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人Elongator复合物Elp4亚基基因可部分补偿酵母ELP4缺失菌株的生长缺陷 被引量:3
1
作者 李芬 韩秋菊 +2 位作者 罗巅辉 陆军 黄百渠 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第7期668-674,共7页
为研究人Elongator复合物Elp4亚基的功能 ,将人ELP4基因转入酵母ELP4基因缺失的突变菌株 (elp4△菌株 )中 ,并对转化菌株进行功能互补实验和SSA3和PHO5基因表达分析 ,结果表明人的ELP4基因不能恢复突变菌株对高盐的敏感性 ,但可以在一... 为研究人Elongator复合物Elp4亚基的功能 ,将人ELP4基因转入酵母ELP4基因缺失的突变菌株 (elp4△菌株 )中 ,并对转化菌株进行功能互补实验和SSA3和PHO5基因表达分析 ,结果表明人的ELP4基因不能恢复突变菌株对高盐的敏感性 ,但可以在一定程度上缓解突变菌株对高温、咖啡因 (Caffeine)和 6 氮尿嘧啶 (6 AU)的敏感性 ,部分恢复低磷条件下PHO5基因表达延迟的缺陷 ,并可在热激条件下提高SSA3基因的表达 ,因此人的ELP4基因可以部分补偿酵母ELP4基因缺失所引起的生长缺陷 ,提示人的Elp4亚基可能与酵母的该亚基功能相似。 展开更多
关键词 elp4基因 Elongator复合物 酵母elp4缺失突变株 功能互补 基因表达分析
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多房棘球绦虫ELP重组蛋白疫苗免疫Balb/c小鼠引起的免疫应答 被引量:30
2
作者 王昌源 陈雅棠 +1 位作者 余登高 黄爱龙 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期285-288,292,共5页
目的 观察多房棘球绦虫ELP重组蛋白疫苗免疫Balb c小鼠引起的体液和细胞免疫应答。方法 在成功构建多房棘球绦虫elp基因原核表达载体 (pQ ELP)的基础上 ,以亲和层析法纯化重组蛋白 ,SDS PAGE鉴定 ,Bradford法进行定量。用ELP重组蛋白... 目的 观察多房棘球绦虫ELP重组蛋白疫苗免疫Balb c小鼠引起的体液和细胞免疫应答。方法 在成功构建多房棘球绦虫elp基因原核表达载体 (pQ ELP)的基础上 ,以亲和层析法纯化重组蛋白 ,SDS PAGE鉴定 ,Bradford法进行定量。用ELP重组蛋白 (A组 )及ELP重组蛋白加弗氏佐剂 (B组 )免疫Balb c小鼠 (10只 组 ) ,以生理盐水 (NS组 )作对照。ELISA方法检测免疫后不同时间产生的特异性IgG1,IgG2a和IgG2b水平。双抗体夹心ELISA试剂盒检测免疫鼠脾脏单个核细胞 (PMNC)在受到特异抗原刺激后 ,产生IL 4、IL 12和IFN γ的能力 ,3H TdR掺入法检测脾淋巴细胞的增殖能力。结果 本研究成功获得高纯度重组蛋白ELP。首次免疫后 2周 ,A、B组小鼠均产生了大量的特异IgG1抗体 ,B组还产生了少量的特异IgG2b抗体。除B组小鼠脾PMNC产生了微量IFN γ外 ,A组、NS组IFN γ及各组IL 4和IL 12均未检出。A、B组小鼠脾淋巴细胞增殖能力增高 ,其淋巴细胞CPM值分别为NS组的 2 .8和 10 .8倍 ,受到多房棘球绦虫抗原或刀豆素刺激时 ,A、B组淋巴细胞增殖更明显。结论 多房棘球绦虫ELP重组蛋白疫苗可引起很强的体液免疫应答和微弱的细胞免疫应答 。 展开更多
关键词 多房棘球绦虫 elp重组蛋白 疫苗 免疫 BALB/C 小鼠 免疫应答
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四川株多房棘球绦虫elp基因融合表达载体的构建及其诱导表达 被引量:4
