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基于PCR-CRSIPR/Cas12a的DNMT3A R882H/C可视化检测方法
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作者 蒋清杨 孙如美 +5 位作者 缪夏萍 范喜杰 张浩名 夏银骁 李凯敏 陈涛 《分子影像学杂志》 2025年第5期589-596,共8页
目的开发一种基于聚合酶链式反应(PCR)和成簇的规律间隔短回文重复序列(CRISPR)及其相关蛋白(Cas12a)系统的DNMT3A R882H(c.2645G>A)/C(c.2644C>T)可视化检测系统。方法选取2023年9月~2024年9月于烟台毓璜顶医院收集的34例疑似急... 目的开发一种基于聚合酶链式反应(PCR)和成簇的规律间隔短回文重复序列(CRISPR)及其相关蛋白(Cas12a)系统的DNMT3A R882H(c.2645G>A)/C(c.2644C>T)可视化检测系统。方法选取2023年9月~2024年9月于烟台毓璜顶医院收集的34例疑似急性髓系白血病患者的骨髓样本。针对DNMT3A R882H/C突变位点序列,首先设计PCR-Cas12a核酸检测系统所需的特异性扩增引物和CRISPR RNA(crRNA)。通过琼脂糖凝胶电泳筛选出扩增性能较好的引物对,并利用Cas12a蛋白切割邻近荧光探针产生的荧光强度,基于突变型和野生型信号的差异筛选出切割效果最好的crRNA,构建PCR⁃Cas12a核酸检测系统。随后将野生型人基因组DNA和DNMT3A R882H/C突变质粒按不同比例混合,模拟不同突变率,评价PCR-Cas12a的最低检测限。最后,使用PCR-Cas12a检测已通过高通量测序技术验证DNMT3A R882H/C突变率的临床样本,评估方法学的一致性和抗干扰能力。结果本研究建立的PCR⁃Cas12a核酸可视化检测系统,能够有效检出突变率为1%的DNMT3A R882H/C临床样本。结论本研究结合PCR与CRISPR-Cas12a技术,建立了一种检测DNMT3A R882H/C突变位点的可视化方法,具有快速以及特异度、敏感度高的特点,为急性髓系白血病的预后评估提供有力支持。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas12a dnmt3a R882H dnmt3a R882C 急性髓系白血病 可视化检测
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靶向沉默DNMT3A对小鼠肺成纤维细胞胶原沉积、增殖及迁移活性的影响
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作者 汪先晨 尤峻柏 +4 位作者 凌辉 范家好 陈齐 陶辉 沙纪名 《安徽医科大学学报》 北大核心 2025年第1期66-72,共7页
目的探讨靶向沉默DNA甲基化转移酶3A(DNMT3A)对小鼠肺成纤维细胞(PFs)胶原沉积、增殖与迁移活性的作用。方法为保证原代成纤维细胞的增殖迁移活性取新生C57乳鼠肺组织,剪碎后提取PFs,在显微镜下观察并鉴定形态。细胞贴壁后使用5 ng/ml T... 目的探讨靶向沉默DNA甲基化转移酶3A(DNMT3A)对小鼠肺成纤维细胞(PFs)胶原沉积、增殖与迁移活性的作用。方法为保证原代成纤维细胞的增殖迁移活性取新生C57乳鼠肺组织,剪碎后提取PFs,在显微镜下观察并鉴定形态。细胞贴壁后使用5 ng/ml TGF-β_(1)作用24 h诱导PFs细胞活化,并用小干扰RNA构建DNMT3A沉默模型;实验分为Control组、TGF-β_(1)组、TGF-β_(1)+siRNA-NC组和TGF-β_(1)+siRNA-DNMT3A组。应用Western blot方法检测DNMT3A、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)的蛋白表达变化;应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)方法检测DNMT3A、α-SMA、CollagenⅠ的mRNA表达变化;CCK-8与EdU染色检测PFs增殖能力;划痕实验与Transwell迁移实验检测PFs迁移能力。结果与Control组相比,TGF-β_(1)诱导活化的PFs细胞组中DNMT3A升高(P<0.01),纤维化与增殖相关指标α-SMA、CollagenⅠ的蛋白及mRNA水平也升高(均P<0.05),同时PFs的增殖与迁移能力升高(均P<0.0001)。而与siRNA-NC组相比,在DNMT3A沉默组中通过Western blot法检测DNMT3A(P<0.0001)及相关指标α-SMA(P<0.01)、CollagenⅠ(P<0.01)的蛋白表达水平均降低,同时通过RT-qPCR法检测DNMT3A、α-SMA及CollagenⅠ的mRNA水平也均降低(P<0.001),并且PFs细胞的增殖(P<0.01)和迁移能力(P<0.05)较对照组下降。结论沉默DNMT3A能够抑制胶原的沉积及PFs的增殖,DNMT3A可以促进PFs的增殖和迁移能力,进而促进PFs的活化以及肺纤维化的发展,这一过程可能受到DNA甲基化修饰的调控。 展开更多
关键词 dnmt3a DNA甲基化 肺成纤维细胞 增殖 迁移 肺纤维化
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半滑舌鳎dnmt3a基因的分子鉴定和功能
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作者 孙衍旭 龚小玲 邵长伟 《上海海洋大学学报》 北大核心 2025年第3期467-475,共9页
