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禽白血病病毒抗体间接ELISA检测方法的建立与应用 被引量：1
1
作者 苏晓月 吕转平 +2 位作者 沈亚安 赵明明 唐思静 《家畜生态学报》 北大核心 2025年第1期64-69,共6页
为了建立一种禽白血病病毒(ALV)抗体检测方法,利用原核表达禽白血病病毒的p27蛋白建立一种检测ALV抗体的间接ELISA方法。结果显示,p27蛋白以包涵体形式表达,Western blot检测显示p27蛋白具有良好的反应活性,以p27蛋白为包被抗原建立的间... 为了建立一种禽白血病病毒(ALV)抗体检测方法,利用原核表达禽白血病病毒的p27蛋白建立一种检测ALV抗体的间接ELISA方法。结果显示,p27蛋白以包涵体形式表达,Western blot检测显示p27蛋白具有良好的反应活性,以p27蛋白为包被抗原建立的间接ELISA方法检测NDV、IBDV、IBV、AIV-H9、ILTV阳性血清均为阴性,最低抗体检出效价为1︰12800,与进口试剂盒的符合率为94.87%,检测临床血清样品的阳性率为14.02%。结果说明该研究建立的间接ELISA方法特异性强、敏感性高、符合性好,可为ALV的检测和净化等提供一种简单快速的方法。 展开更多
关键词 禽白血病病毒 间接elisa方法 抗体检测 净化
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新城疫病毒HN蛋白的截短表达及间接ELISA方法建立
2
作者 魏玲 王思怡 +4 位作者 熊荣园 梁洪 王怀禹 李彩虹 杨国淋 《家畜生态学报》 北大核心 2025年第3期91-95,共5页
为了建立一种快速的新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)抗体检测方法,试验采用原核表达技术表达HN蛋白,以HN蛋白为检测抗原建立酶联免疫吸附测定(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)方法。结果表明,获得了以包涵体形式表... 为了建立一种快速的新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)抗体检测方法,试验采用原核表达技术表达HN蛋白,以HN蛋白为检测抗原建立酶联免疫吸附测定(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)方法。结果表明,获得了以包涵体形式表达的重组蛋白,间接ELISA方法检测6种其它鸡病阳性血清均为阴性,其最低抗体检出效价为1∶10240,其与血凝抑制试验(Hemagglutination inhibition,HI)方法的阳性和阴性符合率分别为98.08%和92.31%,检测临床样品阳性率为91.48%。说明建立的间接ELISA方法可用于NDV免疫抗体检测和疫苗免疫效果评价。 展开更多
关键词 新城疫病毒 HN蛋白 截短表达 间接elisa 抗体检测
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布鲁氏菌双抗夹心ELISA检测方法的建立与初步验证
3
作者 姚梦欣 彭泽宇 +5 位作者 任文浩 徐艺玫 郭伟 陈创夫 马忠臣 王勇 《中国人兽共患病学报》 北大核心 2025年第3期255-262,共8页
目的 建立灵敏、特异的布鲁氏菌双抗体夹心ELISA检测方法。方法 筛选用于布鲁氏菌检测的单克隆捕获抗体和检测抗体,优化并确定最佳抗体包被时间和浓度,最佳封闭液、封闭时间和阴阳性临界值;通过检验其他易与布鲁氏菌发生交叉反应的细菌... 目的 建立灵敏、特异的布鲁氏菌双抗体夹心ELISA检测方法。方法 筛选用于布鲁氏菌检测的单克隆捕获抗体和检测抗体,优化并确定最佳抗体包被时间和浓度,最佳封闭液、封闭时间和阴阳性临界值;通过检验其他易与布鲁氏菌发生交叉反应的细菌来验证该方法的特异性;通过对灭活布鲁氏菌梯度稀释液的检测,验证该方法的灵敏性;将该夹心ELISA检测结果与试管凝集和qPCR检测结果进行比较。结果 筛选出的捕获抗体为4A12,检测抗体为6C12。试验分析显示,捕获抗体4A12的最佳包被浓度为5μg/mL,检测抗体6C12的最佳稀释比为1∶2 000。该研究的最佳包被条件为4℃过夜、5%脱脂奶粉封闭、封闭时间2 h。该研究建立的双抗体夹心ELISA方法只与布鲁氏菌发生反应,与其他细菌未发生反应;布鲁氏菌灭活菌液浓度稀释到1×10^(5) CFU/mL时仍能检测出。批内、批间变异系数均小于10%。结论 该研究成功建立了布鲁氏菌双抗夹心ELISA检测方法,该方法具有良好的特异性与灵敏性,为布鲁氏菌病的精确诊断和有效防控提供有效途径。 展开更多
