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梭梭EF-hand CaBP基因克隆及序列分析 被引量:3
1
作者 周晓燕 甘晓燕 +3 位作者 石磊 陈虞超 李苗 宋玉霞 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期47-52,57,共7页
采用RT-PCR、RACE等方法从超旱生、耐盐植物梭梭(Haloxylon ammodendron)中扩增出EF-handCaBP(EF-hand calcium-binding protein)基因的cDNA序列(GenBank登录号为JQ023165),其开放阅读框为732bp,推测的氨基酸序列全长为243个氨基酸残基... 采用RT-PCR、RACE等方法从超旱生、耐盐植物梭梭(Haloxylon ammodendron)中扩增出EF-handCaBP(EF-hand calcium-binding protein)基因的cDNA序列(GenBank登录号为JQ023165),其开放阅读框为732bp,推测的氨基酸序列全长为243个氨基酸残基。运用SMART、GOR4、TMPred等生物信息学软件对梭梭EF-hand CaBP功能域、跨膜结构进行分析显示,梭梭EF-hand CaBP含有26个氨基酸的信号肽序列及4个保守的钙结合位点(EF-hand),并且存在2种跨膜模型,推测梭梭EF-hand CaBP基因可能定位于液泡膜或叶绿体膜上。 展开更多
关键词 梭梭 钙结合蛋白 ef-hand手型 序列分析
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EF-hand对钙调磷酸酶B同源蛋白2的生物学功能影响 被引量:1
2
作者 张洪菊 李庆华 +3 位作者 王立洪 蔺亚妮 常国强 庞天翔 《中国医药导报》 CAS 2012年第35期28-31,共4页
目的探讨EF-hand结构对钙调磷酸酶B同源蛋白2(CHP2)的生物学功能的影响。方法通过PCR扩增CHP2 cDNA片段,构建带GFP标签的野生型及EF-hand突变型CHP2表达质粒;与钠氢离子交换蛋白1(NHE1)共转染PS120细胞;采用激光共聚焦显微镜、膜滤过法... 目的探讨EF-hand结构对钙调磷酸酶B同源蛋白2(CHP2)的生物学功能的影响。方法通过PCR扩增CHP2 cDNA片段,构建带GFP标签的野生型及EF-hand突变型CHP2表达质粒;与钠氢离子交换蛋白1(NHE1)共转染PS120细胞;采用激光共聚焦显微镜、膜滤过法、免疫共沉淀等手段,明确CHP2结合Ca2+的数量、部位,以及对CHP2与NHE1结合的影响;在血清饥饿条件下,观察表达EF-hand突变的CHP2(NHE1/CHP2-EF3m/4m)对细胞生存的影响。结果分别突变EF-hand结构EF3或EF4,CHP2结合Ca2+减少;同时突变EF3和EF4,CHP2不能结合Ca2+;免疫共沉淀实验结果显示乙二胺四乙酸(EDTA)剥夺CHP2携带的Ca2+之后,CHP2与NHE1结合的数量明显减少;不携带Ca2+的CHP2在细胞内与NHE1结合的数量也明显减少;在血清饥饿条件下,表达不携带Ca2+的CHP2的细胞存活数量减少。结论 CHP2能结合2个Ca2+,结合部位在EF3和EF4;携带Ca2+能增强CHP2与NHE1的结合能力;在血清饥饿条件下,携带Ca2+的CHP2能提升细胞抵抗死亡的能力。 展开更多
关键词 钙调磷酸酶B同源蛋白2 钠氢交换蛋白1 ef-hand CA2+
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EF-Hand蛋白研究进展 被引量:9
3
作者 吁亭 赵宇威 余绍宁 《生物物理学》 2013年第1期1-10,共10页
EF-hand蛋白作为钙离子结合蛋白家族中的特殊成员和钙离子一起参与了从细胞增殖到细胞凋亡各方面的功能调节,EF-hand蛋白调节信号的异常也被认为是人类多种疾病的诱因。按照功能分类,EF-hand蛋白可以分为具有调控功能的Ca2+信号蛋白和... EF-hand蛋白作为钙离子结合蛋白家族中的特殊成员和钙离子一起参与了从细胞增殖到细胞凋亡各方面的功能调节,EF-hand蛋白调节信号的异常也被认为是人类多种疾病的诱因。按照功能分类,EF-hand蛋白可以分为具有调控功能的Ca2+信号蛋白和只参与Ca2+转运、缓冲的Ca2+缓冲蛋白两大类。EF-hand蛋白功能的多样性与EF-hand结构的构象、组织形式、对钙离子的响应程度等密切相关。本文就EF-hand蛋白结构与功能的差异以及与疾病的关系进行简要综述。 展开更多
关键词 ef-hand蛋白 ef-hand结构域 钙离子
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三角帆蚌EF-hand基因的表达研究
4
作者 祁晓翔 李文娟 +3 位作者 施志仪 尚朝 周子睿 尚攀 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2015年第12期2078-2085,共8页