为探究dnmt3a基因在半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)性逆转过程中的调控作用,开发适用于半滑舌鳎的DNA甲基化编辑系统,克隆了半滑舌鳎dnmt3a基因的CDS区序列,并通过生物信息学分析其结构域特点以及进化过程中的保守性,利用qPCR分析了... 为探究dnmt3a基因在半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)性逆转过程中的调控作用,开发适用于半滑舌鳎的DNA甲基化编辑系统,克隆了半滑舌鳎dnmt3a基因的CDS区序列,并通过生物信息学分析其结构域特点以及进化过程中的保守性,利用qPCR分析了其在半滑舌鳎不同性别中的表达模式,探究了DNA甲基化酶抑制剂5-Aza-dC处理对dnmt3a基因表达的影响。结果表明,dnmt3a基因全长3063 bp,编码1020个氨基酸,包括3个核心结构域(PWWP结构域、ADDz结构域和AdoMet_MTases超家族),dnmt3a基因结合结构域(PWWP结构域、ADDz结构域)相对保守,催化活性结构域(AdoMet_MTases超家族)与哺乳动物和爬行动物有较大差异。基因表达模式分析表明,雌性半滑舌鳎性腺组织dnmt3a基因表达量显著高于雄性和伪雄性。5-Aza-dC处理后,dnmt3a基因表达显著升高。研究表明:dnmt3a基因在DNA甲基化调控半滑舌鳎性别决定与分化过程中发挥重要作用,为阐明半滑舌鳎性逆转机制和实现半滑舌鳎单基因靶向DNA甲基化编辑提供参考。 展开更多
关键词 半滑舌鳎 dnmt3a基因 DNA甲基化 性别调控 5-AZA-DC
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散发性乳腺癌中DNMT3a、DNMT3b表达与ERα基因启动子甲基化状态及蛋白表达的关系 被引量:10
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作者 王勇 王晓东 +4 位作者 陈文捷 于兆进 吴慧哲 赵琳 魏敏杰 《天津医药》 CAS 2015年第5期500-504,共5页
目的探讨散发性乳腺癌中DNA甲基转移酶(DNMT)3a、DNMT3b蛋白表达情况及其与雌激素受体(ER)α基因启动子甲基化状态及蛋白表达的关系。方法选取180例散发性乳腺癌与30例乳腺纤维腺瘤组织,采用免疫组化法检测组织中DNMT3a、DNMT3b蛋... 目的探讨散发性乳腺癌中DNA甲基转移酶(DNMT)3a、DNMT3b蛋白表达情况及其与雌激素受体(ER)α基因启动子甲基化状态及蛋白表达的关系。方法选取180例散发性乳腺癌与30例乳腺纤维腺瘤组织,采用免疫组化法检测组织中DNMT3a、DNMT3b蛋白的表达情况,甲基化特异性PCR检测97例散发性乳腺癌中ERα基因启动子的甲基化状态。结果乳腺纤维腺瘤与乳腺癌组织中的DNMT3a、DNMT3b蛋白阳性表达率差异无统计学意义;Ⅲ-Ⅳ期乳腺癌组织的DNMT3a、DNMT3b水平高于Ⅰ-Ⅱ期,有淋巴结转移者的DNMT3a表达水平高于无淋巴结转移者(均P〈0.05);97例乳腺癌中有39例(40.2%)发生ERα基因启动子甲基化,DNMT3a蛋白阳性表达与ERα基因甲基化呈正相关(rs=0.250);DNMT3a蛋白表达对患者的总体生存期(OS)有显著影响(P=0.035),对无病生存期(DFS)无明显影响(P=0.064),DNMT3b蛋白表达对患者的OS和DFS无影响(P分别为0.914、0.961)。结论DNMT3a、DNMT3b阳性表达与乳腺癌侵袭转移、病程进展、预后相关;DNMT3a与ERα基因启动子甲基化状态呈正相关;抑制DNMT3a、DNMT3b蛋白可能有利于散发性乳腺癌的预防和治疗。 展开更多
关键词 散发性乳腺癌 dnmt3a DNMT3B ERΑ DNA甲基化 启动区(遗传学)
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DNMT3A调控Drp1对肝星状细胞活化增殖和迁移能力的影响 被引量:6
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作者 王娟 孙峰 +1 位作者 杨晶晶 鲁超 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第10期1542-1547,共6页
目的探讨DNA甲基转移酶3A(DNA methyltransferase 3A,DNMT3A)调控动力相关蛋白1(dynamin-related protein 1,Drp1)介导的线粒体裂变对肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)活化增殖和迁移能力的影响。方法应用5μg·L^(-1)TGF-... 目的探讨DNA甲基转移酶3A(DNA methyltransferase 3A,DNMT3A)调控动力相关蛋白1(dynamin-related protein 1,Drp1)介导的线粒体裂变对肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)活化增殖和迁移能力的影响。方法应用5μg·L^(-1)TGF-β1作用24 h诱导HSC-T6细胞活化,DNMT3A慢病毒感染构建DNMT3A沉默模型;实验分为Control组、TGF-β1组、TGF-β1+LV5-NC组和TGF-β1+LV5-DNMT3A组。分别用RT-qPCR和Western blot检测DNMT3A对相关mRNA和蛋白表达的影响;用CCK-8检测细胞活化增殖的情况;分别用细胞划痕、Transwell迁移实验观察DNMT3A对HSCs细胞迁移能力的影响。结果慢病毒感染成功构建DNMT3A沉默模型。与Control组比较,TGF-β1刺激后DNMT3A水平明显升高,纤维化标志物CollagenⅠ和α-SMA的mRNA和蛋白水平明显升高,线粒体裂变标志物Drp1的mRNA和蛋白水平明显升高,同时HSCs细胞的增殖和迁移能力明显增加;而与NC组比较,DNMT3A沉默组DNMT3A水平明显降低,CollagenⅠ、α-SMA和Drp1表达明显被抑制,HSCs细胞的增殖和迁移能力也明显被抑制。结论沉默DNMT3A可抑制Drp1的水平,同时抑制了HSCs细胞的增殖和迁移能力。提示DNMT3A介导低水平的DNA甲基化修饰可能通过抑制Drp1的水平来抑制线粒体裂变的发生,进而抑制HSCs活化,影响肝纤维化疾病的发生发展。 展开更多
