Dmrt(Double sex and Mab-3 related transcription factor)基因是一类含有高度保守的DM(Double sex and Mab-3)结构域的基因家族,该基因家族的很多成员都参与了性别决定和分化过程的调控。目前已研究了很多物种的Dmrt基因,但对于具有...Dmrt(Double sex and Mab-3 related transcription factor)基因是一类含有高度保守的DM(Double sex and Mab-3)结构域的基因家族,该基因家族的很多成员都参与了性别决定和分化过程的调控。目前已研究了很多物种的Dmrt基因,但对于具有重要进化地位和经济价值的贝类,却鲜见相关报道。Dmrt5作为Dmrt基因家族的重要成员,是否也参与了动物的性别决定与分化的调控,至今为止没有定论。采用RACE-PCR技术,从马氏珠母贝(Pinctadamatensii,Dunker)精巢的SMARTcDNA中克隆了Dmrt5基因的全长cDNA序列。同源性比对显示,pmDmrt5编码的氨基酸序列与海胆、线虫、青鳉、斑马鱼、爪蟾和小鼠的Dmrt5基因的一致性分别为17.2%、26.7%、24.8%、18.7%、20.8%和15.8%。虽然各个物种间同源性并不高,但他们的DM结构域是高度保守的。RT-PCR结果表明,pmDm-rt5基因在雄性性腺中的表达量显著高于鳃、外套膜、闭壳肌、消化盲囊和雌性性腺;在早期雄性性腺、成熟期雄性性腺中的表达量显著高于性腺发育其他时期。这意味着pmDmrt5基因可能参与了马氏珠母贝性别发育的调控。展开更多
为深入研究黄鳝Dmrt1基因5′端侧翼序列在性别决定与分化中细胞通路之间的转录调控作用。本研究以黄鳝基因组DNA为模板,PCR扩增出Dmrt1基因5′端侧翼序列,并对该序列进行了生物信息学分析,然后将克隆获得的Dmrt1基因5′端侧翼序列构建到...为深入研究黄鳝Dmrt1基因5′端侧翼序列在性别决定与分化中细胞通路之间的转录调控作用。本研究以黄鳝基因组DNA为模板,PCR扩增出Dmrt1基因5′端侧翼序列,并对该序列进行了生物信息学分析,然后将克隆获得的Dmrt1基因5′端侧翼序列构建到PGL3-enhancer载体中,命名为pGL3-enhancer-Dmrt1,最后将pGL3-enhancer-Dmrt1和内参质粒pRL-TK共转染至HEK293细胞,采用双荧光素酶检测系统对Dmrt1基因5′端侧翼的启动活性进行了检测。实验结果显示:克隆获得的Dmrt1基因5′端侧翼序列为1519 bp;利用TESS-Transcription Element Search System转录因子结合位点在线预测数据库对黄鳝Dmrt1基因5′端侧翼序列进行预测分析结果表明,该序列存在AP-1、Oct-1、C/EBPa和GATAx等真核生物通用的转录因子结合位点以及与性别相关基因的蛋白结合位点,如SRY、Sox3和Sox5等;双荧光素酶检测结果显示,该5′端侧翼序列具有启动活性。展开更多
文摘Dmrt(Double sex and Mab-3 related transcription factor)基因是一类含有高度保守的DM(Double sex and Mab-3)结构域的基因家族,该基因家族的很多成员都参与了性别决定和分化过程的调控。目前已研究了很多物种的Dmrt基因,但对于具有重要进化地位和经济价值的贝类,却鲜见相关报道。Dmrt5作为Dmrt基因家族的重要成员,是否也参与了动物的性别决定与分化的调控,至今为止没有定论。采用RACE-PCR技术,从马氏珠母贝(Pinctadamatensii,Dunker)精巢的SMARTcDNA中克隆了Dmrt5基因的全长cDNA序列。同源性比对显示,pmDmrt5编码的氨基酸序列与海胆、线虫、青鳉、斑马鱼、爪蟾和小鼠的Dmrt5基因的一致性分别为17.2%、26.7%、24.8%、18.7%、20.8%和15.8%。虽然各个物种间同源性并不高,但他们的DM结构域是高度保守的。RT-PCR结果表明,pmDm-rt5基因在雄性性腺中的表达量显著高于鳃、外套膜、闭壳肌、消化盲囊和雌性性腺;在早期雄性性腺、成熟期雄性性腺中的表达量显著高于性腺发育其他时期。这意味着pmDmrt5基因可能参与了马氏珠母贝性别发育的调控。
文摘为深入研究黄鳝Dmrt1基因5′端侧翼序列在性别决定与分化中细胞通路之间的转录调控作用。本研究以黄鳝基因组DNA为模板,PCR扩增出Dmrt1基因5′端侧翼序列,并对该序列进行了生物信息学分析,然后将克隆获得的Dmrt1基因5′端侧翼序列构建到PGL3-enhancer载体中,命名为pGL3-enhancer-Dmrt1,最后将pGL3-enhancer-Dmrt1和内参质粒pRL-TK共转染至HEK293细胞,采用双荧光素酶检测系统对Dmrt1基因5′端侧翼的启动活性进行了检测。实验结果显示:克隆获得的Dmrt1基因5′端侧翼序列为1519 bp;利用TESS-Transcription Element Search System转录因子结合位点在线预测数据库对黄鳝Dmrt1基因5′端侧翼序列进行预测分析结果表明,该序列存在AP-1、Oct-1、C/EBPa和GATAx等真核生物通用的转录因子结合位点以及与性别相关基因的蛋白结合位点,如SRY、Sox3和Sox5等;双荧光素酶检测结果显示,该5′端侧翼序列具有启动活性。
