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ELISA试验室内质控框架构建方法改进初探
1
作者 段友斌 王瑞 +6 位作者 常乐 邱昌文 李志强 陈庚瑞 杨婧涓 何清 王露楠 《中国输血杂志》 2026年第1期103-108,共6页
目的对9家血站实验室室内质控数据进行统计分析,提出改进ELISA试验室内质控框架构建方法的参考建议,并进行验证。方法1)收集9家血站室内质控数据,以某国产HBsAg ELISA检测试剂为例进行分析;2)比较血站1各批次室内质控值是否存在差异;3)... 目的对9家血站实验室室内质控数据进行统计分析,提出改进ELISA试验室内质控框架构建方法的参考建议,并进行验证。方法1)收集9家血站室内质控数据,以某国产HBsAg ELISA检测试剂为例进行分析;2)比较血站1各批次室内质控值是否存在差异;3)统计分析9家血站室内质控批次使用情况、使用批次数、使用天数、质控次数、各批次均值和变异系数;4)采用改进的ELISA试验室内质控框架构建方法,构建血站1和血站9各批次室内质控的临时框架和固定框架,并对离群值进行判定。结果1)ELISA试验各批次室内质控数据有差异(P<0.01),宜更换质控品和试剂时均更换质控框架。2)9家血站之间使用的质控品和试剂批号、每批次质控次数、相同批号质控值差异较大,宜由各实验室单独建立室内质控框架。3)改进ELISA试验室内质控框架构建方法为:使用框架平移,即预实验均值和上一批次累积变异系数构建临时框架,如该批次使用时间≥20 d且质控数据≥20点,则累积20 d至少20个点后,汇集计算在控数据累积质控均值和标准差构建固定框架。使用该方法构建的临时框架和固定框架,判定血站1和血站9室内质控26个极端离群值均为失控。218个一般离群值,除10个被临时框架判定为正常外,其余均判定为警告和失控,能够有效监控试验稳定性。结论根据不同规模血站室内质控情况的统计分析结果,结合ELISA试验的特性、试剂质控品批间的不稳定性,建议在更换质控品或试剂批号时重新构建质控图,以框架平移建立临时框架,以累计数据计算固定框架,适用于不同规模血站实验室,能够对ELISA试验过程稳定性进行有效控制。 展开更多
关键词 elisa试验 室内质控 质控框架 血站实验室
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基于牛病毒性腹泻病毒核心蛋白C间接ELISA抗体检测方法的建立
2
作者 贾东鹭 阮武营 +11 位作者 刘飞飞 李星仪 杨澳飞 尹波 陈慧敏 陈建 魏颖 何雷 余祖华 马雪连 丁轲 陈松彪 《中国兽医科学》 北大核心 2026年第1期63-70,共8页
为建立基于牛病毒性腹泻病毒(BVDV)核心蛋白C的间接ELISA检测方法,通过PCR扩增出BVDV C基因,克隆至原核表达载体pET-32a,构建重组质粒pET-32a-C,经IPTG诱导表达纯化后免疫BABL/c小鼠制备多克隆抗体,以C蛋白为包被抗原,建立间接ELISA检... 为建立基于牛病毒性腹泻病毒(BVDV)核心蛋白C的间接ELISA检测方法,通过PCR扩增出BVDV C基因,克隆至原核表达载体pET-32a,构建重组质粒pET-32a-C,经IPTG诱导表达纯化后免疫BABL/c小鼠制备多克隆抗体,以C蛋白为包被抗原,建立间接ELISA检测方法。结果显示,pET-32a-C重组质粒构建成功,重组C蛋白大小约为30 k Da,能够以可溶形式表达,30℃、0.8 mmol/L IPTG诱导6 h可溶性表达最佳;该蛋白免疫BABL/c小鼠后制备血清抗体效价为1∶128000,能够特异性识别C蛋白。该ELISA检测方法的最适条件为:0.5μg/m L抗原37℃包被2 h,10 g/L BSA溶液37℃封闭3 h,1∶16000稀释血清孵育2 h,二抗孵育40 min,避光显色10 min,阴阳性临界值判定标准为0.224,具有良好的特异性和重复性。利用本方法对未免疫接种的疑似BVDV感染的牛血清进行检测,与RT-qPCR核酸检测方法相比,二者阳性符合率达94.73%。上述结果表明,基于C蛋白建立的间接ELISA抗体检测方法特异性强、灵敏度高、重复性好,为BVDV临床诊断及开发基于C蛋白的间接ELISA检测试剂盒奠定了基础。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 核心蛋白C 原核表达 多克隆抗体 间接elisa
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牛病毒性腹泻病毒单克隆抗体的制备及抗原捕获ELISA检测方法的建立
3
作者 赵嘉豪 李树凡 +4 位作者 薛凤 王君 张灿 刘文华 徐守振 《中国兽医科学》 北大核心 2026年第1期56-62,共7页