关键词 肝纤维化 线粒体裂变 HSCS dnmt3a Drp1 增殖 迁移
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急性髓系白血病中DNMT3a基因突变的研究 被引量:7
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作者 乔纯 孙超 +6 位作者 张苏江 钱思轩 钱锡峰 缪扣荣 朱华渊 洪鸣 李建勇 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2011年第2期303-307,共5页
本研究探讨急性髓系白血病(AML)患者DNMT3a基因突变情况及临床特征。采用PCR扩增产物直接测序法检测77例AML患者DNMT3a基因第882位氨基酸的突变情况,分析突变阳性患者的临床特征。结果表明,59例初诊AML患者中7例(11.9%)具有DNMT3a基因突... 本研究探讨急性髓系白血病(AML)患者DNMT3a基因突变情况及临床特征。采用PCR扩增产物直接测序法检测77例AML患者DNMT3a基因第882位氨基酸的突变情况,分析突变阳性患者的临床特征。结果表明,59例初诊AML患者中7例(11.9%)具有DNMT3a基因突变,突变类型分别为4例DNMT3a R882C、2例DNMT3aR882H和1例DNMT3a Y874C。7例DNMT3a基因突变患者中2例为M2、1例为M4、4例为M5。27例正常核型中5例(22.7%)发生突变,而21例异常核型中无1例发生突变。CEBPA阳性患者发生DNMT3a突变率明显高于CEBPA阴性患者(p=0.002)。突变患者中有4例(4/7,57.1%)伴有淋系抗原CD4和/或CD7的表达。DNMT3a突变组患者的年龄、性别、骨髓原始细胞数、白细胞数、血小板数、血红蛋白、完全缓解(CR)率、FLT3-ITD、NPM1和c-kit突变与DNMT3a野生型组相比均无统计学意义(p>0.05)。结论:DNMT3a基因突变多见于正常染色体核型AML伴NPM1和/或CEBPA突变阳性患者,其在AML患者预后中的预测价值有待于进一步的深入研究。 展开更多
关键词 dnmt3a基因 基因突变 急性髓系白血病
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急性髓系白血病中DNMT3A p.R882的共存基因突变分析 被引量:5
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作者 刘洁 华海应 +5 位作者 晁红颖 蔡晓辉 张修文 陈梅玉 卢绪章 刘建芳 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期1331-1337,共7页
目的:探讨急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者中DNA甲基转移酶3A(DNA methyltransferase 3A,DNMT3A)p.R882的共存基因突变及其与部分临床参数间的相关性。方法:采用高通量DNA测序技术检测49种靶基因;采用基因组DNA-PCR联合... 目的:探讨急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者中DNA甲基转移酶3A(DNA methyltransferase 3A,DNMT3A)p.R882的共存基因突变及其与部分临床参数间的相关性。方法:采用高通量DNA测序技术检测49种靶基因;采用基因组DNA-PCR联合Sanger测序法检测患者中DNMT3A p.R882、CALR基因9号外显子、NPM1基因12号外显子、FLT3-ITD,及CEBPA的TAD、BZIP两个功能结构域的突变发生情况。结果:①301例患者中共检出41例携带DNMT3A p.R882突变,最常见为M5亚型;97.6%(40/41)DNMT3A p.R882突变患者同时携带其他基因突变,每例患者平均突变3.17次;其中双基因突变9例,3个基因突变共存12例,≥4个基因突变共存19例。②DNMT3A p.R882伴随基因突变最常见的为NPM1(n=27,65.9%),其他依次为:FLT3-ITD(n=18,43.9%)、IDH1(n=9,22.0%)、TET2(n=8,19.5%)及NRAS(n=6,14.6%)等;③≥4个基因突变患者的白细胞水平虽然高于双基因及3个基因突变者,但差异无统计学意义(P>0.05),同样血红蛋白及血小板水平差异亦无统计学意义(P>0.05),共存基因突变为FLT3-ITD者的外周白细胞水平高于野生型(P=0.034),但在年龄、血红蛋白及血小板水平方面的差异无统计学意义。伴NPM1、IDH1或TET2突变者与野生型相比,在中位年龄、外周血白细胞水平间的差异均无统计学意义。④与野生型相比,伴NPM1突变者具有更高的初次诱导完全缓解(complete remission,CR)率,而伴IDH1突变者CR率较低,差异均有统计学意义(P=0.010,0.025);伴FLT3-ITD与TET2突变者与野生型相比,在CR率方面的差异无统计学意义。结论:95%以上的DNMT3A p.R882突变AML均伴有额外基因突变,共存基因突变种类及个数对患者的临床特征有一定影响。 展开更多
关键词 急性髓系白血病 突变 dnmt3a NPM1
