目的探讨烯脂酰辅酶A水合酶短链1(Enoyl coenzyme A hydratase short chain 1,ECHS1)基因在肝癌细胞迁移及侵袭中的作用。方法利用基因芯片技术筛选并分析肝癌差异表达基因;构建ECHS1干扰及过表达质粒检测对肝癌细胞迁移和侵袭的影响。...目的探讨烯脂酰辅酶A水合酶短链1(Enoyl coenzyme A hydratase short chain 1,ECHS1)基因在肝癌细胞迁移及侵袭中的作用。方法利用基因芯片技术筛选并分析肝癌差异表达基因;构建ECHS1干扰及过表达质粒检测对肝癌细胞迁移和侵袭的影响。利用TCGA数据库分析肝癌组织中ECHS1基因表达及其对预后影响。结果肝癌显著差异表达基因214条,其中ECHS1表达最为显著;干扰ECHS1基因表达对肝癌细胞迁移、侵袭有显著抑制作用,ECHS1基因过表达后增强肝癌细胞迁移能力和侵袭能力;TCGA数据库分析显示较癌旁组织而言,肝癌组织中ECHS1高表达,且表达水平与肝癌预后相关。结论ECHS1基因促进肝癌迁移和侵袭并可作为预后标志物。展开更多
目的:观察烯脂酰辅酶A水合酶短链1(enoyl-coenzyme A hydratase,short chain1,ECHS1)对肝癌HepG2细胞增殖的影响。方法:将干扰ECHS1基因的重组质粒pGPU6/GFP/siRNA-ECHS1转染至HepG2细胞,通过嘌呤霉素筛选稳定干扰ECHS1基因表达的HepG2...目的:观察烯脂酰辅酶A水合酶短链1(enoyl-coenzyme A hydratase,short chain1,ECHS1)对肝癌HepG2细胞增殖的影响。方法:将干扰ECHS1基因的重组质粒pGPU6/GFP/siRNA-ECHS1转染至HepG2细胞,通过嘌呤霉素筛选稳定干扰ECHS1基因表达的HepG2细胞,蛋白质印迹法检测细胞中ECHS1蛋白的表达水平。pGPU6/GFP/siRNA-ECHS1转染HepG2细胞后,CCK-8(cellcountingkit-8)和5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-bromo-2’-deoxyuridine,BrdU)法检测细胞的增殖情况,蛋白质印迹法检测细胞中细胞外信号调节激酶(extracellular signal regulated kinase,ERK)、磷酸化ERK(phosphorylated-ERK,p-ERK)、cyclinD3和cyclinD1蛋白的表达水平。结果:成功建立稳定干扰ECHS1基因表达的HepG2细胞,pGPU6/GFP/siRNA-ECHS1转染后HepG2细胞中ECHS1蛋白的表达水平明显低于空白对照组(未转染质粒的HepG2细胞)和阴性对照组(转染空载体pGPU6的HepG2细胞)(P<0.05)。与阴性对照组比较,pGPU6/GFP/siRNA-ECHS1转染后HepG2细胞的增殖能力受到明显抑制(P<0.05),p-ERK、cyclinD3和cyclinD1蛋白的表达水平均明显降低(P<0.05)。结论:ECHS1可能通过上调p-ERK、cyclinD3和cyclinD1的表达而促进肝癌HepG2细胞的增殖。展开更多
目的:制备小鼠抗人烯脂酰辅酶A水解酶(enoyl CoA hydratase,ECHS1)的单克隆抗体(mAb)并进行初步鉴定。方法:将正常成人肝组织匀浆离心并分离线粒体,用线粒体总蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备mAb,并通过间接ELISA、Western blot...目的:制备小鼠抗人烯脂酰辅酶A水解酶(enoyl CoA hydratase,ECHS1)的单克隆抗体(mAb)并进行初步鉴定。方法:将正常成人肝组织匀浆离心并分离线粒体,用线粒体总蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备mAb,并通过间接ELISA、Western blot、免疫沉淀、免疫组化和间接免疫荧光等方法对mAb进行特异性鉴定,通过Uni-ZAP XR正常成人肝脏cDNA表达文库筛选鉴定抗原。结果:获得1株可稳定分泌抗人ECHS1 mAb的杂交瘤细胞株BGB095。该mAb的Ig亚类(型)为IgG1(κ),可用于ELISA检测、Western blot、免疫沉淀、免疫组化等实验。结论:成功制备了抗人ECHS1的mAb,为代谢疾病和肿瘤的研究提供了有力的工具。展开更多
文摘目的探讨烯脂酰辅酶A水合酶短链1(Enoyl coenzyme A hydratase short chain 1,ECHS1)基因在肝癌细胞迁移及侵袭中的作用。方法利用基因芯片技术筛选并分析肝癌差异表达基因;构建ECHS1干扰及过表达质粒检测对肝癌细胞迁移和侵袭的影响。利用TCGA数据库分析肝癌组织中ECHS1基因表达及其对预后影响。结果肝癌显著差异表达基因214条,其中ECHS1表达最为显著;干扰ECHS1基因表达对肝癌细胞迁移、侵袭有显著抑制作用,ECHS1基因过表达后增强肝癌细胞迁移能力和侵袭能力;TCGA数据库分析显示较癌旁组织而言,肝癌组织中ECHS1高表达,且表达水平与肝癌预后相关。结论ECHS1基因促进肝癌迁移和侵袭并可作为预后标志物。
文摘目的:观察烯脂酰辅酶A水合酶短链1(enoyl-coenzyme A hydratase,short chain1,ECHS1)对肝癌HepG2细胞增殖的影响。方法:将干扰ECHS1基因的重组质粒pGPU6/GFP/siRNA-ECHS1转染至HepG2细胞,通过嘌呤霉素筛选稳定干扰ECHS1基因表达的HepG2细胞,蛋白质印迹法检测细胞中ECHS1蛋白的表达水平。pGPU6/GFP/siRNA-ECHS1转染HepG2细胞后,CCK-8(cellcountingkit-8)和5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-bromo-2’-deoxyuridine,BrdU)法检测细胞的增殖情况,蛋白质印迹法检测细胞中细胞外信号调节激酶(extracellular signal regulated kinase,ERK)、磷酸化ERK(phosphorylated-ERK,p-ERK)、cyclinD3和cyclinD1蛋白的表达水平。结果:成功建立稳定干扰ECHS1基因表达的HepG2细胞,pGPU6/GFP/siRNA-ECHS1转染后HepG2细胞中ECHS1蛋白的表达水平明显低于空白对照组(未转染质粒的HepG2细胞)和阴性对照组(转染空载体pGPU6的HepG2细胞)(P<0.05)。与阴性对照组比较,pGPU6/GFP/siRNA-ECHS1转染后HepG2细胞的增殖能力受到明显抑制(P<0.05),p-ERK、cyclinD3和cyclinD1蛋白的表达水平均明显降低(P<0.05)。结论:ECHS1可能通过上调p-ERK、cyclinD3和cyclinD1的表达而促进肝癌HepG2细胞的增殖。
