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东方拟无枝酸菌中基因AORI_2943的敲除对ECO-0501合成的影响
1
作者 朱丽 饶敏 +1 位作者 蒋美珍 戈梅 《中国医药生物技术》 2015年第4期330-334,共5页
目的对位于ECO-0501生物合成基因簇内AORI_2943基因进行功能鉴定,进一步解析东方拟无枝酸菌中ECO-0501的生物合成途径。方法通过同源重组和定点整合的方式构建AORI_2943缺失、回补及过表达突变株。高效液相及质谱分析突变株发酵产物的变... 目的对位于ECO-0501生物合成基因簇内AORI_2943基因进行功能鉴定,进一步解析东方拟无枝酸菌中ECO-0501的生物合成途径。方法通过同源重组和定点整合的方式构建AORI_2943缺失、回补及过表达突变株。高效液相及质谱分析突变株发酵产物的变化,分析AORI_2943在ECO-0501合成中的作用。结果 AORI_2943缺失突变株不产ECO-0501和去甲基ECO-0501,只产生结构上缺失了C5N单位(2-氨基-3-羟基环戊-2-烯酮)的前体物质a和b,发酵液中未检测出C5N单位。对缺失突变株回补后,有少量ECO-0501及去甲基ECO-0501产生,同时仍然有大量前体化合物a和b的积累。在野生菌的基础上过表达AORI_2943,并未明显提高ECO-0501的产量。结论 AORI_2943是ECO-0501合成的关键基因,主要参与了ECO-0501前体化合物C5N单位的合成。 展开更多
关键词 东方拟无枝酸菌 eco-0501 AORI_2943
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ECO-0501产生菌的发酵条件优化 被引量：4
2
作者 郦伟翔 阮林高 +2 位作者 盛下放 戈梅 陈代杰 《中国医药工业杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期736-738,共3页
优化东方拟无枝酸菌(Amycolatopsis orientalis)dA9发酵制备ECO-0501的工艺条件,包括种龄、初始pH、培养温度、碳氮源种类等,并通过正交试验优化发酵培养基的组成。在30℃、种龄3d、接种量8%、发酵4d的条件下,摇瓶发酵单位达115mg/L,比... 优化东方拟无枝酸菌(Amycolatopsis orientalis)dA9发酵制备ECO-0501的工艺条件,包括种龄、初始pH、培养温度、碳氮源种类等,并通过正交试验优化发酵培养基的组成。在30℃、种龄3d、接种量8%、发酵4d的条件下,摇瓶发酵单位达115mg/L,比优化前提高了约60%。 展开更多
关键词 eco-0501 东方拟无枝酸菌dA9 发酵
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东方拟无枝酸菌中ECO-0501生物合成基因簇的筛选及其相关调控基因的初步分析 被引量：2
3
作者 申洋 黄鹤 +3 位作者 朱丽 杨晟 戈梅 陈代杰 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期327-331,共5页
ECO-0501是从东方拟无枝酸菌代谢物中分离到的一种新型线性多烯类化合物,其不但具有良好的抗菌活性,且体内毒性较低,目前处于临床前的开发。本文通过对东方拟无枝酸菌的菌落原位杂交,筛选到4个粘粒克隆NL5B,NL9-3-1,NL3-1C,NL3-3A,可以... ECO-0501是从东方拟无枝酸菌代谢物中分离到的一种新型线性多烯类化合物,其不但具有良好的抗菌活性,且体内毒性较低,目前处于临床前的开发。本文通过对东方拟无枝酸菌的菌落原位杂交,筛选到4个粘粒克隆NL5B,NL9-3-1,NL3-1C,NL3-3A,可以覆盖整个ECO-0501生物合成簇,并对其中的基因ORF4进行了生物信息学分析,推测其为ECO-0501合成途径中的正调控基因。并通过该基因的过表达,成功地将ECO-0501的产量提高了6倍,为下一步ECO-0501的开发及其调控机制的研究打下基础。 展开更多
关键词 eco-0501 东方拟无枝酸菌 菌落原位杂交 调控蛋白
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产N-demethyl ECO-0501工程菌的构建 被引量：1