淡水贝类包含EF-hand结构域的蛋白质对Ca^(2+)代谢具有重要的调控作用,加强EF-hand蛋白的研究对培育大型优质珍珠具有十分重要的意义。通过三角帆蚌转录组筛选到7个EF-hand基因,并进行生物信息学分析;通过数字基因表达谱(DGE)分析了这7... 淡水贝类包含EF-hand结构域的蛋白质对Ca^(2+)代谢具有重要的调控作用,加强EF-hand蛋白的研究对培育大型优质珍珠具有十分重要的意义。通过三角帆蚌转录组筛选到7个EF-hand基因,并进行生物信息学分析;通过数字基因表达谱(DGE)分析了这7个基因在不同育珠时间两个育珠组织(外套膜和内脏团)中的表达趋势;通过Real-time Q-PCR技术对EF-hand基因进行了表达研究。结果表明,三角帆蚌7个EFhand基因都具有经典保守的EF-hand模块。进化树分析表明,EFCB1和EFCB6进化关系最近,EFCB7和N-EFCB1进化关系较近,EFCBD2和RASEFCB进化关系较近。DGE表达趋势分析表明三角帆蚌EF-hand基因在外套膜和内脏团组织不同育珠时期表达变化趋势差异较大,说明这7个基因在珍珠形成过程中的功能可能各不相同。荧光定量PCR结果表明,EF-hand基因在插核后不同时期的外套膜和内脏团育珠部位组织中表达与DGE表达趋势分析基本一致。EFCB1在外套膜插核后20 d表达水平最高(P<0.05),EFCB6和EFCB7在内脏团插核后20 d表达水平最高(P<0.05),表明这3个基因在珍珠质最初分泌形成过程中可能起着重要的作用,为进一步探索该类蛋白调控钙代谢及在珍珠形成过程中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 三角帆蚌 ef-hand基因 外套膜 内脏团 有核珍珠
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SikCDPK1基因EF-hand的定点突变、原核表达及蛋白纯化
5
作者 郭家秀 朱新霞 《分子植物育种》 CAS 北大核心 2023年第2期503-509,共7页
钙依赖性蛋白激酶(calcium dependent protein kinase,CDPK)通过与Ca^(2+)相互作用,在植物响应各种逆境胁迫的过程中发挥重要作用,其C端调控区的EF-hand基序是使CDPK的激活依赖于Ca^(2+)的关键结构。为进一步研究具有极强耐寒性的天山... 钙依赖性蛋白激酶(calcium dependent protein kinase,CDPK)通过与Ca^(2+)相互作用,在植物响应各种逆境胁迫的过程中发挥重要作用,其C端调控区的EF-hand基序是使CDPK的激活依赖于Ca^(2+)的关键结构。为进一步研究具有极强耐寒性的天山雪莲对逆境的响应机制,本研究采用PCR定点突变技术,将SikCDPK1基因EF-hand基序的第435、第471、第507和第540位氨基酸分别由E(谷氨酸)突变为Q(谷氨酰胺),构建定点突变原核表达载体,转化表达菌株E.coli BL21(DE3),使用IPTG诱导蛋白表达,利用亲和层析系统对重组蛋白进行纯化。结果显示,重组菌株能够成功表达出目的重组蛋白,重组蛋白可溶性表达量较高的诱导培养条件是18℃1 mmol/L IPTG诱导16 h,最后成功纯化出符合预期大小的可溶性蛋白,为进一步探究SikCDPK1中不同EF-hand基序的生物学功能提供了实验依据。 展开更多
关键词 SikCDPK1 ef-hand 定点突变 原核表达 蛋白纯化
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微小隐孢子虫含EF-hand结构域蛋白家族的生物信息学研究 被引量:1
6
作者 郭志云 杨光 +5 位作者 荆春霞 付芹芹 孙小会 王穗湘 李月琴 周天鸿 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期653-658,663,共7页
目的对微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum,Cp)含EF-hand结构域家族蛋白进行生物信息学研究,探讨该家族蛋白的EF-hand结构域与Ca2+信号的关系以预测该家族蛋白的功能,为隐孢子虫病的诊断和治疗提供新的方向。方法首先通过数据收集,获... 目的对微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum,Cp)含EF-hand结构域家族蛋白进行生物信息学研究,探讨该家族蛋白的EF-hand结构域与Ca2+信号的关系以预测该家族蛋白的功能,为隐孢子虫病的诊断和治疗提供新的方向。方法首先通过数据收集,获得EF-hand结构域家族蛋白的序列信息,接着对每个蛋白进行CDD结构域搜索和NCBI BLAST的比对分析,确证为EF-hand结构域家族蛋白,最后进行结构域分析和功能预测。结果搜索到了C.parvumIowa II中18个含有EF-hand结构域的蛋白,它们之间的氨基酸长度,分子量大小以及等电点等都有很大的区别,通过结构域分析把EF-hand家族分成了含一个EF-hand结构域、二个EF-hand结构域、同时含EF-hand和STKc-AGC两种结构域和同时含EF-hand和PKC两种结构域四大类。结论 EF-hand结构域蛋白家族与重要的钙离子信号作用有着密切的关系,而C.parvum对宿主细胞的侵袭能力与胞内的Ca2+水平密切相关,所以EF-hand蛋白家族很有可能成为隐孢子虫病治疗的一个新的突破点。 展开更多
关键词 微小隐孢子虫 EF—hand结构域 CA2+ 生物信息学分析 功能预测
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亮氨酸拉链EF-hand结构域跨膜蛋白1、钠氢交换蛋白1和腺苷酸环化酶相关蛋白2在胃癌组织中的表达及对术后复发的预测价值 被引量:3
7
作者 张健 沈莹 葛卫伟 《中国医师进修杂志》 2022年第1期60-66,共7页
