性肿瘤的分类中 ,CA72 - 4在粘液性和内膜样 ,CA12 5在浆液性和粘液性 ,以及CA72 - 4和 /或 CA12 5在粘液性囊腺癌 (瘤 )的良恶性统计比较 ,P<0 .0 5 ,差异有显著性 ,其中 CA72 - 4在粘液性和内膜样囊腺癌及 CA12 5在浆液性囊腺癌获得较高的检出率 (75 .0～ 89.5 % )。结论 2项肿瘤标志对卵巢上皮性肿瘤的良恶性辅助及鉴别诊断具有一定的应用价值 ,CA72 - 4优于 CA12 展开更多

关键词 卵巢上皮性肿瘤 肿瘤标志 糖蛋白抗原 粘液性 浆液性 内膜样 elsia

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乙肝患者血清标志物HBsAg与HBsAb同时阳性的实验分析 被引量：4

9

作者 方晔 徐小燕 吴春萍 《宁夏医学杂志》 CAS 2004年第6期355-356,共2页

目的　探讨乙肝患者血清标志物HBsAg和HBsAb同时阳性原因。方法　采用ELISA方法检测每天受检标本 ,收集HBsAg、HBsAb同时阳性检测结果 ,测定其谷丙转氨酶 (ALT)及总胆红素 (T -Bili)等肝功能项目。结果　HBsAb阳性主要出现在慢性乙肝患... 目的　探讨乙肝患者血清标志物HBsAg和HBsAb同时阳性原因。方法　采用ELISA方法检测每天受检标本 ,收集HBsAg、HBsAb同时阳性检测结果 ,测定其谷丙转氨酶 (ALT)及总胆红素 (T -Bili)等肝功能项目。结果　HBsAb阳性主要出现在慢性乙肝患者及慢性乙肝携带者 ,“大三阳”与“小三阳”中出现没有明显差异。结论HBsAg、HBsAb同时阳性的模式 ,是由多种原因引起 ,HBsAg亚型双重感染可能是主要原因。 展开更多

关键词 乙至肝炎 肝炎标志物 病毒感染 elsia

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鱼样中阿苯达唑代谢物快速检测研究 被引量：1

10

作者 杜伟 张晓辉 +2 位作者 孔蕾 叶磊海 童波 《福建分析测试》 CAS 2012年第4期60-62,共3页

建立了鱼类中阿苯达唑代谢物:阿苯达唑砜(ABZSO2)残留ELISA筛选方法,利用乙酸乙酯提取,正己烷去杂质后进行ELISA分析。结果:方法最低检测限为10μg/kg,样品中添加标准物质浓度为20μg/kg、60μg/kg和160μg/kg3个梯度水平,平均回收率范... 建立了鱼类中阿苯达唑代谢物:阿苯达唑砜(ABZSO2)残留ELISA筛选方法,利用乙酸乙酯提取,正己烷去杂质后进行ELISA分析。结果:方法最低检测限为10μg/kg,样品中添加标准物质浓度为20μg/kg、60μg/kg和160μg/kg3个梯度水平,平均回收率范围为88.3%～95.7%,RSD为6.38%～9.88%。结论:实验证明该方法适合鱼类ABZSO2残留筛选。 展开更多

关键词 鱼类 阿苯达唑代谢物 elsia

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精神分裂症患者康复过程中血浆白细胞介素-6及其受体的变化 被引量：1