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绵羊卵母细胞体外成熟过程中VEGF对DNMT3a表达的影响 被引量:2
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作者 曹忻 邹云龙 +4 位作者 蔡勇 周平 李明 石国庆 康相涛 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期484-492,共9页
旨在探究血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)在绵羊卵母细胞体外成熟过程中对DNMT3a的影响。本研究采用RNA干扰和显微注射技术将针对VEGF两个受体FLT1和KDR/Flk-1的有效干扰片段导入到绵羊卵丘-卵母细胞复合... 旨在探究血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)在绵羊卵母细胞体外成熟过程中对DNMT3a的影响。本研究采用RNA干扰和显微注射技术将针对VEGF两个受体FLT1和KDR/Flk-1的有效干扰片段导入到绵羊卵丘-卵母细胞复合体(Cumulus-oocytes complexes,COCs)中,检测体外成熟培养各时间卵母细胞和颗粒细胞中DNMT3amRNA和蛋白表达水平的变化。结果表明,COCs体外成熟培养过程中,无论是否添加VEGF,卵母细胞内DNMT3amRNA表达量都随着培养时间延续而降低,培养至8h时DNMT3amRNA表达量急速下降,之后下降速度放缓,至24h后各组趋于一致,且未注射干扰片段对照组的下降速度快于其他干扰组(P〈0.01)。添加VEGF组DNMT3amRNA表达量的下降速度快于未添加组。干扰片段导入后发现,FLT1-siRNA和KDR-siRNA复合干扰组干扰效果优于KDR-siRNA干扰组,FLT1-siRNA干扰组干扰效果最弱(P〈0.01)。无论是否添加VEGF,在COCs体外成熟培养过程中,颗粒细胞DNMT3amRNA表达量都随着培养时间延续而降低,且各组表达量差别不大。其中未注射干扰片段对照组的下降速度在COCs成熟培养中期快于其他干扰组(P〈0.05或P〈0.01),FLT1-siRNA干扰效果较好。无论是否添加VEGF卵母细胞内DNMT3a蛋白表达量从0~4h上升,之后匀速下降,至16h急速下降,24h为零。未导入干扰片段对照组下降速度最快。其中16h对照组、FLT1-siRNA干扰组、KDR-siRNA干扰组和FLT1-siRNA&KDR-siRNA复合干扰组DNMT3a蛋白表达量,添加VEGF后,分别下降到培养初期的23.12%、31.07%、41.47%和37.90%,未添加VEGF的组则分别下降到培养初期的37.38%、54.60%、57.58%和82.75%。颗粒细胞中,添加VEGF组DNMT3a蛋白表达量呈现逐渐下降趋势,至20h时,已无DNMT3a蛋白表达;未添加VEGF组从0~4h有略微上升,之后呈现逐渐均速下降趋势,20h时,急速下降,至24h时,无DNMT3a蛋白表达,且干扰片段对DNMT3a蛋白表达影响不大,而本身颗粒细胞中DNMT3a蛋白表达量也不高。结果提示,绵羊COCs体外成熟培养过程中,VEGF加快了卵母细胞中DNMT3a mRNA和蛋白表达量的下降速度。而干扰片段的导入则使DNMT3amRNA和蛋白表达量下降速度放缓;颗粒细胞内VEGF的添加和受体干扰片段的导入,对DNMT3amRNA和蛋白表达影响效果不明显。 展开更多
关键词 血管内皮生长因子 dnmt3a 卵母细胞 绵羊 体外培养
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DNMT3A、FLT3-ITD突变与AML患者不良预后的相关性 被引量:8
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作者 马娟 沈立松 +1 位作者 Jennifer Dunlap Fan Guang 《检验医学》 CAS 2017年第9期784-790,共7页
目的探讨FLT3-ITD及DNMT3A突变对细胞遗传学中等风险的急性髓系白血病(AML)患者预后评估的价值。方法选取2010—2016年美国俄勒冈州健康与科学大学附属医院收治的AML初诊患者132例,根据细胞遗传学分析结果将患者分为预后良好细胞遗传学... 目的探讨FLT3-ITD及DNMT3A突变对细胞遗传学中等风险的急性髓系白血病(AML)患者预后评估的价值。方法选取2010—2016年美国俄勒冈州健康与科学大学附属医院收治的AML初诊患者132例,根据细胞遗传学分析结果将患者分为预后良好细胞遗传学组(简称预后良好组)24例、中等风险细胞遗传学组(简称中等风险组)79例、不良风险细胞遗传学组(简称不良风险组)27例,另有细胞遗传学信息不详2例。使用下一代测序(NGS)技术检测与血液系统肿瘤发病相关的42个基因突变。结果 132例AML患者中有120例(91%)至少发生1个基因突变,多基因(≥2)突变占61%。Kaplan-Meier生存曲线显示,在中等风险组中,FLT3-ITD突变阳性组的总体生存期与FLT3-ITD突变阴性组比较,差异有统计学意义(P<0.001)。进一步分析发现,FLT3-ITD突变阳性+DNMT3A突变组的中位生存期明显短于FLT3-ITD突变阴性组(P<0.001),FLT3-ITD突变阳性+DNMT3A野生型组的中位生存期与FLT3-ITD突变阴性组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。FLT3-ITD突变阳性+DNMT3A突变组的总生存期明显短于FLT3-ITD突变阴性组(P<0.001)和FLT3-ITD突变阳性+DNMT3A野生型组(P=0.003)。结论在细胞遗传学中等风险的AML患者中,如果同时存在FLT3-ITD及DNMT3A突变,提示预后不良。检测FLT3-ITD及DNMT3A突变状态有助于对AML进行预后评估。 展开更多