3
作者 王昌源 陈雅棠 +2 位作者 黄爱龙 唐霓 余登高 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2003年第4期37-41,共5页
目的 实现多房棘球绦虫elp基因在原核中的表达 ,为进一步研究多房棘球绦虫ELP抗原的诊断及免疫保护性提供前提条件。方法 应用RT -PCR方法从中国四川株多房棘球绦虫续绦期幼虫RNA获得elp基因编码序列 ,克隆测序后亚克隆于含有硫氧环蛋... 目的 实现多房棘球绦虫elp基因在原核中的表达 ,为进一步研究多房棘球绦虫ELP抗原的诊断及免疫保护性提供前提条件。方法 应用RT -PCR方法从中国四川株多房棘球绦虫续绦期幼虫RNA获得elp基因编码序列 ,克隆测序后亚克隆于含有硫氧环蛋白 (Trx)基因的高效原核表达载体pET32a(+)。经酶切鉴定后以IPTG诱导表达ELP/Trx融合蛋白。SDS -PAGE及Westernblot进行鉴定。亲和层析纯化ELP/Trx融合蛋白 ,用于ELISA检测患者血清特异性抗体。结果 酶切鉴定显示本研究已将elp基因编码序列插入 pET32a(+)的多克隆位点 ,成功地构建了pETrx -ELP融合蛋白原核表达载体。SDS -PAGE及Westernblot分析显示重组质粒转化宿主菌在IPTG诱导下高效表达了ELP/Trx融合蛋白。检测 10份包虫病人血清均阳性 ,10份肝吸虫病、10份乙肝病人和 10份健康人血清均为阴性。结论 中国四川株多房棘球绦虫elp基因在大肠杆菌中获得了高效融合表达 ,初步实验结果显示该融合蛋白对包虫病具有诊断价值。 展开更多
关键词 多房棘球绦虫 elp基因 融合表达载体 构建 诱导表达
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多房棘球绦虫elp基因核酸疫苗诱生免疫应答的实验研究 被引量:4
4
作者 王昌源 张洪花 +1 位作者 陈雅棠 黄爱龙 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期446-449,共4页
目的观察多房棘球绦虫elp基因核酸疫苗免疫BALB/c小鼠引起的体液和细胞免疫应答。方法30只BALB/c小鼠随机分成3组:Ⅰ组,肌注空质粒(pcDNA3.1)100μg/鼠;Ⅱ组,肌注多房棘球绦虫elp基因真核表达重组质粒(pcD-ELP)100μg/鼠;NS组,肌注等体... 目的观察多房棘球绦虫elp基因核酸疫苗免疫BALB/c小鼠引起的体液和细胞免疫应答。方法30只BALB/c小鼠随机分成3组:Ⅰ组,肌注空质粒(pcDNA3.1)100μg/鼠;Ⅱ组,肌注多房棘球绦虫elp基因真核表达重组质粒(pcD-ELP)100μg/鼠;NS组,肌注等体积生理盐水。每2周免疫1次,共3次。ELISA方法检测免疫后不同时间产生的特异性IgG1,IgG2a和IgG 2 b水平。双抗体夹心ELISA法检测免疫鼠脾脏单个核细胞(PMNC)在受到特异抗原刺激后,产生IL-4I、L-12和IFN-γ的能力,3H-TdR掺入法检测脾淋巴细胞的增值能力。结果首次免疫后4周,Ⅱ组小鼠血清可检测到特异性IgG1I、gG2a和IgG2b抗体,随免疫时间和免疫次数的增加3种特异性抗体的OD值逐渐增高,实验结束时(首次免疫后7周)3种特异性抗体OD值均最高。Ⅰ组和Ⅱ组小鼠脾PMNC培养上清中IFN-γ浓度分别为50 pg/ml和55 pg/ml,受特异抗原刺激后分别为44 pg/ml和101.5 pg/ml。NS组IFN-γ及各组IL-4和IL-12均未检出。Ⅰ组和Ⅱ组小鼠脾淋巴细胞增殖能力增高,其淋巴细胞CPM值分别为NS组的85倍和123倍,受到特异抗原或刀豆素刺激其淋巴细胞增殖更明显。结论多房棘球绦虫elp基因核酸疫苗可刺激BALB/c小鼠同时产生很强的细胞免疫和体液免疫应答。 展开更多