目的探讨亮氨酸拉链EF-hand结构域跨膜蛋白1(LETM1)、钠氢交换蛋白1(NHE-1)和腺苷酸环化酶相关蛋白2(CAP2)在胃癌组织中表达及对术后复发的预测价值。方法回顾性分析海门市人民医院2017年1月至2020年1月92例行外科手术治疗的早期胃癌患... 目的探讨亮氨酸拉链EF-hand结构域跨膜蛋白1(LETM1)、钠氢交换蛋白1(NHE-1)和腺苷酸环化酶相关蛋白2(CAP2)在胃癌组织中表达及对术后复发的预测价值。方法回顾性分析海门市人民医院2017年1月至2020年1月92例行外科手术治疗的早期胃癌患者的临床资料。根据术后6个月复发情况分为复发组(16例)和未复发组(76例)。采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测手术切除标本的癌组织和癌旁正常组织LETM1、NHE-1和CAP2 mRNA表达水平。采用多因素Logistic回归分析影响胃癌患者术后复发的独立危险因素;绘制受试者工作特征(ROC)曲线,分析LETM1、NHE-1和CAP2 mRNA预测复发的效能。绘制Kaplan-Meier生存曲线,分析不同LETM1、NHE-1和CAP2 mRNA表达水平患者的生存率。结果癌组织LETM1、NHE-1和CAP2 mRNA均明显高于癌旁组织(0.41±0.12比0.22±0.07、0.85±0.27比0.49±0.15和0.31±0.10比0.19±0.06),差异有统计学意义(P<0.01)。复发组N1期比例明显高于未复发组[9/16比22.37%(17/76)],差异有统计学意义(P<0.05);复发组癌组织LETM1、NHE-1和CAP2 mRNA明显高于未复发组(0.61±0.20比0.37±0.13、1.24±0.38比0.77±0.21和0.60±0.19比0.25±0.10),差异有统计学意义(P<0.01)。多因素Logistic回归分析结果显示,控制N分期后,LETM1、NHE-1和CAP2 mRNA仍是影响胃癌患者术后复发的独立危险因素(OR=1.52、3.11和1.21,95%CI 1.26~1.82、2.36~4.09和1.04~1.41,P<0.01)。ROC曲线分析结果显示,LETM1、NHE-1和CAP2 mRNA预测胃癌患者术后复发的曲线下面积(AUC)分别为0.768、0.802和0.850,各指标联合预测胃癌患者术后复发的AUC为0.965。以ROC曲线分析获得的截断值为分界,将患者分为LETM1 mRNA高表达(>0.54,30例)与低表达(≤0.54,62例)、NHE-1 mRNA高表达(>1.09,35例)与低表达(≤1.09,57例)、CAP2 mRNA高表达(>0.49,28例)与低表达(≤0.49,64例)。Kaplan-Meier生存曲线分析结果显示,LETM1、NHE-1和CAP2 mRNA高表达患者生存率明显低于低表达患者(73.33%比98.39%、80.00%比96.49%和78.57%比95.31%),差异有统计学意义(χ^(2)=15.08、6.95和6.75,P<0.01)。结论LETM1、NHE-1和CAP2 mRNA与早期胃癌术后复发有关,检测三者表达有望为术后复发的预测提供一种新的策略。 展开更多
关键词 胃肿瘤 肿瘤复发 局部 亮氨酸拉链ef-hand结构域跨膜蛋白1 钠氢交换蛋白1 腺苷酸环化酶相关蛋白2
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预测和分析血吸虫含有EF-hand结构域的表膜蛋白的功能 被引量:5
8
作者 于复东 康斌 +1 位作者 李园园 李亦学 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第13期1529-1535,共7页
血吸虫病仍然是严重危害人类健康的重要寄生虫疾病之一.在血吸虫中发现一类特殊的表膜蛋白,它们含有EF-hand结构域,但是对它们功能的了解除了可以作为抗原之外几乎一无所知.蛋白-蛋白相互作用、位点特异性变异和糖基化位点修饰等insilic... 血吸虫病仍然是严重危害人类健康的重要寄生虫疾病之一.在血吸虫中发现一类特殊的表膜蛋白,它们含有EF-hand结构域,但是对它们功能的了解除了可以作为抗原之外几乎一无所知.蛋白-蛋白相互作用、位点特异性变异和糖基化位点修饰等insilico分析的结果表明,这类表膜蛋白不仅可以与具有免疫调节功能的宿主蛋白进行相互作用来帮助血吸虫主动调节宿主的免疫反应,还可以通过位点特异性变异、糖基化修饰自身那些可以被宿主免疫攻击所识别的位点,以帮助血吸虫被动调节宿主免疫攻击.此外,对表膜蛋白C端区域的分析表明,这些蛋白还可以协助血吸虫抑制宿主多核细胞的细胞趋化和宿主的IgG4免疫反应来调节和逃避宿主的免疫攻击.总之,分析结果暗示,这些表膜蛋白可以协助血吸虫在宿主-寄生虫相互作用过程中调节和逃避宿主的免疫攻击,起到自我保护的作用. 展开更多
关键词 血吸虫 宿主-寄生虫相互作用 表膜蛋白 ef-hand结构域 生物信息学分析
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Calciomics:prediction and analysis of EF-hand calcium binding proteins by protein engineering 被引量:1
9
作者 YANG Jenny Jie 《Science China Chemistry》 SCIE EI CAS 2010年第1期52-60,共9页
