EGL3(Enhancer of Glabra3)蛋白是一种bHLH类蛋白,是一类重要的转录调节因子。为阐释BrEGL3在‘津田’芜菁(Brassica campestris L.ssp.rapifera‘Tsuda’)花青素生物合成中的调控作用,根据拟南芥EGL3基因序列信息设计兼并引物,克隆获得...EGL3(Enhancer of Glabra3)蛋白是一种bHLH类蛋白,是一类重要的转录调节因子。为阐释BrEGL3在‘津田’芜菁(Brassica campestris L.ssp.rapifera‘Tsuda’)花青素生物合成中的调控作用,根据拟南芥EGL3基因序列信息设计兼并引物,克隆获得了'津田'芜菁EGL3基因的全长cDNA序列,命名为BrEGL3,其GenBank登录号为HM208589。序列分析结果显示,BrEGL3全长1794bp,包含编码597个氨基酸的开放阅读框,分子量约为66.8kD。氨基酸结构分析显示该蛋白含有DNA结合域,该结合属于螺旋-环-螺旋家族。氨基酸对比分析表明,BrEGL3与萝卜EGL3蛋白相似性最高,其次为拟南芥中的EGL3。荧光定量PCR检测BrEGL3在芜菁不同组织中的表达结果表明,该基因在有花青素合成的红色芜菁根皮中表达量最高。展开更多
文摘目的探讨Egl-9家族缺氧诱导因子1(Egl-9 family hypoxia inducible factor 1,EGLN1)缺失对结直肠癌(colorectal cancer,CRC)细胞增殖、迁移、侵袭及自噬通路的影响,为CRC精准治疗提供潜在靶点。方法利用CRISPR-Cas9技术构建EGLN1敲除的LoVo与RKO细胞株;通过CCK-8法、集落形成、Transwell实验及划痕愈合实验,分别检测细胞的增殖、侵袭及迁移能力。Western blot分析自噬标志物LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ值与p62蛋白表达水平,评估自噬通路激活情况。通过建立裸鼠皮下移植瘤模型,评估自噬激活剂雷帕霉素对EGLN1敲除异种移植瘤生长的影响。采用苏木精-伊红(hematoxylin and eosin,HE)染色和Ki-67免疫组化检测异种移植瘤组织细胞增殖情况。结果成功构建稳定的EGLN1敲除细胞系。EGLN1的缺失显著增强LoVo和RKO细胞增殖、迁移和侵袭(均P<0.05);自噬相关蛋白分析结果显示,EGLN1敲除后LC3B-Ⅱ/LC3B-Ⅰ值下降,p62显著积累。采用晚期自噬抑制剂氯喹或早期抑制剂3-甲基腺嘌呤处理进一步加剧自噬抑制。体内实验表明,EGLN1敲除组的肿瘤体积显著大于EGLN1野生型组(P<0.05),而雷帕霉素治疗有效抑制了肿瘤生长。HE染色和Ki-67免疫组化证实,EGLN1敲除促进异种移植瘤中的细胞增殖,而雷帕霉素可逆转该促瘤效应。结论EGLN1通过激活自噬通路抑制CRC细胞的恶性表型,其缺失可能导致自噬抑制,从而促进肿瘤细胞增殖、迁移与侵袭。靶向EGLN1/自噬轴可能是治疗CRC的有效策略。
文摘EGL3(Enhancer of Glabra3)蛋白是一种bHLH类蛋白,是一类重要的转录调节因子。为阐释BrEGL3在‘津田’芜菁(Brassica campestris L.ssp.rapifera‘Tsuda’)花青素生物合成中的调控作用,根据拟南芥EGL3基因序列信息设计兼并引物,克隆获得了'津田'芜菁EGL3基因的全长cDNA序列,命名为BrEGL3,其GenBank登录号为HM208589。序列分析结果显示,BrEGL3全长1794bp,包含编码597个氨基酸的开放阅读框,分子量约为66.8kD。氨基酸结构分析显示该蛋白含有DNA结合域,该结合属于螺旋-环-螺旋家族。氨基酸对比分析表明,BrEGL3与萝卜EGL3蛋白相似性最高,其次为拟南芥中的EGL3。荧光定量PCR检测BrEGL3在芜菁不同组织中的表达结果表明,该基因在有花青素合成的红色芜菁根皮中表达量最高。
