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类鼻疽伯克霍尔德菌Ⅲ型分泌系统蛋白BsaL的制备和免疫反应性分析
1
作者 方瑶 胡艺 +4 位作者 朱攀 任春艳 马腾飞 王昆 毛旭虎 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期585-588,共4页
目的构建表达重组的类鼻疽伯克霍尔德菌Ⅲ型分泌系统结构蛋白Bsa L的大肠工程菌,制备高纯度、高质量的重组Bsa L蛋白样品,探讨其作为类鼻疽菌检测的候选抗原的可行性。方法基因工程技术构建表达重组Bsa L蛋白的大肠工程菌,通过亲和层析... 目的构建表达重组的类鼻疽伯克霍尔德菌Ⅲ型分泌系统结构蛋白Bsa L的大肠工程菌,制备高纯度、高质量的重组Bsa L蛋白样品,探讨其作为类鼻疽菌检测的候选抗原的可行性。方法基因工程技术构建表达重组Bsa L蛋白的大肠工程菌,通过亲和层析、凝胶过滤层析等纯化方法得到高纯度的Bsa L蛋白。包被Bsa L蛋白于96孔板,分析其用于检测临床类鼻疽菌株的敏感性和特异性。结果成功构建了表达重组Bsa L蛋白的大肠工程菌,诱导、表达及纯化后得到高纯度(>99%)、高浓度(20 mg/m L)的重组Bsa L蛋白。该蛋白在类鼻疽菌检测方面表现出较好的灵敏度(85%)和特异性(89%)。结论成功表达了重组的Bsa L蛋白,获得了高纯度的Bsa L蛋白样品,在类鼻疽菌的诊断方面展示出较好的应用价值。 展开更多
关键词 类鼻疽伯克霍尔德菌 Ⅲ型分泌系统(TTSS) BsaL ELISA
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基于调控DNA序列变化的MphR(A)蛋白类ELISA系统性能提升研究
2
作者 程永友 陈海江 +2 位作者 费强 杨曙明 刘晓夏 《食品安全质量检测学报》 CAS 北大核心 2021年第24期9445-9451,共7页
目的考察DNA序列对利用MphR(A)蛋白和启动子mph(A)序列的结合-解离特性构建的大环内酯类抗生素的体外类酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测系统性能的影响。方法通过MphR(A)蛋白与3段野生型DNA序列及其他... 目的考察DNA序列对利用MphR(A)蛋白和启动子mph(A)序列的结合-解离特性构建的大环内酯类抗生素的体外类酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测系统性能的影响。方法通过MphR(A)蛋白与3段野生型DNA序列及其他突变序列构建类ELISA检测系统,先通过添加和不添加红霉素作用,获得各DNA所得的最大和最小OD_(450),以最大与最小OD_(450)值相差较大、最小OD_(450)值接近0作为表现较好的标准,再对表现较好的系统计算红霉素反应的半数抑制浓度(median inhibitory concentration,IC_(50))值。结果MphR(A)蛋白可以和不同DNA序列结合,从而获得不同的检测性能。采用突变序列AC4-DNA建立的类ELISA系统IC_(50)值为(2.33±0.70)ng/mL,低于野生型DNA所得的IC_(50)[(3.95±1.18)ng/mL],系统灵敏度提升。结论通过DNA调控该类ELISA系统是一种可行的手段。此外,在野生型A-DNA、B-DNA、C-DNA均发现一段22 bp伪回文结构,该伪回文结构符合Tet蛋白家族的DNA序列特征,认为是该伪回文结构是与蛋白结合的核心序列。 展开更多
关键词 大环内酯类抗生素 类ELISA系统 MphR(A)蛋白
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