关键词 FLT3-ITD基因 dnmt3a基因 突变 急性髓系白血病 预后因素
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异基因造血干细胞移植治疗携带TP53、TET2、DNMT3A基因突变的急性白血病/MDS的挑战 被引量:5
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作者 张睿 刘代红 《天津医药》 CAS 北大核心 2018年第8期837-841,共5页
随着二代测序技术临床应用逐渐成熟,在急性白血病/骨髓增生异常综合征(MDS)患者中不断有新的基因突变被发现,并在临床中被证实对预后有重要影响。携带TP53、TET2、DNMT3A基因突变的此类疾病患者化疗缓解时间短,3年无白血病存活率极低。... 随着二代测序技术临床应用逐渐成熟,在急性白血病/骨髓增生异常综合征(MDS)患者中不断有新的基因突变被发现,并在临床中被证实对预后有重要影响。携带TP53、TET2、DNMT3A基因突变的此类疾病患者化疗缓解时间短,3年无白血病存活率极低。异基因造血干细胞移植是唯一可能治愈此类疾病的手段,但疗效远差于未携带上述基因突变者。去甲基化药物、新型靶向药物及免疫靶向治疗有可能为此类疾病的综合治疗带来希望。本文就此类基因对于急性白血病/MDS的预后意义、对异基因造血干细胞移植疗效的影响以及可能的治疗突破进行综述。 展开更多
关键词 造血干细胞移植 白血病 髓样 急性 白血病 淋巴样 骨髓增生异常综合征 基因 p53 dnmt3a TET2
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DNMT3a通过STAT3及RAD51影响胰腺癌细胞对奥沙利铂敏感性的研究 被引量:2
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作者 荆薇 宋娜 +2 位作者 侯科佐 车晓芳 杨向红 《现代肿瘤医学》 CAS 2018年第15期2325-2330,共6页
目的:检测DNMT3a在胰腺癌细胞中的表达及对奥沙利铂(oxaliplatin,OXA)敏感性的影响,探讨DNMT3a对胰腺癌细胞奥沙利铂敏感性影响的机制。方法:MTT法检测奥沙利铂对人胰腺癌Panc-1细胞的增殖影响,及下调DNMT3a对Panc-1细胞奥沙利铂敏感性... 目的:检测DNMT3a在胰腺癌细胞中的表达及对奥沙利铂(oxaliplatin,OXA)敏感性的影响,探讨DNMT3a对胰腺癌细胞奥沙利铂敏感性影响的机制。方法:MTT法检测奥沙利铂对人胰腺癌Panc-1细胞的增殖影响,及下调DNMT3a对Panc-1细胞奥沙利铂敏感性的影响。Western blot检测siD NMT3a对DNMT3a蛋白表达的影响,检测奥沙利铂及下调DNMT3a对γ-H2AX、RAD51、p-STAT3和STAT3蛋白表达的影响。流式细胞仪检测奥沙利铂及联合下调DNMT3a对Panc-1细胞凋亡的影响。结果:奥沙利铂能够以浓度依赖方式抑制胰腺癌Panc-1细胞的增殖。奥沙利铂能够引起DNA损伤、γ-H2AX上调及RAD51增高,同时引起STAT3通路的一过性活化。下调DNMT3a表达能够明显增加Panc-1细胞对奥沙利铂的敏感性,抑制STAT3一过性活化,并抑制RAD51表达,促进DNA损伤,进而增加奥沙利铂诱导Panc-1细胞的凋亡。结论:下调DNMT3a表达能够通过抑制STAT3活化及增加DNA损伤增加胰腺癌细胞对奥沙利铂的敏感性,DNMT3a有望成为胰腺癌新的治疗靶点。 展开更多
关键词 胰腺癌 dnmt3a 奥沙利铂 化疗药物敏感性
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DNMT3a在氢醌致造血干细胞毒性中的作用研究 被引量:1
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作者 武坤 聂波 +5 位作者 杨金荣 贺振新 程沈菊 李艳红 晋臻 史明霞 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期607-612,共6页
目的:探讨DNA甲基转移酶3A(DNMT3a)在氢醌(HQ)致造血干细胞毒性中的调控作用及其机制。方法:人造血干细胞HSPC-1随机分为4组,A组:正常HSPC-1;B组:HQ干预HSPC-1;C组:B组+转染pcDNA3空载体;D组:B组+pcDNA3-DNMT3a。采用RT-qPCR法检测DNMT3... 目的:探讨DNA甲基转移酶3A(DNMT3a)在氢醌(HQ)致造血干细胞毒性中的调控作用及其机制。方法:人造血干细胞HSPC-1随机分为4组,A组:正常HSPC-1;B组:HQ干预HSPC-1;C组:B组+转染pcDNA3空载体;D组:B组+pcDNA3-DNMT3a。采用RT-qPCR法检测DNMT3a、PARP-1 mRNA表达情况;免疫印迹法检测DNMT3a、PARP-1蛋白表达水平。显微镜下观察细胞形态;MTT、流式细胞术分别检测细胞活力和凋亡率。结果:与A组相比,B组细胞DNMT3a mRNA及蛋白表达降低、PARP-1 mRNA及蛋白水平升高(P<0.05);C组与B组相比上述指标差异无统计学意义(P>0.05);D组HSPC-1转染DNMT3a后,DNMT3a mRNA及蛋白水平较B组升高,PARP-1 mRNA及蛋白水平降低(P<0.05)。各组细胞转染DNMT3a后继续培养24 h, A组HSPC-1高密度生长,呈现的单核融合生长,B组及C组HSPC-1数目减少、生长缓慢;与B组和C组相比,D组细胞生长速度加快。MTT分析显示,B组各时间点HSPC-1细胞活力均明显低于A组(P<0.05),与C组比较无明显差异(P>0.05);转染24、48、72 h后D组细胞活力均明显高于B组(P<0.05)。B组细胞凋亡率明显高于A组(P<0.001),与C组无显著差异(P>0.05),D组细胞凋亡率明显低于B组(P<0.001)。结论:DNMT3a可能参与氢醌所致造血干细胞损伤过程,氢醌细胞损伤作用的发挥可能与DNMT3a表达受抑后对PARP-1活性的调节有关。 展开更多