11

作者 郭新胜 冯砚国 李晏 《中国临床康复》 CSCD 2003年第21期2993-2993,共1页

目的探讨精神分裂症患者在康复过程中白细胞介素-6(IL-6)及其可溶性受体(sIL-6R)的动态变化。方法使用ELSIA方法检测45例首发精神分裂症患者治疗前后IL-6、sIL-6R的含量。结果研究组IL-6水平犤(21.2±2.0)ng/L犦较对照组犤(18.1... 目的探讨精神分裂症患者在康复过程中白细胞介素-6(IL-6)及其可溶性受体(sIL-6R)的动态变化。方法使用ELSIA方法检测45例首发精神分裂症患者治疗前后IL-6、sIL-6R的含量。结果研究组IL-6水平犤(21.2±2.0)ng/L犦较对照组犤(18.1±3.4)ng/L犦增高(t=2.419,P<0.05);sIL-6R水平犤(32.0±14.3)ng/L犦较对照组犤(24.3±14.9)ng/L犦增高(t=2.435,P<0.05);氯氮平治疗后血浆IL-6水平为(23.5±2.4)ng/L较治疗前增高,(t=2.251,P<0.05),IL-6升高幅度与氯氮平药物剂量呈正相关(R2=0.533,P=0.000);治疗后sIL-6R含量为(22.4±17.5)ng/L,较治疗前含量明显降低(t=2.174,P<0.05)。结论精神分裂症患者IL-6及其受体含量增高,精神分裂症患者存在细胞因子的失衡;在康复过程中IL-6及sIL-6R存在不同的变化趋势。 展开更多

关键词 精神分裂症 康复 血浆 白细胞介素-6 白细胞介素-6受体 elsia

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一种基于猪流行性腹泻病毒S1蛋白的单域抗体的阻断ELISA方法及其评价 被引量：1

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作者 马志倩 白鸽 +4 位作者 王天宇 李志伟 李洋 肖书奇 李爽 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第9期3221-3230,共10页

文中旨在利用猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)S1蛋白生物素化纳米抗体建立一种阻断酶联免疫吸附试验(Blocking enzyme-linked immunosorbent assay,bELISA)方法,用于检测猪体内PEDV抗体水平及疫苗免疫效果的评... 文中旨在利用猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)S1蛋白生物素化纳米抗体建立一种阻断酶联免疫吸附试验(Blocking enzyme-linked immunosorbent assay,bELISA)方法,用于检测猪体内PEDV抗体水平及疫苗免疫效果的评估。对PEDVS1蛋白的特异性单域抗体(Single-domain antibodies,sdAb)sdAb3基因进行扩增,并在3′端融合Avitag序列,构建至原核表达载体pET21b,进行sdAb3-Avitag蛋白诱导表达纯化。对纯化的sdAb3-Avitag融合蛋白进行生物素标记并鉴定其活性。以PEDV重组S1蛋白为抗原,通过对各反应条件进行摸索与优化,建立一种可靠灵敏的bELISA方法应用于血清样品检测,并与商品化试剂盒检测进行比价。成功构建重组载体pET21b-sdAb3-Avitag并诱导表达出sdAb3-Avitag蛋白。体外生物素标记的sdAb3(sdAb3-Biotin)具有良好的活性。所构建的bELISA方法中,最适参数为:S1蛋白的包被浓度200 ng/孔;血清稀释比例1︰2,血清孵育时间2 h;sdAb3-Biotin稀释比1︰8000,孵育时间30 min;酶标抗体稀释比例1︰5000,反应时间30 min。所建立的方法与猪传染性胃肠炎病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒等主要猪源病毒的阳性血清均无交叉反应,具有良好的特异性和重复性。利用建立的bELISA方法对临床54份猪血清样品进行检测,结果显示,该方法与商品化试剂盒检测结果具有92.56%的总体符合率。文中建立了一种省时可靠的bELISA方法,可用于PEDV的临床监测和疫苗免疫效果评估。 展开更多

关键词 猪流行性腹泻病毒 生物素化单域抗体 阻断elsia S1蛋白

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Array360和ELISA法检测轻链在M蛋白病的诊断意义 被引量：1

13

作者 杨文蔚 高峰 +2 位作者 屠小卿 施笑梅 孔宪涛 《上海医学检验杂志》 1998年第2期68-69,共2页

对50例M蛋白病患者、19例肾病患者血清及尿液中的轻链分别采用Array360速率散射比浊仪及ELISA法进行检测。结果表明，M蛋白病组与正常人组相比轻链含量及。人值均有显著差异（P＜O．05），肾病组与正常人组相比无显著差异（P＞0．05）... 对50例M蛋白病患者、19例肾病患者血清及尿液中的轻链分别采用Array360速率散射比浊仪及ELISA法进行检测。结果表明，M蛋白病组与正常人组相比轻链含量及。人值均有显著差异（P＜O．05），肾病组与正常人组相比无显著差异（P＞0．05）。采用速率散射比浊法检测血清中游离轻链的阳性率高于采用ELISA法检测尿中游离轻链，前法具有灵敏度高、特异性强、稳定性好、检测时间短等优点。 展开更多