关键词 单克隆抗体 布鲁氏菌 双抗夹心elisa法 诊断
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鸭疫里默氏杆菌间接ELISA检测方法的建立与应用
4
作者 王梦迪 钟宁远 +4 位作者 冷楠楠 蒋蔚 余祖功 阿曼古丽·斯拉依 韩先干 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第12期1626-1634,共9页
为建立一种快速准确检测鸭疫里默氏杆菌(RA)抗体且便于基层推广应用的间接ELISA方法,通过方阵滴定法优化ELISA抗原包被条件、抗原稀释浓度、血清稀释浓度以及二抗孵育时间、二抗稀释度等,综合评估该检测方法的敏感性、特异性等。结果显... 为建立一种快速准确检测鸭疫里默氏杆菌(RA)抗体且便于基层推广应用的间接ELISA方法,通过方阵滴定法优化ELISA抗原包被条件、抗原稀释浓度、血清稀释浓度以及二抗孵育时间、二抗稀释度等,综合评估该检测方法的敏感性、特异性等。结果显示,建立的间接ELISA检测方法抗原最佳包被浓度为10^(9)CFU/mL、抗原的最佳包被条件为37℃包被2h,一抗的血清最佳稀释度为1:1600,封闭液以50g/L脱脂乳为最佳,最佳封闭条件为37℃1h,一抗最佳孵育条件为37℃2h,酶标二抗最佳反应条件为37℃2h、酶标二抗的最佳稀释度为1:5000,最佳显色时间为20min。以RA-CQ3(血清1型)为靶标抗原包被时,待检阳性血清稀释度达到1:12800时和以RA-NJ2(血清2型)为靶标抗原包被时,待检阳性血清稀释度达到1:25600时仍可用临界值判定,表明该方法具有良好的敏感性。特异性试验结果显示,RA抗原不与O1型禽致病性大肠杆菌、鸭病毒性肠炎病毒、呼肠孤病毒DRV-TH11、呼肠孤病毒DRV-Gu8、4型禽腺病毒、鸭甲肝病毒3型阳性血清发生反应,表明建立的ELISA方法特异性较好。结果表明,成功建立了一种快速、敏感的检测鸭疫里默氏杆菌抗体的方法,可为鸭疫里默氏杆菌病的流行病学调查和临床RA抗体检测提供技术支持。 展开更多
关键词 鸭疫里默氏杆菌 间接elisa 优化 方法建立
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非洲猪瘟病毒抗体阻断ELISA法测量不确定度评估
5
作者 柴娟 张璐 +10 位作者 董建斐 周丰超 王雅婷 孙仁杰 陈文静 黄晓兵 冯肖肖 黄靖 郑方宇 谢荣辉 张传亮 《中国动物检疫》 2025年第5期120-124,共5页
为了评估阻断ELISA方法检测结果的可靠性,使用阻断ELISA方法检测非洲猪瘟病毒(ASFV)抗体,并分别使用“影响因素分析”法和“对照样品”法对试验进行测量不确定度评估。“影响因素分析”法和“对照样品”法评估的扩展不确定度(U)分别为0.... 为了评估阻断ELISA方法检测结果的可靠性,使用阻断ELISA方法检测非洲猪瘟病毒(ASFV)抗体,并分别使用“影响因素分析”法和“对照样品”法对试验进行测量不确定度评估。“影响因素分析”法和“对照样品”法评估的扩展不确定度(U)分别为0.053 0和0.044 2 (k=2),表明在控制好移液器、培养箱和酶标仪等仪器引入的不确定度基础上,ELISA方法检测ASFV抗体的整体不确定度相对较低。两种方法评估的不确定度值差异不显著,使用“影响因素分析”法可以通过分析各分量在测量结果中的相对贡献,得到影响结果的关键因素,并进行改进;使用“对照样品”法可减少大量计算过程,操作更简单。ASFV抗体ELISA试验判定引入不确定度,可以提高结果的准确性,有利于进一步完善兽医检测领域不确定度评估体系。 展开更多
关键词 elisa 非洲猪瘟病毒抗体 测量不确定度 “影响因素分析”法 “对照样品”法
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基于IgY的ELISA法检测淋病奈瑟氏菌的效果及抗体敏感度影响分析
6
作者 肖昕 张曼珂 +3 位作者 夏乐欢 罗艳 李勤 李红姣 《中国卫生标准管理》 2025年第8期172-176,共5页