关键词 多房棘球绦虫elp基因 核酸疫苗 免疫应答 BALB/e小鼠
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多房棘球绦虫ELP抗原在大肠埃希菌中的表达及其在免疫诊断中的初步应用 被引量:4
5
作者 王昌源 张洪花 +2 位作者 陈雅棠 李文桂 唐霓 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2006年第2期98-101,共4页
目的实现多房棘球绦虫ELP蛋白在大肠埃希菌中的表达,制备高纯度、高特异性的重组抗原,为多房棘球绦虫感染的流行病学调查和临床诊断提供新的工具。方法在建立了多房棘球绦虫elp基因克隆的基础上,应用亚克隆方法将目的基因插入原核非融... 目的实现多房棘球绦虫ELP蛋白在大肠埃希菌中的表达,制备高纯度、高特异性的重组抗原,为多房棘球绦虫感染的流行病学调查和临床诊断提供新的工具。方法在建立了多房棘球绦虫elp基因克隆的基础上,应用亚克隆方法将目的基因插入原核非融合表达载体pQE30(+)。经酶切鉴定,转化于大肠埃希菌,以IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE及Westernblot进行鉴定。亲和层析纯化ELP蛋白,用于ELISA检测患者血清特异性抗体。结果酶切鉴定、SDS-PAGE及Westernblot分析证实,成功地构建了pQ-ELP原核非融合表达载体,该载体转化大肠埃希菌在IPTG诱导下能高效表达ELP蛋白。ELP重组抗原用于ELISA检测18份包虫病人血清均阳性,10份华支睾吸虫病、27份乙肝病毒感染者和10份健康人血清均为阴性。结论多房棘球绦虫ELP抗原在大肠埃希菌中得到了高效非融合表达,初步实验结果显示该重组蛋白对包虫病具有较高的诊断价值。 展开更多
关键词 多房棘球绦虫 elp抗原 非融合表达 免疫诊断
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多房棘球绦虫elp基因在真核细胞COS7中的表达 被引量:8
6
作者 王昌源 陈雅棠 +2 位作者 黄爱龙 唐霓 余登高 《中国寄生虫病防治杂志》 CSCD 2003年第1期38-42,共5页
目的 构建中国四川株多房棘球绦虫 elp基因真核表达载体 ,为核酸疫苗研究奠定基础。 方法 应用 RT-PCR方法从多房棘球绦虫续绦期幼虫 RNA获得 elp基因的编码序列 ,定向克隆于 p GEM- 11zf( +)。经酶切鉴定及测序后将目的基因亚克隆... 目的 构建中国四川株多房棘球绦虫 elp基因真核表达载体 ,为核酸疫苗研究奠定基础。 方法 应用 RT-PCR方法从多房棘球绦虫续绦期幼虫 RNA获得 elp基因的编码序列 ,定向克隆于 p GEM- 11zf( +)。经酶切鉴定及测序后将目的基因亚克隆于真核表达载体 pc DNA3.1( +)。重组真核表达载体 pc D- EL P鉴定后 ,纯化无内毒素的重组质粒 ,电穿孔方法转染哺乳动物细胞 COS7。RT- PCR、dot- EL ISA和免疫组化方法鉴定目的基因在 COS7细胞中的表达。 结果 琼脂糖凝胶电泳、酶切及序列分析证实多房棘球绦虫 elp基因编码区已成功地克隆于真核表达载体 pc DNA3.1( +)。RT- PCR、dot- EL ISA和免疫组化证实 ,重组质粒在哺乳动物细胞 COS7中能够表达多房棘球绦虫 EL P抗原。 结论 成功地构建了中国四川株多房棘球绦虫 elp基因的真核表达载体 ,该载体在 COS7哺乳动物细胞中能表达 EL P抗原 ,为多房棘球绦虫 elp基因疫苗研究奠定了基础。 展开更多
关键词 多房棘球绦虫 elp基因 真核表达 COS7 RT-PCR DOT-ELISA 免疫组化
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酵母组蛋白乙酰转移酶Elp3多克隆抗体的制备、鉴定及应用 被引量:5