为了制备牛病毒性腹泻病毒(BVDV)单克隆抗体及建立抗原捕获ELISA检测方法,采用大肠杆菌原核表达的BVDV Erns截短蛋白免疫BALB/c小鼠,三免后利用细胞融合和杂交瘤筛选,选用效价高的单克隆抗体,通过条件优化建立BVDV抗原捕获ELISA检测方法... 为了制备牛病毒性腹泻病毒(BVDV)单克隆抗体及建立抗原捕获ELISA检测方法,采用大肠杆菌原核表达的BVDV Erns截短蛋白免疫BALB/c小鼠,三免后利用细胞融合和杂交瘤筛选,选用效价高的单克隆抗体,通过条件优化建立BVDV抗原捕获ELISA检测方法,对其特异性、敏感性和重复性进行了验证,并与IDEXX商品化试剂盒及RT-PCR进行临床样品符合。结果显示,获得2株效价较高的Ig G1型单克隆抗体杂交瘤细胞2B3、2B10,轻链均为κ链。选用效价更高的2B10单克隆抗体作为检测抗体,家兔源BVDV多克隆抗体作为捕获抗体,建立的BVDV抗原捕获ELISA与临床常见病原(牛轮状病毒、牛冠状病毒、牛副流感病毒3型、牛呼吸道合胞体病毒、牛支原体)无交叉反应,最低可检测102.53TCID50的BVDV病毒液,批内和批间变异系数均低于5%,与IDEXX试剂盒和RT-PCR的总体符合率分别为91.76%~93.33%和94.12%~96.67%。结果表明,基于2B10单克隆抗体建立的BVDV抗原捕获ELISA检测方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,为BVDV的检测和防控提供了借鉴和技术手段。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 Erns蛋白 单克隆抗体 elisa
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ELISA在粮食检测中的应用研究
4
作者 王华东 姚奕雯 +3 位作者 吕梅晶 钱国良 徐斌宏 叶玲军 《粮油科学与工程》 2026年第1期18-20,共3页
针对粮食安全快速检测的迫切需求,重点探讨了酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)的应用价值。研究发现,ELISA在粮食真菌毒素筛查、农药残留检测、转基因成分测定以及重金属检测方面,检测效果均不亚于传统方法... 针对粮食安全快速检测的迫切需求,重点探讨了酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)的应用价值。研究发现,ELISA在粮食真菌毒素筛查、农药残留检测、转基因成分测定以及重金属检测方面,检测效果均不亚于传统方法,且检测效率极大提升。尽管在多重检测和设备配套方面存在挑战,ELISA仍是保障粮食品质与安全的关键技术。 展开更多
关键词 食品免疫 elisa 粮食检测
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一种基于截短N蛋白的猪丁型冠状病毒抗体ELISA检测方法的建立 被引量：1
5
作者 王东升 于瑞明 +5 位作者 张莉萍 白英杰 刘霞 王永录 杜晓华 刘新生 《生物工程学报》 北大核心 2025年第7期2760-2773,共14页
为了建立一种猪丁型冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)抗体检测方法,将PDCoV CH/XJYN/2016毒株N基因序列插入原核表达质粒载体pColdⅡ中,表达重组蛋白PDCoV-N1和PDCoV-N2,经SDS-PAGE分析和Ni+-NTA纯化后,检测重组原核蛋白PDCoV... 为了建立一种猪丁型冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)抗体检测方法,将PDCoV CH/XJYN/2016毒株N基因序列插入原核表达质粒载体pColdⅡ中,表达重组蛋白PDCoV-N1和PDCoV-N2,经SDS-PAGE分析和Ni+-NTA纯化后,检测重组原核蛋白PDCoV-N1和PDCoV-N2与猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)阳性血清的反应原性和特异性。同时对重组真核蛋白PDCoV-N1和PDCoV-N2进行Western blotting和间接免疫荧光实验验证分析。最后使用重组原核蛋白PDCoV-N2建立间接ELISA方法,优化反应条件,检测敏感性、特异性及重复性,并对102份临床血清进行了检测。重组原核蛋白PDCoV-N2与PEDV抗血清交叉反应较低。以PDCoV-N2蛋白制备的间接ELISA方法的最优条件为:抗原包被浓度1.25μg/mL,37℃包被1 h,BSA封闭液4℃过夜,血清最佳稀释浓度1:50,37℃孵育1 h,酶标二抗最佳稀释比例为1:80000,37℃孵育1 h,加入四甲基联苯胺(tetramethylbenzidine,TMB)显色液37℃反应10 min。待检样品的S/P值(样本值–阴性对照值)/(阳性对照值–阴性对照值)≥0.45为阳性,S/P值≤0.38为阴性,S/P值介于0.45和0.38之间,则为可疑。检测猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)、猪圆环病毒2型(porcine circovirus 2,PCV2)、猪传染性胃肠炎病毒(transmissiblegastroenteritis of swine,TGEV)、口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)、非洲猪瘟病毒(african swine fever virus,ASFV)阳性血清,结果显示,其他冠状病毒的S/P值均小于0.38,表明其具有良好的特异性;PDCoV抗血清800倍稀释后仍为阳性;批间和批内重复性实验结果显示,本方法变异系数均小于10%;临床血清样本检测结果显示,该方法与中和实验的符合率为94.12%。本研究基于截短的PDCoV N蛋白,建立了能够检测抗PDCoV特异性IgG抗体的ELISA方法,且该方法敏感、特异、稳定、重复性好,为PDCoV的临床诊断提供了新的方法。 展开更多