关键词 造血干细胞 dnmt3a 氢醌 PARP-1 形态 凋亡
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TET2合并DNMT3A突变及其他共存基因突变对急性髓系白血病患者预后的影响 被引量:1
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作者 孔繁聪 齐凌 +3 位作者 黄文锋 喻敏 周玉兰 李菲 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2022年第21期1108-1114,共7页
目的:探究TET2合并DNMT3A突变及其他共存基因突变对成人非M3型急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者预后的影响。方法:回顾性分析2018年1月至2021年9月于南昌大学第一附属医院确诊的初治且行血液肿瘤相关突变基因外显子二代... 目的:探究TET2合并DNMT3A突变及其他共存基因突变对成人非M3型急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者预后的影响。方法:回顾性分析2018年1月至2021年9月于南昌大学第一附属医院确诊的初治且行血液肿瘤相关突变基因外显子二代测序检测的512例成人AML(非M3型)患者的临床资料,分析患者的临床特征、疗效及生存情况。结果:本研究共纳入110例AML患者,TET2突变组64例,DNMT3A单突变组46例。男性50例(45.5%),中位年龄54(15~79)岁。TET2基因突变频率为12.5%(64/512),98.4%(63/64)患者突变基因数≥2个,每例患者平均合并5.2个突变基因。NPM1(43.8%)、DNMT3A(42.2%)、FLT3-ITD/TKD(40.6%)、CEBPA(26.6%)、TTN(20.3%)为TET2突变常见的共存突变基因。TET2合并DNMT3A突变患者初次诱导完全缓解(complete response,CR)率为46.2%,略低于TET2单突变患者的76.9%(P=0.077),与DNMT3A单突变患者无显著性差异(P=0.952)。TET2合并DNMT3A突变患者的中位总生存(median overall survival,mOS)时间为9.5个月,明显低于TET2单突变患者(P=0.002),而与DNMT3A单突变患者无显著性差异(P=0.414)。三者的中位无复发生存(median relapse-free survival,mRFS)时间无显著性差异(P>0.05)。在TET2突变背景下,合并K/NRAS突变患者的CR率为28.6%,明显低于无K/NRAS突变患者的75.0%(P=0.030),合并FLT3-ITD突变患者的mOS明显短于无FLT3-ITD突变患者(P=0.030)。多因素分析显示年龄≥60岁、合并FLT3-ITD突变、初次诱导未达CR是影响TET2突变AML患者总生存时间(overall survival,OS)的独立危险因素,DNMT3A突变不影响TET2突变患者OS。结论:TET2突变是AML患者常见突变,且常合并共存基因突变。共存基因突变与TET2突变共同影响AML患者预后。基于二代测序的基因突变检测对指导AML精确分层及精准治疗具有重要意义。 展开更多
关键词 急性髓系白血病 TET2 dnmt3a 共存基因 突变 预后
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胃癌弱差异基因表达谱中DNMT3A基因表达和生物学作用的探讨 被引量:3
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作者 孙伟 耿排力 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 2008年第13期999-1002,共4页
目的:明确胃癌差异基因表达谱中弱差异表达基因的敏感性和特异性;探讨胃癌弱差异表达基因DNMT3A在胃癌发生发展中的生物学作用和意义。方法:利用半定量RT/PCR方法验证了胃癌弱差异基因表达谱中DNMT3A基因的表达水平,并利用GoMiner软件... 目的:明确胃癌差异基因表达谱中弱差异表达基因的敏感性和特异性;探讨胃癌弱差异表达基因DNMT3A在胃癌发生发展中的生物学作用和意义。方法:利用半定量RT/PCR方法验证了胃癌弱差异基因表达谱中DNMT3A基因的表达水平,并利用GoMiner软件研究了DNMT3A的生物学功能。结果:DNMT3A基因在胃癌组织中比癌旁正常组织表达微弱升高,基因表达变化倍数为1.13,与基因芯片的表达变化(1.10)一致;GoMin-er软件功能注释表明DNMT3A在甲基化和转录调控等方面具有重要生物学功能。结论:可以在实验室中利用分子生物学方法验证胃癌差异基因表达谱中的弱差异表达基因;弱差异表达基因DN-MT3A的异常表达与多种肿瘤的发生有密切的联系,并且可能在胃癌的发生发展中具有重要的生物学作用。 展开更多
关键词 胃肿瘤 基因表达谱 dnmt3a BAGEL
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转位蛋白基因在FLT3-ITD/DNMT3A R882双突变急性髓系白血病疗效评估中的价值 被引量:1
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作者 唐善浩 陆滢 +11 位作者 张丕胜 陈冬 刘旭辉 杜小红 曹俊杰 李双月 沙科娅 陈列光 庄贤栩 叶佩佩 林丽 裴仁治 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期45-49,共5页