关键词 M蛋白病 速率散射比浊 elsia 轻链 诊断

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抗人心脏型脂肪酸结合蛋白单克隆抗体的制备、表位鉴定及其应用

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作者 韩起 丛珊 +5 位作者 易维京 陈莎 梁文斌 陈安 胡川闽 李淑慧 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期620-624,共5页

目的制备抗人心脏型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)单克隆抗体(mAb),鉴定其基本特性并通过配对检测临床样本血清,对已配对的mAb进行表位鉴定。方法通过已制备的H-FABP抗原和合成肽免疫BALB/c小鼠,常规融合筛选后进行抗体亚型鉴定、效价和亲和... 目的制备抗人心脏型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)单克隆抗体(mAb),鉴定其基本特性并通过配对检测临床样本血清,对已配对的mAb进行表位鉴定。方法通过已制备的H-FABP抗原和合成肽免疫BALB/c小鼠,常规融合筛选后进行抗体亚型鉴定、效价和亲和力检测,纯化mAb后通过间接ELISA、Western blot法对mAb进行特异性检测;将获得的mAb分别作为捕获和检测抗体,经过配对建立检测重组H-FABP的ELISA体系,并初步用于临床血清检测;采用生物信息学分析设计2段H-FABP表位,通过原核表达获得其短肽并纯化,通过Western blot法对配对的mAb进行表位鉴定。结果成功获得4株抗H-FABP特异性mAb,亚类分别为IgG2a和IgG2b,抗体效价为1∶51 200～1∶1024 000,亲和力最高可达到9.02×109mol/L;经Western blot法和间接ELISA鉴定均能够特异检测重组H-FABP蛋白,经过配对发现mAb 3-H5和1-F10能够检测重组H-FABP,并在其临床血清样本检测中发现正常组和急性心梗组之间H-FABP水平具有显著性统计学差异;通过表位鉴定发现未知表位的mAb 1-F10能够特异识别位点为H-FABP的第86到第133位氨基酸。结论制备了4株高特异性和高亲和力的抗H-FABPmAb,成功建立了检测临床样本血清中的ELISA体系,并对其表位进行了分析鉴定。 展开更多

关键词 H-FABP 单克隆抗体 elsia体系检测 表位鉴定

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ELISA方法检测HBeAg假阳性1例

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作者 梁新宇 段正军 田鹏飞 《国际检验医学杂志》 CAS 2013年第6期765-766,共2页

应用ELSIA法检测乙型肝炎标志物的结果受诸多因素的影响往往出现一些少见模式‘“，分析探讨这种少见模式的原因对正确判读HBVM的结果指导临床是有一定意义的。1资料与方法1．1 一般资料 检测健康体检者，女26岁，身高160cm，体质量57k... 应用ELSIA法检测乙型肝炎标志物的结果受诸多因素的影响往往出现一些少见模式‘“，分析探讨这种少见模式的原因对正确判读HBVM的结果指导临床是有一定意义的。1资料与方法1．1 一般资料 检测健康体检者，女26岁，身高160cm，体质量57kg，血压110／85mmHg（1mmHg=0．133kpa），心率75次／分，内、外、妇、五官科体察未见异常；心电图、超声检查肝、胆、脾、双肾、甲状腺、胸透均未见异常。曾接种过乙肝疫苗，就诊时近一星期双腿微有酸痛感但未服用过任何药物。 展开更多