Ca2+ plays a pivotal role in the physiology and biochemistry of prokaryotic and mammalian organisms.Viruses also utilize the universal Ca2+ signal to create a specific cellular environment to achieve coexistence with ... Ca2+ plays a pivotal role in the physiology and biochemistry of prokaryotic and mammalian organisms.Viruses also utilize the universal Ca2+ signal to create a specific cellular environment to achieve coexistence with the host,and to propagate.In this paper we first describe our development of a grafting approach to understand site-specific Ca2+ binding properties of EF-hand proteins with a helix-loop-helix Ca2+ binding motif,then summarize our prediction and identification of EF-hand Ca2+ binding sites on a genome-wide scale in bacteria and virus,and next report the application of the grafting approach to probe the metal binding capability of predicted EF-hand motifs within the streptococcal hemoprotein receptor(Shr) of Streptococcus pyrogenes and the nonstructural protein 1(nsP1) of Sindbis virus.When methods such as the grafting approach are developed in conjunction with prediction algorithms we are better able to probe continuous Ca2+-binding sites that have been previously underrepresented due to the limitation of conventional methodology. 展开更多
关键词 CA2+ ef-hand calcium BINDING pockets protein GRAFTING approach STREPTOCOCCUS pyrogenes SINDBIS virus
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Functional analysis of schistosomes EF-hand domain-containing tegument proteins
10
作者 YU FuDong1,2,3,KANG Bin1,3,LI YuanYuan3,4 & LI YiXue1,3 1 Bioinformatics Center,Key Laboratory of Systems Biology,Shanghai Institutes for Biological Sciences,Chinese Academy of Sci-ences,Shanghai 200031,China 2 Graduate University of Chinese Academy of Sciences,Shanghai 200031,China +1 位作者 3 Shanghai Center for Bioinformation Technology,Shanghai 200235,China 4 Key Laboratory of Systems Biology,Shanghai Institutes for Biological Sciences,Chinese Academy of Sciences,Shanghai 200031,China 《Chinese Science Bulletin》 SCIE EI CAS 2007年第15期2100-2107,共8页
