目的研究新的大肠癌相关性抗原EID3基因的克隆及其诊断价值。方法用SEREX技术筛选睾丸组织cDNA噬菌体表达文库,发现了一类似于肿瘤抑制基因(E1A基因)的EID3基因(NM_001008394.1),构建原核表达载体pET32k-EID3,IPTG诱导重组EID3蛋白质的...目的研究新的大肠癌相关性抗原EID3基因的克隆及其诊断价值。方法用SEREX技术筛选睾丸组织cDNA噬菌体表达文库,发现了一类似于肿瘤抑制基因(E1A基因)的EID3基因(NM_001008394.1),构建原核表达载体pET32k-EID3,IPTG诱导重组EID3蛋白质的表达,并利用Ni NTA His Bind树脂纯化该重组蛋白质。用RT-PCR技术研究EID3mRNA在正常组织和大肠癌传代细胞的表达。结果经PCR扩增成功获得1002bp的人EID3基因,测序正确。在大肠杆菌中目的蛋白质的表达量占菌体总蛋白质的10%,SDS-PAGE及Western blot分析显示,其相对分子质量为39000KD,纯化后的6xHisEID3纯度可达92%。通过RT-PCR分析发现,EID3基因在43例大肠癌传代细胞株中有39例阳性,阳性率为90.7%。在正常组织中,除睾丸组织不表达或有极低水平转录外,余均不表达。结论 EID3基因克隆、表达及纯化的成功,为其今后的肿瘤诊断和肿瘤多肽疫苗治疗研究奠定了基础。EID3m RNA表达检测用于诊断大肠癌,可能具有高特异性和高敏感性的特点。EID3蛋白在大肠癌患者中能够诱导机体的抗体免疫应答,可能成为一个新的大肠癌相关性抗原分子,其用于诊断大肠癌的可行性,有待进一步深入研究。展开更多
文摘目的研究新的大肠癌相关性抗原EID3基因的克隆及其诊断价值。方法用SEREX技术筛选睾丸组织cDNA噬菌体表达文库,发现了一类似于肿瘤抑制基因(E1A基因)的EID3基因(NM_001008394.1),构建原核表达载体pET32k-EID3,IPTG诱导重组EID3蛋白质的表达,并利用Ni NTA His Bind树脂纯化该重组蛋白质。用RT-PCR技术研究EID3mRNA在正常组织和大肠癌传代细胞的表达。结果经PCR扩增成功获得1002bp的人EID3基因,测序正确。在大肠杆菌中目的蛋白质的表达量占菌体总蛋白质的10%,SDS-PAGE及Western blot分析显示,其相对分子质量为39000KD,纯化后的6xHisEID3纯度可达92%。通过RT-PCR分析发现,EID3基因在43例大肠癌传代细胞株中有39例阳性,阳性率为90.7%。在正常组织中,除睾丸组织不表达或有极低水平转录外,余均不表达。结论 EID3基因克隆、表达及纯化的成功,为其今后的肿瘤诊断和肿瘤多肽疫苗治疗研究奠定了基础。EID3m RNA表达检测用于诊断大肠癌,可能具有高特异性和高敏感性的特点。EID3蛋白在大肠癌患者中能够诱导机体的抗体免疫应答,可能成为一个新的大肠癌相关性抗原分子,其用于诊断大肠癌的可行性,有待进一步深入研究。