关键词 HBeAg假阳性 ELISA方法 检测 乙型肝炎标志物 elsia法 健康体检者 HBVM 超声检查

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重庆市乙型肝炎病毒血清标志物的动态分析

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作者 涂干卿 吴丽华 《四川省卫生管理干部学院学报》 1997年第3期141-141,146,共2页

目的：对重庆市乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）血清标志物进行动态分析。方法：采用ＥＬＩＳＡ法，对人群进行ＨＢＶ血清标志物调查检测。结果：均为常见的九种模式，本组与１９９４年比较变化较小，但单项抗—ＨＢｓ阳性模式的出现率由２１．... 目的：对重庆市乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）血清标志物进行动态分析。方法：采用ＥＬＩＳＡ法，对人群进行ＨＢＶ血清标志物调查检测。结果：均为常见的九种模式，本组与１９９４年比较变化较小，但单项抗—ＨＢｓ阳性模式的出现率由２１．９％升到２６．２％（χ２＝５．８３３、Ｐ＜０．０５）；本组ＨＢｓＡｇ的阳性率为８．３％，比１９８６年报道的低，男性为９．７％仍明显高于女性的６．５％（χ２＝９．３１０、Ｐ＜０．０５），１０岁～３０岁年龄组的ＨＢｓＡｇ阳性率均在平均阳性率８．３％之上，男女皆如此。流动职业人群感染率高于稳定职业人群（χ２＝６．１９０、Ｐ＜０．０５）。结论：ＨＢＶ感染模式的动态分析具有流行病学意义。 展开更多

关键词 elsia 乙型肝炎 HBSAG 阳性率

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超敏CRP单克隆抗体制备及其ELISA体系的初步建立 被引量：3

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作者 王伟 何莹 +2 位作者 韩起 陈安 胡川闽 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期697-701,共5页

目的获得CRP特异性单克隆抗体并建立能够检测超敏CRP(hs-CRP)的双抗体夹心ELISA免疫定量检测方法。方法从NCBI核酸数据库中获得人CRP编码序列并进行密码子偏嗜性改造,利用E.coli表达系统表达CRP重组蛋白。用pET22b-CRP重组质粒表达的CR... 目的获得CRP特异性单克隆抗体并建立能够检测超敏CRP(hs-CRP)的双抗体夹心ELISA免疫定量检测方法。方法从NCBI核酸数据库中获得人CRP编码序列并进行密码子偏嗜性改造,利用E.coli表达系统表达CRP重组蛋白。用pET22b-CRP重组质粒表达的CRP重组蛋白(rhCRP-22b)作为免疫原免疫Balb/c小鼠并通过杂交瘤技术制备CRP特异性单克隆抗体,鉴定并筛选能够建立双抗体夹心ELISA系统的抗体配对。以pET28a-CRP重组质粒表达的CRP重组蛋白(rhCRP-28a)作为标准品,对该系统线性范围、灵敏度、精密度和准确度(回收试验)进行分析和评价。结果获得5株CRP单克隆抗体,筛选得到2株单克隆抗体可用于hs-CRP的ELISA免疫检测。通过鉴定2株抗体具有良好的效价和特异性。ELISA检测系统线性范围为0～166 ng/ml,灵敏度为5.2 ng/ml,批内CV≤6.43%,批间CV≤5.93%,平均回收率为98.9%,与Orion公司hs-CRP诊断试剂检测结果有良好的可比性。结论本研究制备了高效特异的CRP单克隆抗体并建立了能够检测hs-CRP的双抗体夹心ELISA方法,该方法灵敏度、精密度和准确性良好,能够达到hs-CRP的检测要求,为进一步研发和建立具有自主知识产权的免疫检测试剂盒及其他检测方法体系奠定了良好的基础。 展开更多

关键词 超敏C-反应蛋白 蛋白原核表达 单克隆抗体 elsia 方法学评价

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无选择标记转基因大白菜的检测 被引量：1

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作者 佟容 于占东 +4 位作者 吴春燕 乔宏宇 乔建磊 王彧彧 张新影 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期364-369,共6页