Schistosomes cause schistosomiasis disease which severely threatens human health. Little is known about the functions of EF-hand domain containing schistosomes tegument proteins other than as an-tigens. More possible ... Schistosomes cause schistosomiasis disease which severely threatens human health. Little is known about the functions of EF-hand domain containing schistosomes tegument proteins other than as an-tigens. More possible functions of these tegument proteins were investigated with in silico analyses including protein-protein functional interaction,site-specific variation and glycosylation modification. The analysis results suggested that schistosomes could actively modulate host immune responses for its own favor through functional interactions with host proteins with immunomodulatory function,and passively regulate host immune responses through sequence variation under positive selection and glycosylating the recognition sites of host immune attack. In addition,the analysis of the C-terminal domain of these tegument proteins indicated that they could assist schistosomes in escaping host immune attacks through inhibiting chemotaxis and non-complement fixing antibody (IgG4) responses. In summary,our results suggested that these tegument antigen proteins could assist schistosomes in escaping and modulating host immune responses for self-protection during the process of host-para-site interaction. 展开更多
关键词 寄生虫 血吸虫 皮蛋白质 健康
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三阴性乳腺癌组织中LETM1、HIF-1α的表达及其对临床预后的影响
11
作者 李庆辉 牛冰 +2 位作者 李海平 冯燕枝 叶贝贝 《齐齐哈尔医学院学报》 2025年第4期327-331,共5页
目的 探讨三阴性乳腺癌(TNBC)组织中亮氨酸拉链EF-hand结构域跨膜蛋白1(LETM1)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达及其对临床预后的影响。方法 回顾性分析2018年5月—2021年5月本院收治的177例行改良根治术治疗的TNBC患者病历资料和随... 目的 探讨三阴性乳腺癌(TNBC)组织中亮氨酸拉链EF-hand结构域跨膜蛋白1(LETM1)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达及其对临床预后的影响。方法 回顾性分析2018年5月—2021年5月本院收治的177例行改良根治术治疗的TNBC患者病历资料和随访资料,根据术后3年复发情况将其分为复发组(n=53)和未复发组(n=124)。检测TNBC患者手术切除标本的癌组织和癌旁组织中LETM1、HIF-1α表达水平并比较差异。比较不同预后TNBC患者基线资料及癌组织中LETM1、HIF-1α表达;采用Logistic回归分析TNBC患者临床预后的影响因素;绘制受试者工作特征(ROC)曲线,检验癌组织中LETM1、HIF-1α对TNBC患者临床预后的预测价值;绘制决策曲线评估癌组织中LETM1、HIF-1α预测TNBC患者临床预后的临床获益情况。结果 癌组织中LETM1、HIF-1α表达水平高于癌旁正常组织(P<0.05)。复发组和未复发组肿瘤最大径、淋巴结转移、Ki-67、LETM1、HIF-1α比较,差异有统计学意义(P<0.05)。经Logistic回归分析,肿瘤最大径>5 cm、Ki-67阳性、LETM1、HIF-1α是TNBC患者复发的危险因素(OR>1,P<0.05)。绘制ROC曲线显示,癌组织中LETM1、HIF-1α单独及联合对TNBC患者复发均有一定预测价值,且联合预测价值最高(P<0.05)。绘制决策曲线显示,在阈值0.12~0.95范围内,癌组织中LETM1、HIF-1α联合预测TNBC患者复发的净收益率优于单一指标,最大净收益率为0.299;且在高风险阈值0~1范围内,联合预测的净收益率>0,有临床意义。结论 LETM1、HIF-1α在TNBC组织中呈高表达,二者均为TNBC患者复发的影响因素,且可作为患者复发的预测指标,联合两项指标可提高预测效能。 展开更多
关键词 三阴性乳腺癌 亮氨酸拉链ef-hand结构域跨膜蛋白1 缺氧诱导因子-1Α 预后
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东乡野生稻OrCaM/OrCML基因家族鉴定与冷胁迫下表达模式分析