关键词 猪δ冠状病毒 截短N蛋白 IGG抗体 间接elisa
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禽白血病病毒抗体间接ELISA检测方法的建立与应用 被引量：1
6
作者 苏晓月 吕转平 +2 位作者 沈亚安 赵明明 唐思静 《家畜生态学报》 北大核心 2025年第1期64-69,共6页
为了建立一种禽白血病病毒(ALV)抗体检测方法,利用原核表达禽白血病病毒的p27蛋白建立一种检测ALV抗体的间接ELISA方法。结果显示,p27蛋白以包涵体形式表达,Western blot检测显示p27蛋白具有良好的反应活性,以p27蛋白为包被抗原建立的间... 为了建立一种禽白血病病毒(ALV)抗体检测方法,利用原核表达禽白血病病毒的p27蛋白建立一种检测ALV抗体的间接ELISA方法。结果显示,p27蛋白以包涵体形式表达,Western blot检测显示p27蛋白具有良好的反应活性,以p27蛋白为包被抗原建立的间接ELISA方法检测NDV、IBDV、IBV、AIV-H9、ILTV阳性血清均为阴性,最低抗体检出效价为1︰12800,与进口试剂盒的符合率为94.87%,检测临床血清样品的阳性率为14.02%。结果说明该研究建立的间接ELISA方法特异性强、敏感性高、符合性好,可为ALV的检测和净化等提供一种简单快速的方法。 展开更多
关键词 禽白血病病毒 间接elisa方法 抗体检测 净化
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鸡痘病毒ORF127蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立与应用
7
作者 华炯钢 朱寅初 +6 位作者 叶加林 张存 陈柳 倪征 付媛 霍苏馨 云涛 《浙江农业学报》 北大核心 2025年第10期2057-2065,共9页
为建立快速、准确的鸡痘病毒(fowlpox virus,FPV)抗体检测方法,将FPV ORF127基因的抗原表位区域克隆于pET-28a(+)原核表达载体,诱导表达并纯化获得FPV ORF127截短蛋白,以纯化的蛋白作为包被抗原,通过优化各反应条件,建立检测FPV抗体的间... 为建立快速、准确的鸡痘病毒(fowlpox virus,FPV)抗体检测方法,将FPV ORF127基因的抗原表位区域克隆于pET-28a(+)原核表达载体,诱导表达并纯化获得FPV ORF127截短蛋白,以纯化的蛋白作为包被抗原,通过优化各反应条件,建立检测FPV抗体的间接ELISA方法,经特异性、敏感性、重复性等试验和临床血清样本检测进行系统验证。结果显示,间接ELISA检测FPV抗体的最佳反应条件为:包被抗原质量浓度为10μg·mL^(-1),待检血清稀释度为1∶100,酶标二抗稀释度为1∶25000;特异性试验结果显示,除FPV阳性血清呈阳性反应外,与其他6种病毒(新城疫病毒、H9亚型禽流感病毒、鸡传染性法氏囊病毒、鸡传染性喉气管炎病毒、禽腺病毒4型、火鸡疱疹病毒)的阳性血清均无交叉反应;敏感性结果显示,FPV阳性血清稀释800倍后检测结果仍为阳性;批内、批间重复试验结果显示,批内变异系数为1.81%~7.07%,批间变异系数为2.12%~7.16%,均小于10%。临床血清样品检测结果显示,180份血清样本总阳性率为79.4%(143/180)。上述结果表明,本研究建立的间接ELISA方法特异性强、敏感性高、重复性和稳定性好,可为免疫鸡群FPV抗体水平监测和FPV流行病学调查提供技术支撑。 展开更多
关键词 鸡痘病毒 ORF127蛋白 间接elisa 抗体
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溶血性曼氏杆菌OmpA的原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立
8
作者 尚珂 高远集 +9 位作者 刘畅 代静蕾 丁梦豪 聂孟川 王怡轩 陈松彪 贾艳艳 郭荣显 丁轲 余祖华 《中国预防兽医学报》 北大核心 2025年第4期376-383,共8页