目的 探讨高效价、高纯度、生物活性好的抗淋病奈瑟氏菌的特异性鸡卵黄免疫球蛋白(immunoglobulin of yolk,IgY)应用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测淋病奈瑟氏菌的效果。方法 采用超声破碎、研磨破碎、... 目的 探讨高效价、高纯度、生物活性好的抗淋病奈瑟氏菌的特异性鸡卵黄免疫球蛋白(immunoglobulin of yolk,IgY)应用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测淋病奈瑟氏菌的效果。方法 采用超声破碎、研磨破碎、共振裂解等方法裂解淋病奈瑟氏菌,筛选出最佳裂解抗原,然后将经甲醛灭活的全菌抗原或裂解抗原与佐剂充分乳化免疫产蛋母鸡;采用酶联免疫吸附试验检测水稀释后的IgY抗体效价变化;通过硫酸铵盐析,超滤法纯化抗体,并用十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝电泳法和二喹啉甲酸法测定抗体纯度和浓度,ELISA法评价IgY检测效果。结果 超声破碎法裂解的淋病奈瑟氏菌抗原浓度最高且蛋白条带最为完整;0.5 mL的1×10^(9) CFU/mL灭活菌初次免疫4周后再次免疫的方案产生的抗体效价最高,可达1∶25 600。硫酸铵沉淀超滤纯化后的抗体纯度可达94%,浓度为27.02 mg/mL;建立的间接ELISA法制检测淋病奈瑟氏菌具有较高的特异性和敏感度。结论 基于IgY的ELISA法检测淋病奈瑟氏菌效果显著,可以提高制备抗体的敏感度。 展开更多
关键词 淋病奈瑟氏菌 鸡卵黄抗体 免疫球蛋白 间接elisa法 效能 价值
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IBDV单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA检测方法的建立
7
作者 姜艳平 刘薇 +6 位作者 宫浩阳 蔡李萌 李佳璇 崔文 周晗 韩建春 唐丽杰 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第7期3433-3441,共9页
旨在建立一种快速有效的检测鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)的方法,本研究以IBDV全病毒作为免疫原制备单克隆抗体,以获得的单抗6G3作为捕获抗体,单抗4C12作为检测抗体,建立检测IBDV的双抗体夹心ELISA方法。结果表明,该ELISA方法具有良好的... 旨在建立一种快速有效的检测鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)的方法,本研究以IBDV全病毒作为免疫原制备单克隆抗体,以获得的单抗6G3作为捕获抗体,单抗4C12作为检测抗体,建立检测IBDV的双抗体夹心ELISA方法。结果表明,该ELISA方法具有良好的特异性,与REV、AEV、ALV和EDSV均无交叉反应;能检测病毒的最小量为1.585×10^(3) ELD50;批间和批内重复性试验显示,该方法具有良好的重复性;通过该方法对49份临床样品进行检测,与商品化的IBDV抗原检测卡进行比较,符合率达94.18%。综上,本研究建立的双抗体夹心ELISA方法,具有良好的特异性、敏感性和重复性,可用于IBDV的快速检测,为制备商品化的IBDV检测试剂盒奠定基础。 展开更多
关键词 传染性法氏囊病毒 单克隆抗体 检测方法 双抗体夹心elisa
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SARS-CoV-2重组蛋白疫苗(CHO细胞)体外相对效力双抗体夹心ELISA检测方法建立与验证
8
作者 曹莎莎 何鹏 +6 位作者 刘晓雅 刘莹 刘宇 马志桃 韦芬 王佳霁 胡忠玉 《药物分析杂志》 北大核心 2025年第3期452-459,共8页
目的:建立严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2型(SARS-CoV-2)重组蛋白疫苗(CHO细胞)体外相对效力的双抗体夹心ELISA检测方法,并进行验证。方法:采用基因重组技术制备抗SARS-Co V-2刺突蛋白受体结合区(receptor binding domain,RBD)的人源... 目的:建立严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2型(SARS-CoV-2)重组蛋白疫苗(CHO细胞)体外相对效力的双抗体夹心ELISA检测方法,并进行验证。方法:采用基因重组技术制备抗SARS-Co V-2刺突蛋白受体结合区(receptor binding domain,RBD)的人源单克隆抗体GH4及CB6。以GH4为包被抗体,HRP标记的CB6(CB6-HRP)为检测抗体,建立双抗体夹心ELISA法,考察GH4和CB6-HRP的适宜工作浓度。