酵母Elp3（Yeast elongation protein 3,yElp3）是组蛋白乙酰转移酶复合物Elongator的催化亚基,通过组蛋白乙酰化参与基因转录延伸。近来证实胞质中也存在的Elp3还参与胞外分泌、tRNA修饰等重要生物学过程。为深入研究Elp3的复杂功能,PC...酵母Elp3（Yeast elongation protein 3,yElp3）是组蛋白乙酰转移酶复合物Elongator的催化亚基,通过组蛋白乙酰化参与基因转录延伸。近来证实胞质中也存在的Elp3还参与胞外分泌、tRNA修饰等重要生物学过程。为深入研究Elp3的复杂功能,PCR法克隆pYES2-yElp3质粒中编码yElp3N末端亲水区段（22~94aa）,构建原核表达载体pMXB10-yElp3-219,经IPTG诱导表达和几丁质柱纯化后免疫兔制备多克隆抗体。ELISA检测显示该抗体有较高的效价（不低于1：2500）,免疫印迹结果表明该抗体可特异性识别表达纯化及酵母细胞中的Elp3蛋白,运用该抗体进行的染色质免疫沉淀揭示转入elp3？菌株的酵母/人融合的yhElp3之所以可补偿突变株的基因表达延迟缺陷,是因其直接参与SSA3基因的转录延伸。展开更多
人Elp3蛋白(human Elongator protein 3,hElp3)是组蛋白乙酰转移酶(Histone acetyltranferase,HAT)Elongator复合物的催化亚基,可参与组蛋白乙酰化修饰与基因转录延伸,其功能异常与人类多种疾病相关.目前对其羧基末端高度保守的第二功...人Elp3蛋白(human Elongator protein 3,hElp3)是组蛋白乙酰转移酶(Histone acetyltranferase,HAT)Elongator复合物的催化亚基,可参与组蛋白乙酰化修饰与基因转录延伸,其功能异常与人类多种疾病相关.目前对其羧基末端高度保守的第二功能域研究较少.以pYES2hElp3质粒为模板,PCR获hElp3基因全长,插入改造的毕赤酵母表达载体pPIC9KH,转化巴斯德毕赤酵母菌GS115菌株.经表型鉴定、PCR分析和G418筛选得到Mut+型多拷贝整合菌.0.5%的甲醇诱导hElp3高效分泌表达,Ni-NTA纯化及Western印迹证实获目的蛋白.OPA法测得其拥有良好的HAT活性,为体外测定其第二结构域是否拥有催化活性奠定了基础,对筛选抑制其HAT活性的小分子药物用于疾病治疗研究至关重要.展开更多
文摘酵母Elp3（Yeast elongation protein 3,yElp3）是组蛋白乙酰转移酶复合物Elongator的催化亚基,通过组蛋白乙酰化参与基因转录延伸。近来证实胞质中也存在的Elp3还参与胞外分泌、tRNA修饰等重要生物学过程。为深入研究Elp3的复杂功能,PCR法克隆pYES2-yElp3质粒中编码yElp3N末端亲水区段（22~94aa）,构建原核表达载体pMXB10-yElp3-219,经IPTG诱导表达和几丁质柱纯化后免疫兔制备多克隆抗体。ELISA检测显示该抗体有较高的效价（不低于1：2500）,免疫印迹结果表明该抗体可特异性识别表达纯化及酵母细胞中的Elp3蛋白,运用该抗体进行的染色质免疫沉淀揭示转入elp3？菌株的酵母/人融合的yhElp3之所以可补偿突变株的基因表达延迟缺陷,是因其直接参与SSA3基因的转录延伸。
文摘人Elp3蛋白(human Elongator protein 3,hElp3)是组蛋白乙酰转移酶(Histone acetyltranferase,HAT)Elongator复合物的催化亚基,可参与组蛋白乙酰化修饰与基因转录延伸,其功能异常与人类多种疾病相关.目前对其羧基末端高度保守的第二功能域研究较少.以pYES2hElp3质粒为模板,PCR获hElp3基因全长,插入改造的毕赤酵母表达载体pPIC9KH,转化巴斯德毕赤酵母菌GS115菌株.经表型鉴定、PCR分析和G418筛选得到Mut+型多拷贝整合菌.0.5%的甲醇诱导hElp3高效分泌表达,Ni-NTA纯化及Western印迹证实获目的蛋白.OPA法测得其拥有良好的HAT活性,为体外测定其第二结构域是否拥有催化活性奠定了基础,对筛选抑制其HAT活性的小分子药物用于疾病治疗研究至关重要.
