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皖临白山羊ELF5基因克隆、表达分析及功能鉴定
1
作者 余雅杰 郭玉柱 +4 位作者 马存霞 土彤彤 刘洪瑜 张运海 宋宁 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 北大核心 2025年第5期772-783,共12页
为阐明E74样ETS转录因子5(E74 like ETS transcription factor 5, ELF5)在山羊乳腺中的基因序列、结构、表达情况以及ELF5基因对β-酪蛋白(beta-casein, CSN2)表达的影响,本研究以皖临白山羊乳腺上皮细胞为试验模型,通过聚合酶链反应克... 为阐明E74样ETS转录因子5(E74 like ETS transcription factor 5, ELF5)在山羊乳腺中的基因序列、结构、表达情况以及ELF5基因对β-酪蛋白(beta-casein, CSN2)表达的影响,本研究以皖临白山羊乳腺上皮细胞为试验模型,通过聚合酶链反应克隆ELF5基因编码区序列,检测ELF5基因在山羊乳腺泌乳初期、盛期、中期、后期以及干奶期的表达模式,同时利用在线软件进行生物信息学分析,对过表达与抑制ELF5基因后酪蛋白相关基因表达进行检测。结果显示,本研究克隆得到山羊ELF5基因完整编码区,长768 bp,编码255个氨基酸;ELF5蛋白分子量为30 089.83 Da,理论等电点为5.61,存在31个磷酸化位点,无信号肽和跨膜螺旋结构,为携带负电荷的不稳定蛋白。ELF5与催乳素受体(prolactin receptor, PRLR)、雌激素相关受体β(estrogen related receptor beta, ESRRB)、β-酪蛋白、叉头盒蛋白A1(forkhead box A1, FOXA1)等蛋白质存在互作;山羊ELF5基因与绵羊、牛的亲缘关系最近;ELF5和CSN2基因在山羊泌乳初期、盛期和中期的表达水平较高。在山羊乳腺上皮细胞模型中,过表达ELF5可使β-酪蛋白的表达水平升高,干扰ELF5的结果则与之相反,表明ELF5基因能促进山羊乳腺细胞中β-酪蛋白的合成。本研究为开展ELF5基因在山羊泌乳过程中β-酪蛋白合成的调控机制研究提供了前期理论依据。 展开更多
关键词 皖临白山羊 elf5 基因克隆 生物信息学分析 Β-酪蛋白
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转染ELF5mRNA对子宫内膜癌细胞凋亡及周期的影响 被引量：2
2
作者 戚挺 踪佳鹏 闫洪超 《河北医学》 CAS 2017年第6期889-894,共6页
目的:检测人子宫内膜癌Ishikawa细胞转染pc DNA3.1-ELF5+EGFP后ELF5基因的表达,并观察其对Ishikawa细胞凋亡情况及周期变化的影响。方法:通过脂质体介导的方法将pc DNA3.1-ELF5+EGFP真核细胞表达载体体外转染至子宫内膜癌Ishikawa细胞,... 目的:检测人子宫内膜癌Ishikawa细胞转染pc DNA3.1-ELF5+EGFP后ELF5基因的表达,并观察其对Ishikawa细胞凋亡情况及周期变化的影响。方法:通过脂质体介导的方法将pc DNA3.1-ELF5+EGFP真核细胞表达载体体外转染至子宫内膜癌Ishikawa细胞,设立实验组(转染pc DNA3.1-ELF5+EGFP真核载体)、空质粒组(转染pc DNA3.1-EGFP空载体)、空白对照组(未经转染的Ishikawa细胞)。体外实验:用qRT-PCR法检测子宫内膜癌Ishikawa细胞中ELF5mRNA的表达情况,MTT法检测ELF5mRNA对Ishikawa细胞增殖的影响,流式细胞仪检测三组细胞周期及凋亡情况,Western blot法检测三组肿瘤组织的细胞周期调控蛋白P21及凋亡调控因子Caspase-3表达情况的变化。体内实验:将三组细胞分别接种于NOD/SCID雌性裸鼠,观察肿瘤生长情况及测定成瘤能力,应用TUNEL法检测三组肿瘤组织细胞凋亡的情况,采用蛋白印迹法检测三组肿瘤组织的细胞周期调控蛋白P21及凋亡调控因子Caspase-3表达情况的变化。结果:重组质粒pc DNA3.1-ELF5+EGFP成功转染至子宫内膜癌Ishikawa细胞;重组质粒组细胞ELF5mRNA的表达明显高于空质粒组及空白对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);重组质粒组各时间点的细胞增殖能力较较其他两组明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05);重组质粒组G_0/G_1期的细胞比例均高于空质粒组及空白对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);重组质粒组细胞凋亡率分别与空质粒组及空白对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);重组质粒组细胞中P21及Caspase-3的表达明显高于空质粒组及空白对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。重组质粒组裸鼠体内的成瘤能力(瘤组织最大直径、重量)明显低于空质粒组及空白对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);重组质粒组裸鼠体内瘤组织细胞凋亡率分别与空质粒组及空白对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);(9)重组质粒组裸鼠体内瘤组织P21及Caspase-3的表达明显高于空质粒组及空白对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:ELF5基因可抑制子宫内膜癌Ishikawa细胞的增殖,将细胞周期阻滞于G_0/G_1期,并诱导其凋亡,其机制可能与P21及Caspase-3有关。 展开更多
关键词 elf5基因 卵巢癌细胞 转染 细胞周期 P21 CASPASE-3 细胞凋亡
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谷子eIF5A基因家族鉴定与分析 被引量：2
3
作者 张杰伟 秦新月 +4 位作者 陈亚娟 刘婧 崔进荣 姚磊 魏建华 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2018年第7期1333-1337,共5页
【目的】本文系统分析了谷子e IF5A基因家族在谷子中如何发挥作用。【方法】利用谷子基因组数据库,运用生物信息学方法,鉴定谷子e IF5A基因家族的基因结构、染色体定位、编码蛋白和磷酸化位点预测,通过序列比对进行进化和分类分析。【... 【目的】本文系统分析了谷子e IF5A基因家族在谷子中如何发挥作用。【方法】利用谷子基因组数据库,运用生物信息学方法,鉴定谷子e IF5A基因家族的基因结构、染色体定位、编码蛋白和磷酸化位点预测,通过序列比对进行进化和分类分析。【结果】谷子含有4个e IF5A基因,均含有4个内显子,分布于谷子的3条染色体上。MEME保守基序分析显示,谷子e IF5A蛋白均含有1个保守的DNA结合寡核苷酸结合结构域(PF01287)。磷酸化位点预测分析表明谷子e IF5A蛋白均含有大量潜在磷酸化位点。【结论】以上结果将为今后揭示谷子e IF5A蛋白功能提供重要的线索。 展开更多
关键词 谷子 EIF5A 基因家族 进化分析
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