开展方法学验证,验证项目为线性与范围、专属性、精密度(重复性、中间精密度)、准确度和耐用性。采用建立的方法检测3批工艺验证批及22批持续工艺确认批SARS-Co V-2重组蛋白疫苗(CHO细胞)的体外相对效力。结果:GH4及CB6-HRP的适宜工作浓度分别为1000 ng·m L^(-1)和31.25 ng·m L^(-1)。疫苗参考品质量浓度在0.3125~5ng·m L^(-1)范围内与A450呈良好的对数线性关系,回归方程斜率均在0.80~1.25范围内,R2均>0.99;建立的方法可特异性检测SARS-Co V-2重组蛋白疫苗(CHO细胞),与MERS重组蛋白疫苗、流感病毒疫苗、狂犬病毒疫苗及CHO宿主细胞蛋白等均无交叉反应;精密度验证时,重复性的几何变异系数(geometric coefficient of variation,GCV)分布在1.6%~2.4%范围内,中间精密度的GCV在1.2%~2.6%范围内;准确度验证时,回归方程R2为0.9945,斜率为0.9995在0.80~1.25范围内,相对偏倚(relative bias,RB)分布在-4.04%~7.36%范围内;耐用性验证中,不同考察条件下体外相对效力测定值在0.96~1.08范围内。3批工艺验证批SARS-Co V-2重组蛋白疫苗(CHO细胞)体外相对效力均值为1.02,GCV为4.8%;22批持续工艺确认批SARS-Co V-2重组蛋白疫苗(CHO细胞)体外相对效力在0.81~1.23范围内,几何均值为1.04,GCV为4.4%。结论:建立的双抗体夹心ELISA检测方法具有良好的特异性、精密度、准确度及耐受性,可用于SARS-CoV-2重组蛋白疫苗(CHO细胞)体外相对效力检测及质量控制。 展开更多
关键词 严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2型 重组蛋白疫苗 酶联免疫吸附法 双抗体夹心法 体外相对效力
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人缝隙连接蛋白43不同结合位点单克隆抗体的筛选及双抗体夹心ELISA检测方法的建立及验证
9
作者 张小刚 张秀华 +5 位作者 於怀龙 刘英梅 郭新艳 安杨 李兆明 刘飞 《中国生物制品学杂志》 2025年第9期1094-1100,共7页
目的 筛选针对人缝隙连接蛋白43(connexin 43,Cx43)不同结合位点的单克隆抗体,并建立Cx43蛋白的双抗体夹心ELISA定量检测方法,以期应用于全长及截短Cx43蛋白结构、功能及其亚细胞定位的深入研究。方法 采用生物信息学方法分析人Cx43蛋... 目的 筛选针对人缝隙连接蛋白43(connexin 43,Cx43)不同结合位点的单克隆抗体,并建立Cx43蛋白的双抗体夹心ELISA定量检测方法,以期应用于全长及截短Cx43蛋白结构、功能及其亚细胞定位的深入研究。方法 采用生物信息学方法分析人Cx43蛋白序列,设计并合成针对不同结构域的多肽片段,偶联血蓝蛋白(keyhole limpet hemocyanin,KLH)作为免疫原免疫15只雌性BALB/c小鼠。通过细胞融合技术制备杂交瘤细胞,筛选能够稳定分泌抗Cx43蛋白单克隆抗体的细胞株。采用Protein G亲和层析纯化抗体,并鉴定其亚型、亲和力及特异性。以2株高亲和力单克隆抗体分别作为捕获抗体和检测抗体(用HRP标记),建立双抗体夹心ELISA检测方法,并优化方法的封闭液(5%牛奶-PBS、3%BSA-PBS)、清洗液[0.01 mol/L PBS(pH 7.2)、0.01 mol/L PBS-0.5%Tween 20(pH 7.2)(即PBST)]、样品稀释液[3%BSA-PBS及0.01 mol/L PBS(pH 7.2)],验证方法的线性范围及灵敏度、专属性、精密度、准确度。采用建立的方法检测小鼠脑组织、肠组织、股骨组织、MC3T3-E1小鼠胚胎成骨细胞裂解液中的Cx43蛋白含量。结果 共筛选获得3株稳定分泌抗Cx43单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为1-1E2、2-1G11和3-2G12,抗体亚型分别为IgG1、IgG1和IgG2b,抗体灵敏度均达0.002μg/mL,其中2-1G11和3-2G12高亲和力更高。以2-1G11为捕获抗体、HRP标记的3-2G12为检测抗体,建立了双抗体夹心ELISA法。最佳封闭液为3%BSA-PBS,清洗液为PBST,样品稀释液为0.01 mol/L PBS(pH 7.2)。