4
作者 申洋 朱丽 +1 位作者 阮林高 陈代杰 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期251-254,共4页
ECO-0501是一种在东方拟无枝酸菌(Amycolatopsis orientalis)中分离出的一种新型抗菌化合物。N-demethyl ECO-0501作为ECO-0501生物合成途径的小组分在抗菌活性方面优于ECO-0501。ECO-ORF5(ABM47006.1)编码N-甲基转移酶,负责ECO-0501胍... ECO-0501是一种在东方拟无枝酸菌(Amycolatopsis orientalis)中分离出的一种新型抗菌化合物。N-demethyl ECO-0501作为ECO-0501生物合成途径的小组分在抗菌活性方面优于ECO-0501。ECO-ORF5(ABM47006.1)编码N-甲基转移酶,负责ECO-0501胍基的甲基化修饰。本研究利用PCR-targeting的方法敲除了产生菌东方拟无枝酸菌HCCB10162的ECO-ORF5,得到了一株高产去甲基ECO-0501的突变株A.orientalis HCCB10370,其产量是东方拟无枝酸菌HCCB10162的3.6倍。 展开更多
关键词 eco-0501 PCR-targeting 甲基转移酶 东方拟无枝酸菌
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在东方拟无枝酸菌中建立I-SceI内切酶介导的无标记敲除系统
5
作者 朱丽 饶敏 罗敏玉 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期330-333,共4页
目的在东方拟无枝酸菌中建立由I-Sce I介导的无标记高效重组系统。方法首先构建可用于东方拟无枝酸菌的I-Sce I操作盒,通过敲除多烯类化合物ECO-0501合成相关基因hem A2,比较操作盒使用前后获得hem A2基因双交换突变株的效率。结果在没... 目的在东方拟无枝酸菌中建立由I-Sce I介导的无标记高效重组系统。方法首先构建可用于东方拟无枝酸菌的I-Sce I操作盒,通过敲除多烯类化合物ECO-0501合成相关基因hem A2,比较操作盒使用前后获得hem A2基因双交换突变株的效率。结果在没有引入I-Sce I的情况下,随机重组的发生几率仅约2%,而导入后,由于I-Sce I酶对引入DNA位点的双链切割,导致双交换重组的发生率提高至90%以上。结论 I-Sce I系统是一种可用于东方拟无枝酸菌无标记遗传操作的有效工具。 展开更多
关键词 I-SceI内切酶 东方拟无枝酸菌 eco-0501 hemA2
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内源性质粒pXL100的消除影响东方拟无枝酸菌HCCB10007中次级代谢产物的合成
6
作者 仲茜 徐莉 +2 位作者 朱丽 戈梅 钱秀萍 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期570-574,共5页
目的利用分子手段获得东方拟无枝酸菌HCCB10007内源环型质粒pXL100消除突变株,探究大质粒pXL100对于HCCB10007次级代谢产物的影响。方法利用同源重组的方法将pXL100上疑似编码与质粒复制相关的基因orf37(par A)阻断,同时引入安普霉素抗... 目的利用分子手段获得东方拟无枝酸菌HCCB10007内源环型质粒pXL100消除突变株,探究大质粒pXL100对于HCCB10007次级代谢产物的影响。方法利用同源重组的方法将pXL100上疑似编码与质粒复制相关的基因orf37(par A)阻断,同时引入安普霉素抗性基因作为后续的筛选标记。通过EB诱导,影印培养筛选pXL100消除突变株。比较突变株与原始菌株生长及主要次级代谢产物的变化。结果通过筛选获得质粒消除突变株HCCB10007-pXL(-),其万古霉素和ECO-0501的产量较原始菌明显下降,分别为原菌株的1/4和1/100。结论东方拟无枝酸菌HCCB10007的质粒pXL100具有调控万古霉素和ECO-0501合成的基因。 展开更多
关键词 东方拟无枝酸菌 质粒消除 pXL100 万古霉素 EC-0501
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