7
作者 李芬 田树娟 +2 位作者 张帅 孔艳 王艳芳 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期1261-1266,共6页
酵母Elp3(Yeast elongation protein 3,yElp3)是组蛋白乙酰转移酶复合物Elongator的催化亚基,通过组蛋白乙酰化参与基因转录延伸。近来证实胞质中也存在的Elp3还参与胞外分泌、tRNA修饰等重要生物学过程。为深入研究Elp3的复杂功能,PC... 酵母Elp3(Yeast elongation protein 3,yElp3)是组蛋白乙酰转移酶复合物Elongator的催化亚基,通过组蛋白乙酰化参与基因转录延伸。近来证实胞质中也存在的Elp3还参与胞外分泌、tRNA修饰等重要生物学过程。为深入研究Elp3的复杂功能,PCR法克隆pYES2-yElp3质粒中编码yElp3N末端亲水区段(22~94aa),构建原核表达载体pMXB10-yElp3-219,经IPTG诱导表达和几丁质柱纯化后免疫兔制备多克隆抗体。ELISA检测显示该抗体有较高的效价(不低于1:2500),免疫印迹结果表明该抗体可特异性识别表达纯化及酵母细胞中的Elp3蛋白,运用该抗体进行的染色质免疫沉淀揭示转入elp3?菌株的酵母/人融合的yhElp3之所以可补偿突变株的基因表达延迟缺陷,是因其直接参与SSA3基因的转录延伸。 展开更多
关键词 elp3 原核表达 多克隆抗体 染色质免疫沉淀实验
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人Elongator复合物Elp3亚基基因可显著补偿酵母elp3缺失菌株的生长缺陷 被引量:2
8
作者 李芬 韩秋菊 +1 位作者 陆军 黄百渠 《实验生物学报》 CSCD 北大核心 2005年第5期369-376,共8页
从HeLa细胞中分离的人的Elongator复合物在组成及与RNAPⅡ的作用方式上与酵母的E- longator复合物十分相似,但对其功能研究极少。为了研究人的Elongator复合物催化亚基Elp3的功能,将人elp3等基因转入酵母elp3基因缺失的突变菌株(elp3Δ... 从HeLa细胞中分离的人的Elongator复合物在组成及与RNAPⅡ的作用方式上与酵母的E- longator复合物十分相似,但对其功能研究极少。为了研究人的Elongator复合物催化亚基Elp3的功能,将人elp3等基因转入酵母elp3基因缺失的突变菌株(elp3Δ菌株),并对转化菌株进行功能互补实验和ssa3和pho5基因表达分析,结果表明人elp3基因可显著恢复突变菌株对高温和Caffeine的敏感性,在低磷条件下显著补偿了突变株pho5基因表达延迟的缺陷,并可在热激条件下提高ssa3基因的表达。含酵母elp3非HAT区和人elp3 HAT区的融合yhelp3对上述缺陷有着更强的补偿能力。而HAT区催化结构域缺失的yhelp3HAT没有任何补偿能力,表明人Elp3亚基可能与酵母的该亚基功能相似,人Elp3的HAT活性也为其行使功能所必需。 展开更多
关键词 elp3基因 HAT活性 Elongator复合物 功能互补 基因缺失 催化亚基 补偿能力 生长缺陷 缺失菌株 复合物
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时钟芯片SD2200ELP与AVR单片机的接口设计 被引量:2
9
作者 李浩 谭超 卢舟燕 《单片机与嵌入式系统应用》 2006年第10期44-46,共3页
SD2200ELP是深圳兴威帆电子技术有限公司生产的高精度实时时钟芯片。本文给出了时钟芯片SD2200ELP与ATmega16的接口设计,并实现了AVR的TWI总线对SD2200ELP进行时钟和E2PROM的读/写操作的C语言程序,具有很强的实用性和通用性。