Cx43蛋白标准品浓度在3.12~200 ng/mL范围内,与A450均值呈良好的线性关系,R^(2)> 0.98;该方法可特异性检出Cx43蛋白,与KLH蛋白、重组人骨形态发生蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)及重组人谷氨酰胺转氨酶2(transglutaminase 2,TGM2)均无交叉反应;精密度验证CV为7.72%;高、中、低3个浓度供试品的回收率均在85%~115%范围内。MC3T3-E1小鼠胚胎成骨细胞中Cx43蛋白含量较高(58.03 ng/mL),小鼠成骨组织中Cx43蛋白含量较低(38.4 ng/mL)。结论 成功制备了针对人Cx43不同结合位点的特异性单克隆抗体,并建立了灵敏度高、特异性强的双抗体夹心ELISA定量检测方法,为Cx43蛋白的结构与功能研究提供了可靠的检测方法。 展开更多
关键词 缝隙连接蛋白43 多肽免疫 单克隆抗体 双抗体夹心elisa法
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猪瘟病毒间接ELISA抗体检测方法的建立
10
作者 颜士琦 李复坤 +5 位作者 齐冬梅 赖月辉 黄福强 冯钰鑫 周晓敏 樊全宝 《广东畜牧兽医科技》 2025年第5期66-72,120,共8页
猪瘟(Classical swine fever,CSF)是由猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)引起的猪的一种高度传染性和致死性的病毒性疾病,疫苗接种是预防CSF的有效手段,抗体水平是评价免疫猪群免疫效果的重要指标。该研究通过原核表达系统成... 猪瘟(Classical swine fever,CSF)是由猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)引起的猪的一种高度传染性和致死性的病毒性疾病,疫苗接种是预防CSF的有效手段,抗体水平是评价免疫猪群免疫效果的重要指标。该研究通过原核表达系统成功表达了CSFV重组蛋白E2Y,将纯化的E2Y蛋白作为包被抗原,优化条件并建立了CSFV间接ELISA抗体检测方法。试验结果表明,蛋白包被浓度为0.25μg/mL,与常见猪病毒的阳性血清无交叉反应,具有良好的特异性、灵敏性、可重复性,与商品化试剂盒一致性为91.67%。该研究成功建立了CSFV间接ELISA抗体检测方法,为进一步优化和研制CSFV抗体检测试剂盒提供了技术参考。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 抗体检测 间接elisa方法
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大黄鱼病原菌──溶藻弧菌的ELISA快速检测研究 被引量：23
11
作者 鄢庆枇 王军 +2 位作者 苏永全 皮灵宝 刘成荣 《海洋科学》 CAS CSCD 北大核心 2001年第9期47-49,共3页
以灭活溶藻弧菌（０．０５％甲醛，３０℃，８ｈ）制成菌苗，注射免疫实验兔获得抗血清。该 抗血清经吸附后与副溶血弧菌、河流弧菌等１０株对照菌株无交叉反应。用该抗血清进行溶藻 弧菌ＥＬＩＳＡ检测，其最低检测极限为９７０００ｃ... 以灭活溶藻弧菌（０．０５％甲醛，３０℃，８ｈ）制成菌苗，注射免疫实验兔获得抗血清。该 抗血清经吸附后与副溶血弧菌、河流弧菌等１０株对照菌株无交叉反应。用该抗血清进行溶藻 弧菌ＥＬＩＳＡ检测，其最低检测极限为９７０００ｃｆｕ／ｍｌ。将该方法应用于养殖现场，检测结果为：海 水中溶藻弧菌浓度均低于最低检测限、外观健康大黄鱼肝脏中溶藻弧菌的阳性检出率为 ２０％、患病大黄鱼的阳性检出率为８０％，表明ＥＬＩＳＡ法不仅可以用于诊断大黄鱼的溶藻弧菌 病，也可以检测无病症带菌大黄鱼。 展开更多
关键词 大黄鱼 溶藻弧菌 elisa检测 病原菌
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新霉素ELISA检测方法的建立 被引量：9
12
作者 刘沙洲 桑小雪 +2 位作者 欧阳华学 雷绍荣 白林含 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第14期227-231,共5页