目的:观察转位蛋白(TSPO)基因在FLT3-ITD/DNMT3A R882双突变急性髓系白血病(AML)疗效评估中的价值。方法:纳入2018年6月至2020年6月在宁波大学附属人民医院血液科住院治疗的初发AML患者76例,其中伴有FLT3-ITD突变34例,伴有DNMT3A R882突... 目的:观察转位蛋白(TSPO)基因在FLT3-ITD/DNMT3A R882双突变急性髓系白血病(AML)疗效评估中的价值。方法:纳入2018年6月至2020年6月在宁波大学附属人民医院血液科住院治疗的初发AML患者76例,其中伴有FLT3-ITD突变34例,伴有DNMT3A R882突变27例,伴有FLT3-ITD/DNMT3A R882双突变15例,对照组为同期住院治疗的免疫性血小板减少症(ITP)患者19例。骨髓穿刺留取骨髓3 ml,常规提取RNA,通过转录组测序方法检测TSPO基因的表达量(使用2^(-ΔΔCT)法计算)。结果:FLT3-ITD单突变组和DNMT3A R882单突变组初诊时TSPO基因表达量分别为2.02±1.04、1.85±0.76,均高于对照组的1.00±0.06,但比较差异无统计学意义(P=0.671,P=0.821);双突变组初诊时TSPO基因表达量为3.98±1.07,明显高于FLT3-ITD单突变组和DNMT3A R882单突变组(P=0.032,P=0.021);双突变组化疗后达到完全缓解的患者,达到完全缓解时的TSPO基因表达量为1.19±0.87,明显低于其初诊时的水平(P=0.011)。结论:TSPO基因或许可以作为评估FLT3-ITD/DNMT3A R882双突变AML治疗疗效的一个指标。 展开更多
关键词 转位蛋白基因 急性髓系白血病 FLT3-ITD dnmt3a R882
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急性髓系白血病中的DNMT3A基因突变研究 被引量:2
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作者 陈亚玫 鹿全意 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2011年第6期1556-1560,共5页
表观遗传学改变,包括DNA甲基化水平异常在肿瘤的发生、发展阶段起着重要作用。近期,多位研究者在急性髓系白血病(AML)患者中发现了DNA甲基转移酶3A(DNMT3A)基因突变可能与DNA甲基化水平异常有关。该基因突变比例为20%左右,形式多种多样... 表观遗传学改变,包括DNA甲基化水平异常在肿瘤的发生、发展阶段起着重要作用。近期,多位研究者在急性髓系白血病(AML)患者中发现了DNA甲基转移酶3A(DNMT3A)基因突变可能与DNA甲基化水平异常有关。该基因突变比例为20%左右,形式多种多样,以点突变为主,热点突变位于882位精氨酸。DNMT3A突变主要发生在大于60周岁的AML-M4、M5亚型中的危核型患者,预后均较差。有学者在骨髓异常增生综合症(MDS)和原发性骨髓纤维化(PMF)的患者中也发现有该基因突变,表明DNMT3A突变已先于白血病阶段存在,并提出从表观遗传学改变研究白血病发病机制的观点。然而,目前尚缺大样本调查以明确DNMT3A突变能否成为微小残留病(MRD)检测的分子标记物及能否成为药物作用的新靶点,因此对上述问题尚需进一步探讨。本文总结了近年来DNMT3A基因突变的研究进展,并作一综述。 展开更多
关键词 dnmt3a基因 表现遗传学 DNA甲基化 急性髓系白血病
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年龄因素对小鼠肺纤维化模型中DNMT3a DNMT3b及CDH1表达的影响 被引量:1
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作者 袁耀 钱力 《中国药物与临床》 CAS 2018年第10期1684-1685,共2页
特发性肺纤维化(IPF)是一类原因未明的慢性进展性间质性肺疾病。目前,DNA甲基化通过调控IPF中关键基因的表达而对IPF的发生发展起重要作用,已经成为研究IPF的分子机制、临床诊断与治疗的新方向。DNA甲基化通过DNA甲基转移酶(DNMT)催... 特发性肺纤维化(IPF)是一类原因未明的慢性进展性间质性肺疾病。目前,DNA甲基化通过调控IPF中关键基因的表达而对IPF的发生发展起重要作用,已经成为研究IPF的分子机制、临床诊断与治疗的新方向。DNA甲基化通过DNA甲基转移酶(DNMT)催化,DNMT3a和DNMT3b主要催化重新甲基化作用。DNMT3a、DNMT3b也被认为是DNA甲基化的关键限速因子[1]。 展开更多
关键词 肺纤维化 dnmt3a DNMT3B IPF 年龄因素
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地西他滨治疗伴有DNMT3A基因突变的骨髓增生异常综合征的临床研究 被引量:2
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作者 彭丽萍 《中国当代医药》 2017年第33期45-47,共3页