12
作者 霍晨敏 许天运 +1 位作者 王娇 周硕 《河北大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第3期266-277,共12页
东乡野生稻的耐冷性优于栽培稻,具有丰富的抗冷基因资源.本研究对东乡野生稻OrCaM/OrCML基因家族成员进行全基因组水平鉴定和理化性质分析,并探究家族成员冷胁迫后表达模式.结果显示,东乡野生稻中有40个OrCaM/OrCML家族成员,在系统进化... 东乡野生稻的耐冷性优于栽培稻,具有丰富的抗冷基因资源.本研究对东乡野生稻OrCaM/OrCML基因家族成员进行全基因组水平鉴定和理化性质分析,并探究家族成员冷胁迫后表达模式.结果显示,东乡野生稻中有40个OrCaM/OrCML家族成员,在系统进化树中分布于亚组Ⅰ~Ⅶ.各组成员除EF手单元,无其他已知功能的结构域.OrCaM/OrCML基因的启动子顺式元件种类和数量不同,笔者研究了14个具有CRT/DRE或CM2顺式元件的OrCaM/OrCML基因对冷胁迫的反应.结果表明,OrCML1、OrCML6和OrCML18属于冷胁迫后激活最快的3个基因.本结果对于研究OrCaM/OrCML基因家族响应冷胁迫的分子机制提供了参考. 展开更多
关键词 东乡野生稻 钙调蛋白/类钙调蛋白 保守基序 EF手单元 启动子分析
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大豆CML家族基因的生物信息学分析 被引量:13
13
作者 陈超 端木慧子 +3 位作者 朱丹 刘艾林 肖佳雷 朱延明 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期957-963,共7页
CMLs蛋白是一类具有Ca2+结合的EF-hand保守结构域蛋白,广泛参与钙依赖的信号传导途径,在植物生长发育及生物胁迫与非生物胁迫响应中起着重要的作用。通过NCBI和植物基因组注释数据库等筛选并获得了68个大豆GmCML蛋白;分析了所有蛋白的... CMLs蛋白是一类具有Ca2+结合的EF-hand保守结构域蛋白,广泛参与钙依赖的信号传导途径,在植物生长发育及生物胁迫与非生物胁迫响应中起着重要的作用。通过NCBI和植物基因组注释数据库等筛选并获得了68个大豆GmCML蛋白;分析了所有蛋白的基本特性;通过与拟南芥CMLs基因的进化树分析表明,GmCML家族基因属于8个亚类;对GmCML家族基因进行了染色体定位与重复基因进化关系分析,发现其具有较高的进化速率;序列比对发现GmCML类蛋白含有2~4个保守的EF-hand结构域;利用芯片数据对野生大豆在碱胁迫下的叶和根中的CMLs基因表达模式进行了分析,得到26个GsCML基因在碱胁迫下有显著的差异表达,且在根和叶中的差异表达模式不同,表明这些基因参与植物碱胁迫应答,且具组织表达特异性。 展开更多
关键词 大豆 CMLs ef-hand 生物信息学 进化分析
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小麦类钙调素TaCML79基因的克隆和表达分析 被引量:7
14
作者 周硕 刘永伟 +6 位作者 董福双 杨帆 赵和 柴建芳 吕孟雨 孙果忠 王海波 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2016年第6期1-6,共6页
为了研究小麦类钙调素基因的功能和在植物逆境响应中的分子机制,以电子克隆结合RT-PCR的方法,在小麦中克隆到一个类钙调素基因TaCML79。该基因的开放阅读框长度为588bp,编码的蛋白长度为195个氨基酸,推测的分子量为20.45kDa,等电点为4.6... 为了研究小麦类钙调素基因的功能和在植物逆境响应中的分子机制,以电子克隆结合RT-PCR的方法,在小麦中克隆到一个类钙调素基因TaCML79。该基因的开放阅读框长度为588bp,编码的蛋白长度为195个氨基酸,推测的分子量为20.45kDa,等电点为4.6,属于酸性蛋白,具有2个典型的和一个不完整的EF-hand结构域。多序列比对和系统进化树分析表明,TaCML79与野生稻的ObCML35和水稻的OsCML10亲缘关系较近,相似性分别为84.6%和86.8%。该基因的表达在根和地上部分受到热激、NaCl、渗透和冷胁迫的诱导或抑制,初步推断该基因可能与植物抗逆有密切的关系。 展开更多
关键词 小麦 类钙调素 ef-hand结构域 基因克隆 基因表达
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大珠母贝外套膜基因PMMG1的克隆、表达及其特征分析 被引量:2
15
作者 王玉梅 夏建红 +1 位作者 黄桂菊 喻达辉 《海洋学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期121-128,共8页
EF-hand结构域在真核生物细胞内钙离子吸收和运输中发挥重要作用,在贝类中可能参与贝壳和珍珠质的形成。根据已报道的贝类中具有EF-hand结构域的碱基序列设计简并引物,从大珠母贝外套膜cDNA文库中筛选得到PMMG1基因(大珠母贝外套膜基因1... EF-hand结构域在真核生物细胞内钙离子吸收和运输中发挥重要作用,在贝类中可能参与贝壳和珍珠质的形成。根据已报道的贝类中具有EF-hand结构域的碱基序列设计简并引物,从大珠母贝外套膜cDNA文库中筛选得到PMMG1基因(大珠母贝外套膜基因1)。PMMG1基因全长618 bp,开放读码框编码140个氨基酸,N-端的22个氨基酸肽段为信号肽。PMMG1氨基酸序列与合浦珠母贝PFMG1的一致性为56%,预测有两个EF-hand结构域。选取编码PMMG1成熟蛋白的cDNA序列插入pET-32a质粒构建表达载体,通过IPTG诱导,Ni2+-NTA亲和层析柱纯化,成功获得预期大小的融合蛋白。凝胶电泳迁移率的变化证明PMMG1蛋白具有结合Ca2+/Mg2+的活性,组织特异性表达表明PMMG1基因在外套膜的表达量远高于其他组织。大珠母贝外套膜基因PMMG1的克隆与表达研究为进一步研究该蛋白在珍珠质矿化中的作用、探讨珍珠质形成的分子生物学机制奠定了一定基础。 展开更多