目的:比较直接和间接竞争酶联免疫法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)的优缺点,建立新霉素残留ELISA检测方法。方法:利用自制的新霉素多克隆抗体,采用直接竞争和间接竞争ELISA方法检测新霉素残留,并比较两种方法的优缺点。结... 目的:比较直接和间接竞争酶联免疫法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)的优缺点,建立新霉素残留ELISA检测方法。方法:利用自制的新霉素多克隆抗体,采用直接竞争和间接竞争ELISA方法检测新霉素残留,并比较两种方法的优缺点。结果:新霉素抗血清和庆大霉素的交叉反应率为2.04%,和卡那霉素的交叉反应率为0.02%,和氨苄青霉素、红霉素、四环素的交叉反应率均小于0.01%。初步测试新霉素间接竞争ELISA法的准确性和回收率。板内误差小于4%,板间误差小于11%,回收率为135.5%～191.3%。直接竞争和间接竞争ELISA方法的检测极限分别为28.58ng/mL和51.74ng/mL,达到了国家对新霉素规定的500μg/kg MRL检测限。结论:建立了直接竞争和间接ELISA吸附检测方法,条件优化更成功的间接竞争ELISA可用于开发新霉素检测试剂盒。 展开更多
关键词 新霉素 多克隆抗体 竞争酶联免疫法(enzyme linked IMMUNOSORBENT assay elisa) 方法建立
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基于山羊痘病毒P32蛋白ELISA检测方法的建立 被引量：8
13
作者 吴锦艳 田宏 +3 位作者 陈妍 尚佑军 宋江伟 刘湘涛 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期1906-1911,共6页
P32蛋白是羊痘病毒株中特异性很强的免疫原性结构蛋白,本研究利用原核表达系统对山羊痘病毒P32基因进行表达,并应用该蛋白建立了检测山羊痘病毒血清抗体检测方法。将P32基因克隆至pGEX-6P-1表达载体,经抗性筛选,测序鉴定获得重组阳性克... P32蛋白是羊痘病毒株中特异性很强的免疫原性结构蛋白,本研究利用原核表达系统对山羊痘病毒P32基因进行表达,并应用该蛋白建立了检测山羊痘病毒血清抗体检测方法。将P32基因克隆至pGEX-6P-1表达载体,经抗性筛选,测序鉴定获得重组阳性克隆,成功构建了羊痘病毒重组pGEX-P32表达载体。经IPTG诱导表达,可稳定、高效地表达P32融合蛋白。融合蛋白纯化后SDS-PAGE结果表明,以终浓度为1mmol/L的IPTG进行诱导,8h后表达量最高,表达蛋白为融合蛋白,相对分子质量约56 000,表达产量约占菌体总蛋白的28%。Western-blotting检测表明,表达的融合蛋白能与羊痘阳性血清发生特异性反应,说明表达获得的产物具有良好的反应原性。用表达的融合蛋白建立了检测羊痘血清抗体的ELISA方法,经方阵滴定,确定抗原最佳包被质量浓度为每孔0.4mg/L,最佳血清稀释度为1∶20。符合率试验表明ELISA方法和琼脂扩散试验的阳性符合率为83.44%,并且所建立的方法具有很好的特异性、重复性和敏感性,这为应用该融合蛋白制备山羊痘病毒免疫血清学诊断试剂和疫苗研究奠定了基础。 展开更多
关键词 山羊痘病毒 P32基因 表达 间接elisa方法
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番茄斑萎病毒外壳蛋白原核表达及Dot-blotELISA检测方法的建立 被引量：9
14
作者 于翠 邓凤林 +1 位作者 杨翠云 吴建祥 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期597-601,共5页
将番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt virus,TSWV)全长外壳蛋白基因亚克隆到原核表达载体pET-32a中,经限制性酶切分析及测序结果表明插入方向正确且阅读框架无移码突变.将重组表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),SDS-PAGE分析结果证实IPTG... 将番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt virus,TSWV)全长外壳蛋白基因亚克隆到原核表达载体pET-32a中,经限制性酶切分析及测序结果表明插入方向正确且阅读框架无移码突变.将重组表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),SDS-PAGE分析结果证实IPTG可诱导1个分子量约为48 kDa的融合蛋白表达.利用6×His标签单抗和TSWV FoPaTs1多抗证实所表达的蛋白为TSWV外壳蛋白.以纯化的重组外壳蛋白免疫小鼠,制备杂交瘤细胞培养上清单抗,并用杂交瘤细胞培养液上清建立了可靠、有效检测TSWV的Dot-blot ELISA方法. 展开更多