为建立一种快速、高效、准确的溶血性曼氏杆菌(MH)抗体的检测方法,本研究采用生物信息学软件对MH外膜蛋白A(OmpA)的理化性质和亲/疏水性、跨膜结构和信号肽进行分析后,利用PCR扩增MH OmpA基因,构建重组表达质粒pET-32a-OmpA,经生物公司... 为建立一种快速、高效、准确的溶血性曼氏杆菌(MH)抗体的检测方法,本研究采用生物信息学软件对MH外膜蛋白A(OmpA)的理化性质和亲/疏水性、跨膜结构和信号肽进行分析后,利用PCR扩增MH OmpA基因,构建重组表达质粒pET-32a-OmpA,经生物公司测序及酶切鉴定正确后转化大肠杆菌Rosetta感受态细胞,经IPTG诱导重组OmpA蛋白(r OmpA)的表达,SDS-PAGE检测结果显示,在约57 ku处出现目的条带,且rOmpA主要以为包涵体形式表达。rOmpA表达产物经镍柱亲和层析法纯化后利用western blot鉴定,结果显示,在57.03 ku处出现特异性条带,表明r OmpA可与MH阳性血清产生良好的反应原性。以rOmpA作为包被抗原,采用方阵法通过对各反应条件的优化,初步建立MH抗体的间接ELISA检测方法。利用该方法检测多杀性巴氏杆菌、大肠杆菌、鼠伤寒沙门菌、MH-1、MH CVCC4091(A5型)以及MH-2(A1型)阳性血清,结果显示,除MH-1、CVCC4091以及MH-2检测为阳性外,其他细菌阳性血清均为阴性结果,特异性较强。利用该间接ELISA方法检测2倍倍比稀释的待检阳性血清(1:8000~1:512000),结果显示,阳性血清稀释至1:512000时仍为阳性,敏感性较高。将同一批次和不同批次纯化的r OmpA包被ELISA板,按照该ELISA方法检测5份MH阳性血清,分析该方法的重复性。结果显示,批内和批间重复性试验的变异系数均小于10%,表明该方法重复性好。采用建立的间接ELISA方法和间接血凝试验(IHA),对82份临床动物(羊、兔、鼠)血清样品检测,结果显示,间接ELISA检测方法的阳性率为47.6%,阴性率为52.4%;IHA检测方法的阳性率为45.1%,阴性率为54.9%。二者的阳性符合率为94.9%,阴性符合率为95.6%,总符合率为99.3%。另外,从鼠体内检出MH阳性率最高为75.0%,表明本研究建立的间接ELISA方法可以用于临床样品的检测。该检测方法的建立为临床MH抗体的检测提供可靠的技术手段,为MH的流行病学调查等奠定了基础。 展开更多
关键词 溶血性曼氏杆菌5型 外膜蛋白A 原核表达 小鼠 间接elisa
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鸭短喙矮小综合征病毒抗体间接ELISA检测方法的建立与初步应用
9
作者 朱小丽 王劭 +5 位作者 董慧 程晓霞 江丹丹 肖世峰 陈少莺 陈仕龙 《福建农业学报》 北大核心 2025年第7期649-655,共7页
【目的】建立一种快速检测鸭短喙矮小综合征病毒(Short beak and dwarfism syndrome virus,SBDSV)抗体的血清学方法。【方法】以蔗糖密度梯度离心纯化的SBDSV流行株M15,以此灭活全病毒作为固相包被抗原,通过系统性优化反应参数,构建一... 【目的】建立一种快速检测鸭短喙矮小综合征病毒(Short beak and dwarfism syndrome virus,SBDSV)抗体的血清学方法。【方法】以蔗糖密度梯度离心纯化的SBDSV流行株M15,以此灭活全病毒作为固相包被抗原,通过系统性优化反应参数,构建一种高特异性的间接ELISA检测方法,用于鸭短喙矮小综合征病毒(SBDSV)血清抗体的定性分析。【结果】建立的间接ELISA检测方法的最佳反应条件为:抗原包被浓度0.1 mg·mL^(−1),37℃孵育2 h后再4℃过夜包被;1%BSA 37℃封闭2 h;血清样本1∶200稀释;阴阳性临界值为0.3214。该检测方法特异性好,与其他常见水禽病毒阳性血清均无交叉反应;敏感性高,阳性高免血清(LPAI效价2^(8))1∶204800倍稀释时检测结果仍为阳性;批内、批间重复性好,变异系数均小于6%;利用所建立的ELISA方法对70份SBDSV疑似感染病鸭的血清样品进行检测,检测结果与LPAI检测结果符合率为90%。对福建省648份临床送检1日龄雏鸭血清样品进行检测,抗体阳性率约为48.30%,显示福建省养鸭场存在不同程度的SBDSV感染。【结论】本研究建立的SBDSV血清抗体间接ELISA检测方法,该方法特异性高,适合大规模血清学检测,可为监测SBDSV在我国的流行情况以及雏鸭母源抗体水平评价提供技术支撑。 展开更多
关键词 鸭短喙矮小综合征 间接elisa 抗体检测
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抗营养因子大豆凝集素夹心ELISA检测方法的建立
10
作者 胡骁飞 杨继飞 +3 位作者 邢云瑞 庞杏豪 孙亚宁 魏凤仙 《西北农业学报》 北大核心 2025年第1期133-139,共7页
为建立灵敏、特异的大豆凝集素(soybean agglutinin,SBA)酶联免疫吸附(enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)检测方法。试验以SBA鼠源单克隆抗体为捕获抗体,SBA兔源多克隆抗血清为检测抗体,羊抗兔酶标抗体为二抗,通过对抗体的工... 为建立灵敏、特异的大豆凝集素(soybean agglutinin,SBA)酶联免疫吸附(enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)检测方法。试验以SBA鼠源单克隆抗体为捕获抗体,SBA兔源多克隆抗血清为检测抗体,羊抗兔酶标抗体为二抗,通过对抗体的工作浓度及反应时间优化,建立SBA的双抗体夹心ELISA检测方法,并用建立的方法检测大豆、大豆粕、膨化大豆粕及酶解大豆粕中SBA含量。结果表明:建立SBA双抗夹心ELISA检测方法的检测范围为39.06~1250 ng/mL,检出限为3.00 ng/mL,样品添加回收率为77.96%~116.15%,变异系数为6.11%~18.34%,与大豆中胰蛋白酶抑制因子BBI、KTI,大豆球蛋白glycinin及大豆伴球蛋白-conglycinin等其他抗营养因子均无交叉反应。大豆中SBA含量显著高于大豆粕、膨化大豆粕及酶解大豆粕(P<0.05);大豆粕中SBA含量显著高于膨化大豆粕及酶解大豆粕(P<0.05);膨化大豆粕显著高于酶解大豆粕中SBA含量(P<0.05)。综上,本研究建立了灵敏度高、特异性好的SBA双抗夹心ELISA检测方法,该方法可用于饲料中大豆凝集素的监控检测。 展开更多