关键词 大珠母贝 PMMG1 ef-hand结构域 融合蛋白 珍珠质
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LETM1蛋白在三阴性乳腺癌组织中的表达及与患者临床特征和预后的关系 被引量:6
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作者 吕金燕 王刚 +2 位作者 王若雨 朱金明 姜佳宁 《癌症进展》 2018年第11期1404-1407,共4页
目的探讨亮氨酸拉链EF-hand结构域跨膜蛋白1(LETM1)在三阴性乳腺癌(TNBC)组织中的表达及与患者临床特征和预后的关系。方法选取100例TNBC患者的TNBC组织标本,另选取同期100例导管原位癌患者的导管内原位癌组织标本及其癌旁正常组织标本... 目的探讨亮氨酸拉链EF-hand结构域跨膜蛋白1(LETM1)在三阴性乳腺癌(TNBC)组织中的表达及与患者临床特征和预后的关系。方法选取100例TNBC患者的TNBC组织标本,另选取同期100例导管原位癌患者的导管内原位癌组织标本及其癌旁正常组织标本。采用免疫组织化学法检测各组织中LETM1蛋白的表达情况,分析LETM1蛋白表达与TNBC患者临床特征及预后的关系。结果 TNBC组织中LETM1蛋白的阳性表达率高于导管内原位癌组织和癌旁正常组织(P﹤0.05),导管内原位癌组织中LETM1蛋白的阳性表达率高于癌旁正常组织(P﹤0.05)。组织学分级为Ⅱ~Ⅲ级、临床分期为Ⅲ期、有淋巴结转移的TNBC患者的LETM1蛋白中等-强阳性表达率均高于组织学分级为Ⅰ级、临床分期为Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移的患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05);不同年龄、绝经状态、肿瘤直径和p53表达情况的TNBC患者的LETM1蛋白中等-强阳性表达率比较,差异均无统计学意义(P﹥0.05)。单因素分析结果显示,年龄≥50岁、绝经后、组织学分级为Ⅱ~Ⅲ级、有淋巴结转移、LETM1蛋白表达为中等-强阳性的TNBC患者的中位总生存时间(OS)均短于年龄﹤50岁、绝经前、组织学分级为Ⅰ级、无淋巴结转移、LETM1蛋白表达为阴性+弱阳性的TNBC患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。多因素分析结果显示,淋巴结转移和LETM1蛋白强阳性表达是影响TNBC患者OS的独立危险因素(P﹤0.05)。结论LETM1蛋白可作为临床上判断TNBC恶性程度的指标,是影响TNBC患者预后的独立危险因素,可作为TNBC预后预测的指标,有望成为TNBC潜在的生物学指标及治疗靶点。 展开更多
关键词 亮氨酸拉链ef-hand结构域跨膜蛋白1 TNBC 临床特征 预后
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三角帆蚌EFCB1基因cDNA序列克隆及表达研究 被引量:4
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作者 祁晓翔 李文娟 +3 位作者 尚朝 周子睿 尚攀 施志仪 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第7期962-970,共9页
为了发掘更多三角帆蚌具有EF-hand结构域的功能基因及其蛋白质,本研究运用RACE-PCR技术,克隆得到了三角帆蚌包含EF-hand结构域钙结合蛋白1基因(EF-hand calcium-binding domain-containing protein 1,EFCB1)的c DNA全长并进行了生物信... 为了发掘更多三角帆蚌具有EF-hand结构域的功能基因及其蛋白质,本研究运用RACE-PCR技术,克隆得到了三角帆蚌包含EF-hand结构域钙结合蛋白1基因(EF-hand calcium-binding domain-containing protein 1,EFCB1)的c DNA全长并进行了生物信息学分析;通过real-time Q-PCR技术,分析了EFCB1基因在三角帆蚌10个组织,以及内脏团、外套膜插核后不同时间点的时空表达特点。结果表明三角帆蚌EFCB1基因c DNA序列全长981 bp,ORF为531 bp,编码176个氨基酸残基,5'-UTR 239 bp和3'-UTR 211 bp。EFCB1分子式为C877H1348N238O270S10,分子量约19.9 ku,等电点为4.70,不稳定系数为62.65,属亲水蛋白。其序列无信号肽序列,存在1个跨膜区域和2个EF-hand结构域,EF-hand模块分别为DLNDDKLISPEE(98-109)和DTNGDDKLDGEE(129-140)。荧光定量结果显示三角帆蚌EFCB1基因在各组织中均有表达,其中在肠和鳃中表达量最高(P<0.05),外套膜中表达量显著高于内脏团(P<0.05)。EFCB1基因在插核后不同时期的外套膜和内脏团育珠部位组织中表达具有显著差异(P<0.05),在外套膜中的表达量均显著高于内脏团(P<0.05),在插核后第20天时表达量显著高于各时期(P<0.05)。研究表明,EFCB1在三角帆蚌Ca2+的吸收过程中发挥调节作用,在珍珠囊形成过程中以及珍珠形成初期具有重要功能。 展开更多