关键词 番茄斑萎病毒 原核表达 Dot—blot EL/SA方法
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ELISA及电化学法检测藠头中氨基甲酸酯类农药残留 被引量：9
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作者 胡芹芹 李娜 +4 位作者 张华 李凤 杜丹 刘德立 熊丽 《农药》 CAS 北大核心 2009年第5期352-354,359,共4页
建立了克百威ELISA检测技术,配合电化学法对200份出口藠头样品进行氨基甲酸酯类农药残留检测。ELISA法对克百威的最低检测限达10-7g/L,检出10例,检出率5﹪;电化学法检测,对乙酰胆碱酯酶抑制率超过60%的样品有7例,检出率3.5%。对比分析... 建立了克百威ELISA检测技术,配合电化学法对200份出口藠头样品进行氨基甲酸酯类农药残留检测。ELISA法对克百威的最低检测限达10-7g/L,检出10例,检出率5﹪;电化学法检测,对乙酰胆碱酯酶抑制率超过60%的样品有7例,检出率3.5%。对比分析检测结果得出2种方法检测结果基本吻合。 展开更多
关键词 氨基甲酸酯类农药残留 藠头 电化学法 高效液相色谱法 酶联免疫吸附分析法
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间接竞争ELISA检测大豆11S球蛋白和7S伴球蛋白 被引量：9
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作者 彭楠 刘建峰 +1 位作者 梁运祥 葛向阳 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期661-664,共4页
采用酸沉淀、亲和层析(ConA-Sepharose 4B)等手段,成功地分离纯化了大豆11S球蛋白和7S伴球蛋白,SDS-PAGE检测表明2种蛋白纯度分别达到95%和90%。将纯化的11S球蛋白和7S伴球蛋白分别免疫大白兔获得抗血清,并建立起间接竞争ELISA检测大豆... 采用酸沉淀、亲和层析(ConA-Sepharose 4B)等手段,成功地分离纯化了大豆11S球蛋白和7S伴球蛋白,SDS-PAGE检测表明2种蛋白纯度分别达到95%和90%。将纯化的11S球蛋白和7S伴球蛋白分别免疫大白兔获得抗血清,并建立起间接竞争ELISA检测大豆豆粕及其深加工产品中11S和7S抗原蛋白含量的方法。 展开更多
关键词 11S球蛋白 7S伴球蛋白 亲和层析 间接竞争elisa法
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ELISA法在检测小儿肺炎支原体感染中的应用 被引量：9
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作者 金春明 刘广勤 张华艳 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第14期3191-3192,共2页
目的探讨ELISA法在检测小儿肺炎支原体感染中的应用。方法选取2010年6月-2011年9月126例小儿肺炎支原体感染患儿进行研究,将患儿分为ELISA检测组和荧光定量PCR法检测组,各63例,统计各组患者检测的阳性率及肺炎患病类型。结果 ELISA检测... 目的探讨ELISA法在检测小儿肺炎支原体感染中的应用。方法选取2010年6月-2011年9月126例小儿肺炎支原体感染患儿进行研究,将患儿分为ELISA检测组和荧光定量PCR法检测组,各63例,统计各组患者检测的阳性率及肺炎患病类型。结果 ELISA检测组有15例阳性,阳性率为23.81%,支气管哮喘2例占13.33%,支气管肺炎6例占40.00%,急性支气管炎4例占26.67%,上呼吸道感染2例占13.33%,其他1例占6.67%;荧光定量PCR法检测组有26例阳性,阳性率为41.26%,支气管哮喘4例占15.38%,支气管肺炎11例占42.31%,急性支气管炎6例占23.08%,上呼吸道感染3例占11.57%,其他2例占7.69%。结论使用ELISA法在检测小儿肺炎支原体感染中的效果好,建议在检测小儿肺炎支原体感染中广泛使用。 展开更多
关键词 elisa法 检测 小儿肺炎支原体感染 应用
原文传递
9例核酸反应性标本与对应ELISA、CLIA法检测HBV的关联分析 被引量：21