关键词 大豆凝集素 抗营养因子 多克隆抗体 单克隆抗体 夹心elisa
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新城疫病毒HN蛋白的截短表达及间接ELISA方法建立
11
作者 魏玲 王思怡 +4 位作者 熊荣园 梁洪 王怀禹 李彩虹 杨国淋 《家畜生态学报》 北大核心 2025年第3期91-95,共5页
为了建立一种快速的新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)抗体检测方法,试验采用原核表达技术表达HN蛋白,以HN蛋白为检测抗原建立酶联免疫吸附测定(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)方法。结果表明,获得了以包涵体形式表... 为了建立一种快速的新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)抗体检测方法,试验采用原核表达技术表达HN蛋白,以HN蛋白为检测抗原建立酶联免疫吸附测定(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)方法。结果表明,获得了以包涵体形式表达的重组蛋白,间接ELISA方法检测6种其它鸡病阳性血清均为阴性,其最低抗体检出效价为1∶10240,其与血凝抑制试验(Hemagglutination inhibition,HI)方法的阳性和阴性符合率分别为98.08%和92.31%,检测临床样品阳性率为91.48%。说明建立的间接ELISA方法可用于NDV免疫抗体检测和疫苗免疫效果评价。 展开更多
关键词 新城疫病毒 HN蛋白 截短表达 间接elisa 抗体检测
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葱潜隐病毒吉林分离物的鉴定及ELISA检测方法的建立
12
作者 张春雨 王晨 +3 位作者 刘建青 李小宇 宋景荣 王永志 《植物保护》 北大核心 2025年第6期239-244,共6页
葱潜隐病毒(shallot latent virus,SLV)是影响葱、蒜产量和品质的主要病毒之一,本研究从吉林省珠葱中分离并鉴定了3株SLV,分离物衣壳蛋白(coat protein,CP)的基因序列与已报道的SLV分离物的相似性为78.84%~83.24%;通过原核表达并纯化病... 葱潜隐病毒(shallot latent virus,SLV)是影响葱、蒜产量和品质的主要病毒之一,本研究从吉林省珠葱中分离并鉴定了3株SLV,分离物衣壳蛋白(coat protein,CP)的基因序列与已报道的SLV分离物的相似性为78.84%~83.24%;通过原核表达并纯化病毒CP蛋白,免疫小鼠,制备了多抗血清,效价达256000倍;以纯化的多抗血清为基础建立了SLV的间接ELISA检测方法,优化了反应条件:确定待测样品包被条件为4℃过夜,封闭条件为5%脱脂奶37℃60 min,检测抗体工作浓度125 ng/mL 37℃孵育1 h,酶标抗体工作浓度500 ng/mL 37℃孵育1 h。该方法能够特异性识别感染SLV的珠葱叶片,不识别其他常见珠葱病毒,与RT-PCR方法比较,符合率94%,具有良好的稳定性和准确性。 展开更多
关键词 葱潜隐病毒 珠葱 多克隆抗体 间接elisa
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鸡肉中利巴韦林间接竞争ELISA检测方法的建立
13
作者 胡骁飞 邢云瑞 +3 位作者 邢广旭 孙亚宁 王琳 张改平 《中国免疫学杂志》 北大核心 2025年第10期2495-2498,2504,共5页
目的:建立高灵敏度的鸡肉中利巴韦林间接竞争ELISA(icELISA)检测方法。方法:基于已获得的利巴韦林单克隆抗体,采用棋盘试验确定抗原抗体最佳工作浓度,从而建立icELISA方法,并对该方法的性能进行鉴定。结果:建立的icELISA方法线性范围为0... 目的:建立高灵敏度的鸡肉中利巴韦林间接竞争ELISA(icELISA)检测方法。方法:基于已获得的利巴韦林单克隆抗体,采用棋盘试验确定抗原抗体最佳工作浓度,从而建立icELISA方法,并对该方法的性能进行鉴定。结果:建立的icELISA方法线性范围为0.44~32.71 ng/ml,IC50为3.78 ng/ml,最低检测限(LOD)为0.20 ng/ml;除了与利巴韦林特异反应外,与其他抗病毒药物均无交叉反应;样品加标回收率为91.60%~100.76%,变异系数7.29%~10.63%。结论:本研究建立了灵敏度高、特异性强的利巴韦林icELISA检测方法,可用于检测鸡肉中利巴韦林残留。 展开更多