通过对转基因大白菜进行TuMV-C4病毒摩擦接种鉴定、ELSIA检测、提取转基因大白菜DNA进行PCR检测,并通过PCR-Southern杂交、RT-PCR检测转基因大白菜,构建了针对无选择标记转基因大白菜的系统检测方法。试验结果表明:转基因大白菜通过摩... 通过对转基因大白菜进行TuMV-C4病毒摩擦接种鉴定、ELSIA检测、提取转基因大白菜DNA进行PCR检测,并通过PCR-Southern杂交、RT-PCR检测转基因大白菜,构建了针对无选择标记转基因大白菜的系统检测方法。试验结果表明:转基因大白菜通过摩擦接种TuMV-C4病毒抗病性鉴定,188株表现为抗性,初步筛选率为19.46%;进行ELISA检测抗病植株中TuMV含量,有63株明显低于非转化植株,筛选率达到26.25%;对抗TuMV植株直接进行目的基因PCR检测,有25株呈阳性,筛选率达到13.30%。经PCR-Southern杂交检测和RT-PCR检测,表明转基因大白菜中不仅整合了Nib基因,而且获得了表达。这种逐级递进的检测系统可以高效地获得无选择标记的转基因植株。 展开更多

关键词 无选择标记转基因 elsia PCR-Southern RT-PCR 大白菜

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典型生活污水处理工艺对雌激素效应的去除 被引量：8

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作者 张秋亚 马晓妍 +1 位作者 王晓昌 游猛 《环境科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2017年第4期1506-1512,共7页

针对水环境中内分泌干扰物低浓度、高风险的特点,采用酵母菌法和酶联免疫法对3个污水处理工艺流程中污水的雌激素活性和雌二醇(E2)水平进行评价.结果表明,污水厂进水的雌二醇当量(EEQ)和E2的水平分别为4.35~7.58 ng·L^(-1)和36.95~... 针对水环境中内分泌干扰物低浓度、高风险的特点,采用酵母菌法和酶联免疫法对3个污水处理工艺流程中污水的雌激素活性和雌二醇(E2)水平进行评价.结果表明,污水厂进水的雌二醇当量(EEQ)和E2的水平分别为4.35~7.58 ng·L^(-1)和36.95~83.43 ng·L^(-1).雌激素活性和E2的去除主要发生在生物处理阶段,如氧化沟、A^2/O和A^2/O+MBR工艺,且经以上工艺处理之后,雌激素活性和E2分别降低71.10%~75.54%和75.88%~80.72%.污泥对雌激素效应具有一定的去除作用,通过吸附作用污泥的EEQ和E2的含量分别为1.84~2.43 ng·g^(-1)和8.45~12.84 ng·g^(-1).但污水厂出水仍具有较高的雌激素活性,其EEQ为1.06~2.19 ng·L^(-1),对受纳水体的水生生物具有潜在的危害.酶联免疫法与酵母菌法具有很好的一致性,并为水环境雌激素的快速筛选和评价提供了一个新方法. 展开更多

关键词 污水 酵母菌法 酶联免疫法 雌激素活性 雌二醇(E2) 去除率

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包被稳定剂和酶结合物稳定剂稳定效果的初步观察 被引量：1

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作者 薛茵 王金龙 《标记免疫分析与临床》 CAS 1996年第2期104-106,共3页

包被稳定剂和酶结合物稳定剂稳定效果的初步观察薛茵，王金龙在ＥＬＩＳＡ检测中，为了能使予包被的抗原在较长时间内保持活性，常将予包被的酶标板真空干燥后密封保存。这样做的缺点是耗时。另一种常用的试剂是酶标记抗体，以ＨＲＰ标... 包被稳定剂和酶结合物稳定剂稳定效果的初步观察薛茵，王金龙在ＥＬＩＳＡ检测中，为了能使予包被的抗原在较长时间内保持活性，常将予包被的酶标板真空干燥后密封保存。这样做的缺点是耗时。另一种常用的试剂是酶标记抗体，以ＨＲＰ标记的抗体为多。这种标记抗体极易失活... 展开更多

关键词 elsia 包被稳定剂 酶结合物 稳定剂

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