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作者 张毓 孙国栋 +1 位作者 张丽 王学刚 《临床输血与检验》 CAS 2018年第2期206-208,共3页
目的为保障临床输血的安全性,比较已知酶联免疫吸附试验(ELISA)、ALT阴性合并核酸检测(NAT)反应性标本与对应化学发光(CLIA)法检测HBV的结果,对三种检测方法进行相关性分析。方法对17508例无偿献血者(排除ELISA法初复检公共阳性、ALT阳... 目的为保障临床输血的安全性,比较已知酶联免疫吸附试验(ELISA)、ALT阴性合并核酸检测(NAT)反应性标本与对应化学发光(CLIA)法检测HBV的结果,对三种检测方法进行相关性分析。方法对17508例无偿献血者(排除ELISA法初复检公共阳性、ALT阳性等)进行NAT,并对NAT反应性标本进行CLIA检测。结果经核酸检测出9例HBV DNA反应性标本,未检出HCV RNA和HIV RNA反应性标本,其中1例为ELISA法"阴性高值"标本;对应CLIA法HBV"两对半"检测出现2例HBsAg(-)抗-HBs(-)抗-HBc(+)及5例HBs Ag(-)抗-HBs(+)抗-HBc(+)血清型,可能为OBI,2例均无反应性,可能为窗口期标本。结论无偿献血者的现有血液筛查方法 NAT检测和ELI SA法具有互补性,NAT检测可弥补ELISA法检测的"窗口期"问题;NAT与CLIA法检测结果具有一致性;OBI可能是本地区NAT检测HBV DNA献血者的主要类型;对可能影响血液质量的ELISA法"阴性高值"标本的淘汰,会降低输血感染风险。 展开更多
关键词 核酸检测 elisa法 CLIA法 HBV
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鱼肠道弧菌间接ELISA快速检测法的建立 被引量：7
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作者 吴晓春 邓灯 +2 位作者 程顺峰 刘慧 姜令绪 《水产科学》 CAS 北大核心 2013年第5期284-288,共5页
为准确、快速诊断鱼肠道弧菌感染所致的海水鱼类全身性败血症,以鱼肠道弧菌为抗原,制备抗鱼肠道弧菌多克隆抗体,建立了鱼肠道弧菌间接酶联免疫吸附检测方法。该方法最佳反应条件为:抗原包被密度为107 cfu/mL,免疫血清稀释度为1∶211。... 为准确、快速诊断鱼肠道弧菌感染所致的海水鱼类全身性败血症,以鱼肠道弧菌为抗原,制备抗鱼肠道弧菌多克隆抗体,建立了鱼肠道弧菌间接酶联免疫吸附检测方法。该方法最佳反应条件为:抗原包被密度为107 cfu/mL,免疫血清稀释度为1∶211。病原菌检测灵敏度为每孔105 cfu/mL。抗血清与迟缓爱德华氏菌、杀鲑气单胞菌、恶臭假单胞菌、鱼肠道弧菌、副溶血弧菌、鳗弧菌、溶藻胶弧菌、秦皇岛弧菌8种水产致病菌的交叉反应结果呈阴性。用该法检测人工感染后的牙鲆和健康牙鲆,在发病鱼的肝脏、肾脏、脾脏、腹水等处检测出病原菌而健康鱼则为阴性。该技术能够准确、快速检测出鱼肠道弧菌。 展开更多
关键词 鱼肠道弧菌 间接elisa技术 检测方法
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胸腺素α1间接ELISA测定方法的建立及其在转基因蓝藻中的应用 被引量：2
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作者 朱笃 陈天圣 +3 位作者 李元广 叶勤 章军 周克夫 《海洋科学》 CAS CSCD 北大核心 2002年第12期1-4,共4页
利用胸腺素α1(Tα1)_小牛血清白蛋白融合蛋白免疫新西兰兔获得的抗体 ,建立了Tα1间接酶联免疫吸附测定法 (ELISA) ,以定量检测转Tα1基因聚球藻7942外源基因表达产物胸腺素α1 ,实验结果表明该方法灵敏度高、专一性强、重复性好 ,可... 利用胸腺素α1(Tα1)_小牛血清白蛋白融合蛋白免疫新西兰兔获得的抗体 ,建立了Tα1间接酶联免疫吸附测定法 (ELISA) ,以定量检测转Tα1基因聚球藻7942外源基因表达产物胸腺素α1 ,实验结果表明该方法灵敏度高、专一性强、重复性好 ,可用于转基因微藻Tα1表达量的定量检测 ,同时表明Tα1基因能在聚球藻7942中稳定表达。 展开更多
关键词 胸腺素Α1 间接elisa 测定方法 转基因蓝藻 应用 酶联免疫测定法 聚球藻7942
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