关键词 利巴韦林 抗病毒药物 鸡肉 检测 间接竞争elisa
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腮腺炎病毒滴度ELISA检测方法的建立及其初步验证
14
作者 刘丽 李娟 +3 位作者 刘悦越 赵荣荣 李长贵 权娅茹 《中国生物制品学杂志》 2025年第7期827-832,共6页
目的 建立检测腮腺炎病毒滴度的ELISA方法,并进行验证,以缩短检定时间,为紧急出检提供技术支撑。方法 用腮腺炎疫苗病毒滴定参考品感染Vero细胞,以小鼠腹水为一抗,HRP标记的羊抗鼠IgG为二抗,对Vero细胞接种浓度、病毒接种后离心时间、... 目的 建立检测腮腺炎病毒滴度的ELISA方法,并进行验证,以缩短检定时间,为紧急出检提供技术支撑。方法 用腮腺炎疫苗病毒滴定参考品感染Vero细胞,以小鼠腹水为一抗,HRP标记的羊抗鼠IgG为二抗,对Vero细胞接种浓度、病毒接种后离心时间、病毒感染时间、抗体浓度、封闭条件、固定方法及时间等条件进行优化,建立检测腮腺炎病毒滴度的ELISA方法,并进行特异性、准确性、精密性、线性验证,同时与微量细胞病变法检测结果进行比较。结果 建立的ELISA方法步骤为:将浓度3×10^(5)个/mL的Vero细胞悬液加至96孔细胞培养板培养24 h;加入待测样本和参考品,236×g离心2 h,再继续培养48 h;用4%多聚甲醛固定10 min后,加入PBS-0.5%TritonX-100处理30 min;用5%脱脂奶粉封闭后,加入一抗(1∶1 000稀释)和二抗(1∶2 000稀释);TMB显色,硫酸终止反应,检测A450值。建立的方法对腮腺炎病毒具有良好的特异性;检测不同浓度参考品病毒滴度的相对偏倚(relative bias,RB)均小于10%;不同工作日重复6次检测参考品病毒滴度的变异系数(CV)为3.9%;方法的线性斜率为0.920 6,相关系数(r)为0.993 9。两种方法检测参考品病毒滴度结果差异无统计学意义(t=2.049,P > 0.05)。结论 建立的检测腮腺炎病毒滴度的ELISA方法特异性强,准确性和精密性好,且与微量细胞病变法检测结果具有较好的一致性,可明显缩短检定时间。 展开更多
关键词 腮腺炎病毒 elisa 病毒滴度 紧急出检
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腐食酪螨双抗体夹心ELISA检测方法的建立及初步应用
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作者 李辉平 孙佳琪 +7 位作者 牛梦娜 袁连焰 徐平 林金盛 侯立娟 蒋宁 马林 曲绍轩 《湖北民族大学学报(自然科学版)》 2025年第4期470-475,503,共7页
为开发腐食酪螨(Tyrophagus putrescentiae)酶联免疫吸附(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测技术,以螨虫总蛋白免疫新西兰白兔,制备多克隆抗体;同时以螨虫变应原Tyr p10蛋白免疫BALB/c小鼠,制备了单克隆抗体。以多抗为包被... 为开发腐食酪螨(Tyrophagus putrescentiae)酶联免疫吸附(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测技术,以螨虫总蛋白免疫新西兰白兔,制备多克隆抗体;同时以螨虫变应原Tyr p10蛋白免疫BALB/c小鼠,制备了单克隆抗体。以多抗为包被抗体,单抗为酶标抗体,建立双抗体夹心法ELISA检测技术,并对其在糙皮侧耳培养料及菌丝中的检测灵敏度和可靠性进行了验证。结果显示,兔源螨虫多抗纯度达到85%以上,质量浓度为1.70 mg/mL,效价在870.4×10^(3)倍左右;从38株杂交瘤细胞株筛选到1株细胞株(AntiTput-10),抗体纯化达到90%以上,质量浓度为3.1 mg/mL,亲和常数为2.71×10^(10)。经棋盘滴定法确定包被抗体质量浓度为100μg/mL、酶标抗体稀释度为1∶2000。所建立的ELISA检测方法可从食用菌培养料中检测出腐食酪螨4头/g,具有较高的灵敏度。该方法能应用于不同场景的螨虫检测。 展开更多
关键词 腐食酪螨 elisa 多克隆抗体 单克隆抗体 Tyr p10蛋白
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鸡传染性喉气管炎病毒抗原双抗夹心ELISA方法的建立
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作者 谢晶 于吉锋 +12 位作者 肖璐 吴学婧 叶勇刚 魏勇 李兴玉 曹冶 潘梦 毛从剑 杨竣雁 叶健强 曾子轩 康玮笠 康润敏 《中国动物检疫》 2025年第6期99-105,127,共8页