关键词 三角帆蚌 EFCB1 ef-hand结构域 有核珍珠 基因表达
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LETM1对骨肉瘤细胞恶性生物学行为的作用及其机制 被引量:2
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作者 石雨鹭 康权 +1 位作者 岳小涵 罗庆 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第10期1163-1173,共11页
目的 探讨亮氨酸拉链-EF-hand跨膜蛋白1(LETM1)对人骨肉瘤MG63及143B细胞增殖、迁移、凋亡、成骨分化及体内成瘤的作用及其机制。方法 将骨肉瘤MG63及143B细胞分为空白对照组(未加入腺病毒感染)、阴性对照组(sh-NC组,用RNAi阴性对照病... 目的 探讨亮氨酸拉链-EF-hand跨膜蛋白1(LETM1)对人骨肉瘤MG63及143B细胞增殖、迁移、凋亡、成骨分化及体内成瘤的作用及其机制。方法 将骨肉瘤MG63及143B细胞分为空白对照组(未加入腺病毒感染)、阴性对照组(sh-NC组,用RNAi阴性对照病毒感染)及LETM1敲低组(sh-LETM1组,用sh-LETM1腺病毒感染)。采用Western blotting检测各组LETM1蛋白在健康人成骨细胞hFOB1.19及骨肉瘤细胞中的表达水平,以验证腺病毒敲低效果;细胞克隆形成实验及CCK-8法检测细胞增殖情况;划痕愈合实验及Transwell实验检测细胞迁移情况;DAPI染色法及Annexin V-APC/7-AAD流式细胞术双染法检测细胞凋亡情况;碱性磷酸酶(ALP)染色及茜素红S染色检测细胞的早期及晚期成骨分化情况。将10只裸鼠分为sh-NC组(n=5,以RNAi阴性对照病毒感染的143B细胞注入裸鼠皮下)与sh-LETM1组(n=5,以sh-LETM1腺病毒感染的143B细胞注入裸鼠皮下),并采用裸鼠皮下成瘤实验检测各组细胞的体内成瘤能力。结果 Western blotting检测结果显示,LETM1蛋白在骨肉瘤MG63及143B细胞中的表达明显高于健康人成骨细胞hFOB1.19(P<0.05),sh-LETM1腺病毒感染MG63及143B细胞后明显降低了LETM1蛋白的表达。细胞克隆形成实验及CCK-8法检测结果显示,在MG63及143B骨肉瘤细胞中,sh-LETM1组较sh-NC组及空白对照组的克隆形成能力及增殖能力明显降低(P<0.01)。Wound-healing实验及Transwell实验结果显示,在MG63及143B骨肉瘤细胞中,sh-LETM1组较sh-NC组及空白对照组的细胞迁移率明显降低(P<0.01)。DAPI染色及流式细胞术结果显示,在MG63及143B骨肉瘤细胞中,sh-LETM1组较sh-NC组的细胞凋亡率明显增高(P<0.01)。ALP染色及茜素红S染色实验结果显示,在MG63及143B骨肉瘤细胞中,sh-LETM1组较sh-NC组及空白对照组染色区域及钙盐结节增多。裸鼠皮下成瘤实验结果显示,143B sh-LETM1组较143B sh-NC组细胞的皮下成瘤能力降低。结论 LETM1可促进MG63和143B骨肉瘤细胞的增殖、迁移及体内成瘤,其机制可能与抑制细胞凋亡及成骨分化有关。 展开更多
关键词 骨肉瘤细胞 亮氨酸拉链-ef-hand跨膜蛋白1 细胞增殖 细胞迁移 凋亡 细胞分化
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中间锦鸡儿CiCML23基因克隆及序列分析 被引量:1
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作者 田晓娜 杨杞 +1 位作者 庞彩霞 李龙梅 《分子植物育种》 CAS 北大核心 2021年第8期2557-2563,共7页
本研究以抗旱、抗寒、耐盐碱的中间锦鸡儿为材料,筛选其优良抗逆基因,为林草基因工程提供基因源。在中间锦鸡儿干旱胁迫转录组文库中找到1条注释为CiCML基因的序列,设计引物对其进行克隆。克隆得到CiCML基因cDNA序长列817 bp,包括426 b... 本研究以抗旱、抗寒、耐盐碱的中间锦鸡儿为材料,筛选其优良抗逆基因,为林草基因工程提供基因源。在中间锦鸡儿干旱胁迫转录组文库中找到1条注释为CiCML基因的序列,设计引物对其进行克隆。克隆得到CiCML基因cDNA序长列817 bp,包括426 bp开放阅读框,编码142个氨基酸。通过比对分析发现该基因与豆科模式植物蒺藜苜蓿CML23基因同源,具有较近的亲缘关系,因此命名为CiCML23。预测其等电点为4.42,分子质量为15.65 kD,是稳定的亲水性蛋白,存在CML典型的EF-hand结构域。初步阐明CiCML23基因的序列特征,为进一步预测CiCML23基因的功能提供参考依据。 展开更多
关键词 中间锦鸡儿 CiCML23 ef-hand 基因克隆 序列分析
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