关键词 SD2200elp ATMEGA16 实时时钟I^2C E^2PROM
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一种含ELP60基因的载体pRELPN促进大肠杆菌的外源基因的高表达 被引量:1
10
作者 徐根兴 戴宇青 赵广义 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期1004-1012,共9页
类弹性蛋白多肽(ELP)为含有人工合成的ELP60基因的表达载体pRELPN,能促使外源基因在大肠杆菌中的高表达。当ELP60在大肠杆菌表达载体p ET28a的多克隆位点被克隆后,其自身的表达低,也不与目的基因构成ELP融合蛋白质,而是促进克隆在ELP60... 类弹性蛋白多肽(ELP)为含有人工合成的ELP60基因的表达载体pRELPN,能促使外源基因在大肠杆菌中的高表达。当ELP60在大肠杆菌表达载体p ET28a的多克隆位点被克隆后,其自身的表达低,也不与目的基因构成ELP融合蛋白质,而是促进克隆在ELP60基因后的含起始密码ATG的外源目的基因独立高表达。外源目的基因表达量占宿主蛋白的20%~60%,比用p ET28a载体表达的外源基因表达量高2~10倍。此类表达载体pRELPN适合于表达包括抗体、抗原、酶、重组蛋白质、多肽及ELP融合蛋白质等的外源基因的独立高表达。这些结果表明,pRELPN代表了一种有效的表达载体,有助于解决在原核表达中,所受限的普通载体对外源基因低表达或不表达所导致的不能产业化的问题。 展开更多
关键词 类弹性蛋白多肽 elp60基因表达载体pRelpN 重组蛋白质
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家蚕长形卵(elp)卵壳的特异构造 被引量:3
11
作者 鲁成 向仲怀 陈家莲 《蚕学通讯》 1991年第1期17-19,共3页
用扫描电镜观察了长形卵的卵壳表面及断面构造,发现卵中央部表面构成网状卵纹的多边形小室呈长形,其长轴方向与卵的长轴方向是一致的。而其断面构造与正常卵完全相同。著者认为:这表明长形卵基因(elp)的作用影响了滤泡细胞的形状,而对... 用扫描电镜观察了长形卵的卵壳表面及断面构造,发现卵中央部表面构成网状卵纹的多边形小室呈长形,其长轴方向与卵的长轴方向是一致的。而其断面构造与正常卵完全相同。著者认为:这表明长形卵基因(elp)的作用影响了滤泡细胞的形状,而对其分泌机能的影响较小。同时,形成长形卵的原因,很可能就是由于滤泡细胞变长之故。另外,从卵壳构造与其生理机能来看,似乎表明:卵壳的生理机能由其断面结构所决定,而断面构造与滤泡细胞分泌机能密切相关,受其形状的影响较小。 展开更多
关键词 家蚕 卵壳构造 长形卵(elp)
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高精度实时时钟SD2000ELP与单片机的接口设计和编程方法 被引量:1
12
作者 刘军亮 王盛安 蔡树群 《仪表技术》 2007年第9期43-45,共3页
文章以MSC1210Y5单片机为例介绍SD2000ELP与单片机的接口设计和编程方法,并给出源程序清单。
关键词 SD2000elp 实时时钟 Ⅰ2C总线
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ELP方法在企业信息化资源配置中的应用
13
作者 倪明 徐福缘 李生琦 《中国管理科学》 CSSCI 2004年第z1期542-545,共4页