为建立鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)抗原的检测方法,利用ILTV gJ蛋白的2株单克隆抗体,1株用作捕获抗体,另1株经辣根过氧化物酶(HRP)标记后用作检测抗体,采用棋盘法优化反应条件,建立了一种检测ILTV抗原的双抗夹心ELISA方法,并对其进行了... 为建立鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)抗原的检测方法,利用ILTV gJ蛋白的2株单克隆抗体,1株用作捕获抗体,另1株经辣根过氧化物酶(HRP)标记后用作检测抗体,采用棋盘法优化反应条件,建立了一种检测ILTV抗原的双抗夹心ELISA方法,并对其进行了性能评估。结果显示:捕获抗体的最佳包被质量浓度为2μg/m L,酶标单克隆抗体的最适稀释度为1:4 000;临界值为0.295 6,当待测样品OD_(450 nm)值大于0.295 6且P/N值大于2时,判为阳性;建立的双抗夹心ELISA方法可特异性检测ILTV抗原,而对其他禽类常见抗原的检测结果均为阴性;最低检测限为49.4 ELD_(50)/0.1 mL,批内和批间变异系数均小于10%。48份临床样品的检测结果显示,该方法与行业标准中PCR方法的符合率为93.75%。结果表明,本研究建立的ILTV双抗夹心ELISA方法特异性强、灵敏度高、重复性好,可用于ILTV抗原检测。该方法的建立为该病的检测、监测以及防控提供了技术支撑。 展开更多
关键词 鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV) 单克隆抗体 双抗夹心elisa
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非洲猪瘟病毒抗体阻断ELISA法测量不确定度评估
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作者 柴娟 张璐 +10 位作者 董建斐 周丰超 王雅婷 孙仁杰 陈文静 黄晓兵 冯肖肖 黄靖 郑方宇 谢荣辉 张传亮 《中国动物检疫》 2025年第5期120-124,共5页
为了评估阻断ELISA方法检测结果的可靠性,使用阻断ELISA方法检测非洲猪瘟病毒(ASFV)抗体,并分别使用“影响因素分析”法和“对照样品”法对试验进行测量不确定度评估。“影响因素分析”法和“对照样品”法评估的扩展不确定度(U)分别为0.... 为了评估阻断ELISA方法检测结果的可靠性,使用阻断ELISA方法检测非洲猪瘟病毒(ASFV)抗体,并分别使用“影响因素分析”法和“对照样品”法对试验进行测量不确定度评估。“影响因素分析”法和“对照样品”法评估的扩展不确定度(U)分别为0.053 0和0.044 2 (k=2),表明在控制好移液器、培养箱和酶标仪等仪器引入的不确定度基础上,ELISA方法检测ASFV抗体的整体不确定度相对较低。两种方法评估的不确定度值差异不显著,使用“影响因素分析”法可以通过分析各分量在测量结果中的相对贡献,得到影响结果的关键因素,并进行改进;使用“对照样品”法可减少大量计算过程,操作更简单。ASFV抗体ELISA试验判定引入不确定度,可以提高结果的准确性,有利于进一步完善兽医检测领域不确定度评估体系。 展开更多
关键词 elisa 非洲猪瘟病毒抗体 测量不确定度 “影响因素分析”法 “对照样品”法
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一种快速精准检测各种乳品中牛乳铁蛋白含量的广适性ELISA方法
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作者 张婧 朱孔迪 +3 位作者 刘传铭 刘长振 王鹏杰 黄家强 《中国乳业》 2025年第3期91-99,共9页
[目的]验证夹心法ELISA技术是否可成为包括风味发酵乳在内的各种乳制品中牛乳铁蛋白含量的精准检测方法。[方法]利用优化的夹心法ELISA检测试剂分别检测牛乳铁蛋白(LTF)标准品溶液、巴氏杀菌乳样本、加标巴氏杀菌乳样本、12种北京地区... [目的]验证夹心法ELISA技术是否可成为包括风味发酵乳在内的各种乳制品中牛乳铁蛋白含量的精准检测方法。[方法]利用优化的夹心法ELISA检测试剂分别检测牛乳铁蛋白(LTF)标准品溶液、巴氏杀菌乳样本、加标巴氏杀菌乳样本、12种北京地区市场常见的风味发酵乳、7种加标风味发酵乳、7种混合巴氏杀菌乳的风味发酵乳中牛乳铁蛋白含量,计算加标回收率及CV值。用该检测试剂检测3种加标风味发酵乳中牛乳铁蛋白对72℃热处理的敏感度;并与牛乳铁蛋白国标检测(高效液相色谱法)方法对比检测生乳和巴氏灭菌乳。[结果]该检测试剂可检测牛乳铁蛋白(LTF)标准品溶液和巴氏杀菌乳样本中牛乳铁蛋白,且加标回收率91.7%~106.4%。经检测,12种风味发酵乳中牛乳铁蛋白含量为无;7种加标风味发酵乳的加标回收率86.3%~109.1%,且检测CV值远低于12%;7种风味发酵乳与巴氏杀菌乳混合乳中牛乳铁蛋白含量与对照组比值在92.3%~110.5%,且大多数检测CV值远低于12%;3种加标风味发酵乳中牛乳铁蛋白含量随72℃加热时间延长而降低,且下降曲线相似。与国家标准方法对比分析,夹心法ELISA方法检测生乳和巴氏杀菌乳乳铁蛋白含量的符合率分别为97.54%、111.2%,说明该检测方法的准确性达到国标标准。[结论]夹心法ELISA检测试剂可精准检测风味发酵乳中牛乳铁蛋白含量。 展开更多
关键词 牛乳铁蛋白 风味发酵乳 夹心法elisa
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牛传染性鼻气管炎病毒gD蛋白表达及间接ELISA抗体检测方法的建立与应用