目的观察伴有DNMT3A基因突变与不伴有DNMT3A基因突变的MDS患者应用地西他滨治疗的效果。方法将2013年1月~2017年6月于我院接受治疗的20例伴有DNMT3A基因突变的MDS患者作为研究组,抽取同期接受治疗但不存在DNMT3A基因突变的20例MDS患者... 目的观察伴有DNMT3A基因突变与不伴有DNMT3A基因突变的MDS患者应用地西他滨治疗的效果。方法将2013年1月~2017年6月于我院接受治疗的20例伴有DNMT3A基因突变的MDS患者作为研究组,抽取同期接受治疗但不存在DNMT3A基因突变的20例MDS患者作为对照组,均接受地西他滨治疗,观察两组患者接受地西他滨治疗后的病情改善情况。结果研究组的临床总有效率(65%)显著高于对照组(35%),差异有统计学意义(P<0.05)。研究组患者治疗前的DNMT3A基因表达显著高于对照组(P<0.05),经过治疗后研究组的DNMT3A基因表达显著下降(P<0.05)。两组患者的药物不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论地西他滨用于伴有DNMT3A基因突变的MDS患者治疗,可以取得较好的治疗效果,针对伴有DNMT3A基因突变的MDS患者可优先选择地西他滨进行治疗。 展开更多
关键词 dnmt3a基因突变 骨髓增生异常综合征 地西他滨 去甲基化药物
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DNMT3a基因突变与成人原发急性髓系白血病患者初诊时外周血象水平关系的Meta分析
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作者 沈克锋 阴常欣 +3 位作者 叶艳艳 江千里 袁乐中 陆洋 《中国循证医学杂志》 CSCD 2014年第2期225-230,共6页
目的系统评价DNMT3a基因突变与成人原发急性髓系白血病(AML)患者初诊时外周血象水平的关系。方法计算机检索PubMed、ScienceDirect、EBSCO、Web of Science、CNKI、VIP和WanFang Data数据库,纳入国内外公开发表的研究DNMT3a与成人原发AM... 目的系统评价DNMT3a基因突变与成人原发急性髓系白血病(AML)患者初诊时外周血象水平的关系。方法计算机检索PubMed、ScienceDirect、EBSCO、Web of Science、CNKI、VIP和WanFang Data数据库,纳入国内外公开发表的研究DNMT3a与成人原发AML患者初诊时外周血象水平相关性的病例-对照研究,检索年限均为从建库至2012年12月30日。由2位研究者根据纳入与排除标准独立筛选文献、提取资料并评价质量后,采用RevMan 5.2软件进行Meta分析。结果共纳入10个研究,合计2704例患者。Meta分析结果显示:成人原发AML患者DNMT3a突变组初诊时的外周血WBC、HGB、PLT数值均较DNMT3a未突变组高,差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论成人原发AML患者中DNMT3a突变组初诊时的外周血象水平较DNMT3a未突变组高,这有助于我们更好地理解DNMT3a基因在AML发生发展中的作用。 展开更多
关键词 dnmt3a基因突变 成人原发急性髓系白血病 外周血象 META分析 病例一对照研究
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新生儿缺氧缺血性脑病患儿血清DNMT1、DNMT3a和BDNF检测对预后评估的临床价值
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作者 颜海峰 霍开明 +1 位作者 吴小红 周家仍 《四川医学》 CAS 2024年第8期886-890,共5页
目的探讨血清DNA甲基化转移酶(DNMT)1、DNMT3a和脑源性神经营养因子(BDNF)检测在新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)患儿预后评估中的价值。方法选取2016年1月至2023年1月在我院诊治的84例新生儿HIE患儿为观察组,并选取同期84例于我院出生的健... 目的探讨血清DNA甲基化转移酶(DNMT)1、DNMT3a和脑源性神经营养因子(BDNF)检测在新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)患儿预后评估中的价值。方法选取2016年1月至2023年1月在我院诊治的84例新生儿HIE患儿为观察组,并选取同期84例于我院出生的健康新生儿为对照组。根据患儿病情程度分为轻度组36例、中度组28例、重度组20例。采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清DNMT1、DNMT3a和BDNF水平;多因素Logistic回归分析新生儿HIE患儿预后的影响因素;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清DNMT1、DNMT3a和BDNF水平对新生儿HIE患儿预后的预测价值。结果与对照组相比,轻度、中度、重度组新生儿HIE患儿血清DNMT1、DNMT3a水平依次升高(P<0.05),BDNF水平依次降低(P<0.05);与预后良好组相比,预后不良组新生儿HIE患儿血清DNMT1、DNMT3a水平升高(P<0.05),BDNF水平降低(P<0.05);多因素Logistic回归分析发现,病情程度、DNMT1、DNMT3a是影响新生儿HIE患儿预后的危险因素(P<0.05),新生儿Apgar评分、BDNF是影响患儿预后的保护因素(P<0.05);血清DNMT1、DNMT3a、BDNF联合检测预测新生儿HIE患儿预后的ROC曲线下面积(AUC)为0.955,均优于其各自单独预测(Z_(联合检测-DNMT1)=2.046,P=0.020;Z_(联合检测-DNMT3a)=3.046,P=0.001;Z_(联合检测-BDNF)=2.073,P=0.019)。结论新生儿HIE患儿血清DNMT1、DNMT3a水平升高,BDNF水平降低,在新生儿HIE患儿预后评估中具有一定价值。 展开更多
关键词 新生儿缺氧缺血性脑病 DNMT1 dnmt3a BDNF 预后
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