根据BPR的思想,现代企业可以组建为生产部、采购部、营销部、R&D、人力资源部、财务部等六个部门.企业如何将有限信息化资源在六个部门间合理配置,使得信息化产出最优,针对这种情形,提出基于ELP方法求解信息化资源配置问题的模型,... 根据BPR的思想,现代企业可以组建为生产部、采购部、营销部、R&D、人力资源部、财务部等六个部门.企业如何将有限信息化资源在六个部门间合理配置,使得信息化产出最优,针对这种情形,提出基于ELP方法求解信息化资源配置问题的模型,克服了传统LP方法求解的不足,该模型为企业合理配置信息化资源提供理论依据,从而有效防止企业信息化的"IT黑洞"发生. 展开更多
关键词 企业信息化 elp 资源配置 IT黑洞
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利用ELP自断裂标签在大肠杆菌中生产抗菌肽Oxysterlin 1 被引量:4
14
作者 郭丽 刘化鑫 林瑛 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第8期2915-2923,共9页
抗菌肽是目前最有希望的抗生素替代品,但是使用重组技术生产抗菌肽的策略大多步骤烦琐且价格昂贵,不利于抗菌肽的规模化生产。Oxysterlin1是一种新型的天蚕素抗菌肽,主要对革兰氏阴性菌有抗菌活性,具有较低的细胞毒性。文中利用一种简... 抗菌肽是目前最有希望的抗生素替代品,但是使用重组技术生产抗菌肽的策略大多步骤烦琐且价格昂贵,不利于抗菌肽的规模化生产。Oxysterlin1是一种新型的天蚕素抗菌肽,主要对革兰氏阴性菌有抗菌活性,具有较低的细胞毒性。文中利用一种简单经济的方法在大肠杆菌中实现Oxysterlin 1的表达和纯化。将Oxysterlin 1基因克隆到含有弹性蛋白样多肽Elastin-like polypeptide(ELP)和蛋白质内含肽(Intein)的载体中,构建重组表达质粒pET-ELP-I-Oxysterlin1。重组蛋白在大肠杆菌中主要以可溶性形式表达,进而通过简单的盐析和pH改变便可对目标小肽进行纯化。最终得到的Oxysterlin 1的产量约为1.2mg/L,抑菌试验显示出预期活性,为抗菌肽的规模化生产及深入研究其抑菌机理奠定基础。 展开更多
关键词 抗菌肽 elp标签 蛋白质内含肽 抑菌活性
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自组装ELP多肽的从头设计及其在生物医药领域中的应用进展 被引量:2
15
作者 杨国新 侯佳男 +1 位作者 胡学军 杨君 《生命的化学》 CAS 2021年第2期296-305,共10页
重组类弹性蛋白多肽(elastin-like polypeptides, ELPs)是一种通过基因工程方法合成的多肽聚合物,其结构由类弹性蛋白的肽段单元重复串连组成,具有刺激响应性、自组装特性、显著的弹性和良好的生物学特性,如低血小板黏附性和低免疫原性... 重组类弹性蛋白多肽(elastin-like polypeptides, ELPs)是一种通过基因工程方法合成的多肽聚合物,其结构由类弹性蛋白的肽段单元重复串连组成,具有刺激响应性、自组装特性、显著的弹性和良好的生物学特性,如低血小板黏附性和低免疫原性等,因此ELPs材料已被广泛应用于组织工程、药物输送和纳米生物器件制备等生物医药应用领域。本文综合了国内外文献报道,简要介绍了ELPs的性质,重点阐述了ELPs自组装的设计原理、结构及其在药物控释等生物医药领域中的研究与应用进展。 展开更多
关键词 elps 从头设计 自组装行为 药物控释
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人源性蓝氏贾第鞭毛虫Elp3基因的克隆及序列分析 被引量:1
16
作者 张维维 王云华 +1 位作者 王乙惠 李雅杰 《热带医学杂志》 CAS 2011年第1期1-3,10,F0002,共5页