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作者 刘兵 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第5期68-75,共8页
为了建立一种牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)抗体检测方法,本研究对IBRV gD蛋白进行原核表达,以表达蛋白为包被抗原建立检测IBRV抗体的间接ELISA方法。结果显示:gD基因PCR扩增产物约945 bp,构建原核表达载体pET30a-gD,经IPTG诱导表达,Weste... 为了建立一种牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)抗体检测方法,本研究对IBRV gD蛋白进行原核表达,以表达蛋白为包被抗原建立检测IBRV抗体的间接ELISA方法。结果显示:gD基因PCR扩增产物约945 bp,构建原核表达载体pET30a-gD,经IPTG诱导表达,Western blot检测显示重组蛋白具有良好的反应活性,以纯化蛋白为包被抗原建立的间接ELISA方法检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛肠道病毒(BEV)、牛副流感病毒3型(BPIV-3)、牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)阳性血清均为阴性,检测IBRV阳性血清的最低抗体检出效价为1∶12800,与病毒中和试验方法的符合率为96.15%,批内与批间重复性试验的变异系数分别小于5%和8%,检测825份免疫疫苗牛血清样品和514份未免疫疫苗牛血清样品的阳性率分别为90.67%和7.39%。本研究建立的间接ELISA检测方法具有良好的特异性、敏感性、准确性、重复性,为IBRV的临床诊断、流行病学调查、免疫抗体监测、疫苗免疫效果评价等提供了一种简单快速的血清学检测方法。 展开更多
关键词 牛传染性鼻气管炎病毒 gD蛋白 原核表达 间接elisa
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施马伦贝格病毒N蛋白原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立
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作者 李阳 孙睿雪 +3 位作者 陈天杰 刘思彤 曹家慧 赵建军 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第8期3877-3887,共11页
[目的]建立一种具有良好特异性和敏感性的施马伦贝格病毒(Schmallenberg virus,SBV)抗体间接ELISA(indirect ELISA,iELISA)检测方法。[方法]将SBV N蛋白编码基因全长序列克隆至pET-28a(+)质粒中,构建重组质粒pET-28a-SBV,利用大肠杆菌... [目的]建立一种具有良好特异性和敏感性的施马伦贝格病毒(Schmallenberg virus,SBV)抗体间接ELISA(indirect ELISA,iELISA)检测方法。[方法]将SBV N蛋白编码基因全长序列克隆至pET-28a(+)质粒中,构建重组质粒pET-28a-SBV,利用大肠杆菌表达系统表达目的蛋白并用His镍柱进行纯化,经SDS-PAGE和Western blotting鉴定后,以纯化的SBV N蛋白作为检测抗原进行包被,建立一种iELISA方法,并对其包被条件、封闭液、封闭时间和血清孵育时间等反应条件进行优化,检测其阴阳性临界值、特异性、灵敏性和重复性。[结果]SDS-PAGE结果显示,SBV N蛋白分子质量为30 ku;Western blotting结果显示,纯化后SBV N蛋白与SBV阳性血清能产生特异性反应。本研究建立的SBV iELISA检测方法最佳条件为:SBV N抗原包被浓度4μg/mL、4℃包被12 h、1%明胶37℃封闭1 h、血清稀释度为1:200、37℃孵育1 h、1:6 000稀释的酶标二抗37℃孵育1 h,其阴阳性临界值为0.371。该iELISA检测方法仅与SBV阳性血清产生特异性反应,与牛副流感病毒3型(BPIV3)、牛轮状病毒(BRV)、牛冠状病毒(BCoV)、牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)和阿卡斑病毒(AKAV)阳性血清均无明显交叉反应,灵敏性较高,SBV阳性血清稀释度为1:1280时仍有明显反应。批间重复试验和批内重复试验变异系数均<10%;与商品化试剂盒相比,其总符合率为94.57%。[结论]本研究建立了一种以SBV N蛋白为检测抗原的SBV iELISA方法,该方法具有良好的特异性和敏感性,能运用于SBV血清学检测,试验结果为SBV的快速诊断提供更多选择。 展开更多
关键词 施马伦贝格病毒(SBV) N蛋白 间接elisa(ielisa) 原核表达
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