目的克隆蓝氏贾第鞭毛虫Elp3基因,并应用生物信息学方法进行分析。方法根据蓝氏贾第鞭毛虫Elp3已知基因序列的特点设计引物,利用PCR技术扩增获得Elp3的核苷酸序列,连接到pET28a载体并测定序列。应用生物信息学方法分析Elp3基因的序列同... 目的克隆蓝氏贾第鞭毛虫Elp3基因,并应用生物信息学方法进行分析。方法根据蓝氏贾第鞭毛虫Elp3已知基因序列的特点设计引物,利用PCR技术扩增获得Elp3的核苷酸序列,连接到pET28a载体并测定序列。应用生物信息学方法分析Elp3基因的序列同源性与结构特征。结果扩增片段长度为1767bp,测序结果与蓝氏贾第鞭毛虫WB株(GL50830)同源性100%。可构建生物进化树,进行同源结构建模发现,71-362aa具有一个保守的S-腺甙基蛋氨酸区域,458-584aa具有组蛋白乙酰基转移酶区域。结论成功克隆了蓝氏贾第鞭毛虫Elp3基因,生物信息学分析发现,其在进化上与其它物种不属同一起源,具有SAM和HAT的结构和功能,这些发现为进一步研究其生物学功能提供了依据和线索。 展开更多
关键词 蓝氏贾第鞭毛虫 elp3基因克隆 生物信息学
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利用ELP-Intein系统在大肠杆菌中生产抗菌肽DLP4 被引量:2
17
作者 姜宇 李秀 林瑛 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期2365-2376,共12页
DLP4 (defensin-like peptide 4)是一种新型昆虫防御素抗菌肽,对革兰氏阳性细菌具有强大的抗菌活性而且不易产生抗药性。本研究利用类弹性蛋白(elastin-like polypeptide, ELP)的相变特性和蛋白质内含子(intein, I)的C端断裂系统,通过... DLP4 (defensin-like peptide 4)是一种新型昆虫防御素抗菌肽,对革兰氏阳性细菌具有强大的抗菌活性而且不易产生抗药性。本研究利用类弹性蛋白(elastin-like polypeptide, ELP)的相变特性和蛋白质内含子(intein, I)的C端断裂系统,通过构建重组表达质粒pET-ELP-I-DLP4,以大肠杆菌(Escherichia coli)作为宿主细胞,诱导表达后的重组蛋白通过简单的离心、pH和温度转变进行纯化得到DLP4。研究中发现,在表达纯化过程中蛋白质内含子发生了C端提前断裂。为了解决这一问题,将其断裂为N端片段(I0;)和C端片段(I0;)后,分别与ELP或DLP4融合,构建了pET-ELP-I0;和pET-ELP-I0;-DLP4两种重组表达质粒。分别在大肠杆菌中诱导表达,将表达后的菌液混合,使蛋白质内含子恢复C端断裂活性,最终得到的DLP4的得率约为1.49 mg/L。抑菌试验证明纯化的DLP4表现出预期活性,这为DLP4在原核系统中的表达纯化提供了有效途径。 展开更多
关键词 抗菌肽 elp标签 蛋白质内含子 断裂蛋白质内含子 抑菌活性
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Elp3基因缺失对酿酒酵母咖啡因耐受性的影响 被引量:1
18
作者 胡孟可 吴秀丽 李芬 《河南师范大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2022年第2期143-149,共7页
过量咖啡因(Caffeine,CAF)对真核细胞有毒害作用.Elp3是组蛋白乙酰转移酶Elongator复合物的催化亚基,其缺失会影响Elongator的功能,进而使酵母产生对CAF敏感表型.为研究酿酒酵母CAF耐受性,以不同浓度CAF处理野生型、elp3⊿及转入完整和... 过量咖啡因(Caffeine,CAF)对真核细胞有毒害作用.Elp3是组蛋白乙酰转移酶Elongator复合物的催化亚基,其缺失会影响Elongator的功能,进而使酵母产生对CAF敏感表型.为研究酿酒酵母CAF耐受性,以不同浓度CAF处理野生型、elp3⊿及转入完整和部分缺失Elp3的elp3⊿菌株,检测其敏感性,并通过RT-qPCR和ChIP实验研究了热激胁迫下SSA3的表达.结果发现常温下各菌株生长均随CAF浓度的增加而减缓,且elp3⊿细胞CAF耐受性下降更显著;高温处理使elp3⊿菌株对CAF更加敏感;在elp3⊿菌株中转入两保守功能域缺失的Elp3,其咖啡因耐受性并无明显变化;无论热激与否,elp3⊿菌株SSA3表达均显著低于野生型对照,Elp3直接参与热激胁迫下SSA3的转录延伸.研究表明Elp3基因缺失和高温处理均可使酿酒酵母的CAF耐受性降低;Elp3两保守功能域为其参与CAF胁迫反应所必需;高温协同处理下elp3⊿菌株CAF耐受性的显著降低可能与此条件下SSA3等应激基因表达受阻有关. 展开更多
关键词 咖啡因耐受性 酿酒酵母 elp3 SSA3 保守结构域
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ELP电力设备运输智能终端的研发及应用
19
作者 沈祝园 张弛 +2 位作者 邱帅 周继来 张军 《电力系统装备》 2023年第10期53-56,共4页
ELP电力物流平台运输监测智能终端是针对ELP电力物流平台接入需求开发的智能监测终端。该终端通过内置的传感器、定位模块及4G通信模块,可以实现运输全过程状态监测、定位以及4G远传通信功能。并在实际电网项目电力设备运输中进行了成... ELP电力物流平台运输监测智能终端是针对ELP电力物流平台接入需求开发的智能监测终端。该终端通过内置的传感器、定位模块及4G通信模块,可以实现运输全过程状态监测、定位以及4G远传通信功能。并在实际电网项目电力设备运输中进行了成功的试点应用。通过ELP电力设备运输监测智能终端的开发和应用,响应国网公司ELP平台的应用推广需求,能够对江苏省网乃至全国网的电力物资运输过程提供监测保障服务。 展开更多
关键词 电力物流服务平台 运输 可视化 elp elp电力物流平台运输监测智能终端
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酵母Elp3在毕赤酵母中的分泌表达及活性测定
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作者 白雪 马瑜 +2 位作者 陈百宝 胡岩岩 李芬 《河南师范大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期98-102,共5页
酵母Elp3是Elongator复合物的催化亚基,可参与组蛋白乙酰化修饰与基因转录延伸.生物信息学分析及有关研究表明Elp3除组蛋白乙酰转移酶(Histone acetyltranferase,HAT)活性外,可能还拥有组蛋白去甲基化酶活性.本文以yElp3的pYES2yElp3质... 酵母Elp3是Elongator复合物的催化亚基,可参与组蛋白乙酰化修饰与基因转录延伸.生物信息学分析及有关研究表明Elp3除组蛋白乙酰转移酶(Histone acetyltranferase,HAT)活性外,可能还拥有组蛋白去甲基化酶活性.本文以yElp3的pYES2yElp3质粒为模板,PCR获得yElp3基因全长,插入改造过的毕赤酵母表达载体pPIC9KH,转化巴斯德毕赤酵母GS115菌株.经表型鉴定、PCR分析及G418筛选获Mut+型多拷贝整合菌,经0.5%的甲醇诱导和Ni-NTA纯化,得到目的蛋白并对其进行体外酶活测定.SDS-PAGE分析表明yElp3在毕赤酵母中实现了高效分泌表达,Western印迹证实得到的蛋白为yElp3.OPA法测得纯化蛋白拥有较好的HAT活性,具有生物活性的Elp3蛋白的获得为体外测定其第二结构域是否有催化活性奠定了基础. 展开更多
关键词 酵母elp3 毕赤酵母 分泌表达 活性测定
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