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利用CRISPR/Cas9技术编辑DTH8基因改良水稻99-25的抽穗期 被引量:3
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作者 张浩 柳絮 +4 位作者 宣宁 张华 高瑞钰 赵倩倩 姚方印 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2020年第6期58-66,共9页
CRISPR/Cas9基因编辑技术已经成为水稻育种的重要手段。为培育早熟、丰产、优质的种质资源,以农艺性状优良、迟熟粳稻品种香糯99-25为试验材料,构建了CRISPR/Cas9双靶点表达载体对抽穗期基因DTH8进行编辑,采用农杆菌介导法将构建好的表... CRISPR/Cas9基因编辑技术已经成为水稻育种的重要手段。为培育早熟、丰产、优质的种质资源,以农艺性状优良、迟熟粳稻品种香糯99-25为试验材料,构建了CRISPR/Cas9双靶点表达载体对抽穗期基因DTH8进行编辑,采用农杆菌介导法将构建好的表达载体转化农杆菌EHA105。用携带重组质粒的农杆菌菌液侵染水稻愈伤组织,成功获得了30株T_(0)转基因苗。对T_(0)植株利用潮霉素特异引物进行分子检测,其中阳性植株29株,阳性率高达96.7%。设计特异性引物对29株阳性苗的靶位点上下游600 bp进行PCR扩增测序,结果表明,7株转基因阳性苗在第2个靶点附近发生了碱基替换或插入突变。对这7株突变株系的抽穗期进行调查,发现DTH8-2、DTH8-5、DTH8-9、DTH8-10、DTH8-17、DTH8-21的抽穗期提前。利用实时荧光定量PCR检测发现DTH8-2、DTH8-9、DTH8-17与香糯99-25相比DTH8基因表达显著降低。成功利用CRISPR/Cas9基因编辑技术对香糯99-25的DTH8基因进行了编辑,获得了抽穗期提前的DTH8突变体材料,为培育早熟、丰产、优质的水稻品种提供了种质资源。 展开更多
关键词 水稻 抽穗期 基因编辑 dth8 CRSPR/Cas9
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The DTH8-Hd1 Module Mediates Day-Length-Dependent Regulation of Rice Flowering 被引量:30
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作者 Anping Dul Wei Tian +6 位作者 Menghao Wei Wei Yan Hang He Da Zhou Xi Huang Shigui Li Xinhao Ouyang 《Molecular Plant》 SCIE CAS CSCD 2017年第7期948-961,共14页
Photoperiodic flowering is one of the most important pathways to govern flowering in rice (Oryza sativa), in which Heading date 1 (Hdl), an ortholog of the Arabidopsis CONSTANS gene, encodes a pivotal regulator. H... Photoperiodic flowering is one of the most important pathways to govern flowering in rice (Oryza sativa), in which Heading date 1 (Hdl), an ortholog of the Arabidopsis CONSTANS gene, encodes a pivotal regulator. Hdl promotes flowering under short-day conditions (SD) but represses flowering under long-day conditions (LD) by regulating the expression of Heading date 3a (Hd3a), the FLOWERING LOCUS T (FT) ortholog in rice. However, the molecular mechanism of how Hdl changes its regulatory activity in response to day length remains largely unknown. In this study, we demonstrated that the repression of flowering in LD by Hdl is dependent on the transcription factor DAYS TO HEADING 8 (DTHS). Loss of DTH8 function results in the activation of Hd3a by Hdl, leading to early flowering. We found that Hdl directly interacts with DTH8 and that the formation of the DTH8-Hd1 complex is necessary for the transcriptional repression of Hd3a by Hdl in LD, implicating that the switch of Hdl function is mediated by DTH8 in LD rather than in SD. Furthermore, we revealed that DTH8 associates with the Hd3a promoter to modulate the level of H3K27 trimethylation (H3K27me3) at the Hd3a locus. In the presence of the DTH8-Hdl complex, the H3K27me3 level was increased at Hd3a, whereas loss of DTH8 function resulted in decreased H3K27me3 level at Hd3a. Taken together, our findings indicate that, in response to day length, DTH8 plays a critical role in mediating the transcriptional regulation of Hd3a by Hdl through the DTH8-Hd1 module to shape epigenetic modifications in photoperiodic flowering. 展开更多
关键词 RICE FLOWERING Hd1 dth8
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利用CRISPR/Cas9技术改良南粳46抽穗期
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作者 陈伟 叶元妹 +4 位作者 赵剑华 冯志明 陈宗祥 胡珂鸣 左示敏 《中国水稻科学》 北大核心 2025年第6期760-770,共11页
【目的】抽穗期是决定水稻品种种植区域和生态适应性的关键农艺性状。本研究通过对优良食味中熟晚粳品种南粳46(简称NJ46)的抽穗期基因进行编辑,以缩短NJ46的生育期,扩大其种植区域。【方法】利用CRISPR/Cas9技术,以DTH8和Ghd2为靶基因... 【目的】抽穗期是决定水稻品种种植区域和生态适应性的关键农艺性状。本研究通过对优良食味中熟晚粳品种南粳46(简称NJ46)的抽穗期基因进行编辑,以缩短NJ46的生育期,扩大其种植区域。【方法】利用CRISPR/Cas9技术,以DTH8和Ghd2为靶基因,构建pCAMBIA1305-Actin:Cas9-sgRNADTH8与pCAMBIA1305-Actin:Cas9-sgRNAGhd2编辑载体,用农杆菌介导的植物转化方法转化NJ46,筛选不含外源成分的纯合编辑系,并考察其抽穗期、农艺性状及品质相关性状。【结果】对DTH8的编辑获得了3个比NJ46抽穗期提早22~36 d的无外源成分纯合突变系(NJ46-dth8-1~-3),对Ghd2的编辑获得了3个比NJ46抽穗期提早14~15 d的无外源成分纯合突变系(NJ46-ghd2-1~-3)。分别在苏中和苏北测定了各基因纯合突变系的抽穗期、主要农艺性状及品质性状,与相应生态区推广品种南粳9108、南粳518进行比较,发现NJ46-ghd2-1单株产量显著高于南粳9108,但抽穗期和品质与之相当,好于另外2个敲除系;NJ46-dth8-1与南粳518在单株产量、主要品质性状上均无显著差异,好于另外2个敲除系。【结论】定向编辑南粳46中的DTH8和Ghd2基因,获得适宜苏北和苏中生态区种植的优良食味粳稻新种质,有助于扩大优良食味水稻品种的推广种植区域。 展开更多
关键词 水稻 CRISPR/Cas9 基因编辑 抽穗期 dth8 Ghd2
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普通野生稻早抽穗基因OsEHD8的鉴定与进化分析
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作者 鄢柳慧 钟琦 +8 位作者 马增凤 韦敏益 刘驰 秦媛媛 周小龙 黄大辉 卢颖萍 秦钢 张月雄 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第14期2703-2716,I0001-I0010,共24页
【目的】抽穗期是影响水稻(Oryza sativa L.)区域适应性和产量的关键性状。鉴定早抽穗期基因对于丰富和完善水稻抽穗期调控网络,为品种适应性改良提供重要信息。【方法】以早抽穗的染色体片段代换系CL33和晚抽穗的受体亲本93-11为研究材... 【目的】抽穗期是影响水稻(Oryza sativa L.)区域适应性和产量的关键性状。鉴定早抽穗期基因对于丰富和完善水稻抽穗期调控网络,为品种适应性改良提供重要信息。【方法】以早抽穗的染色体片段代换系CL33和晚抽穗的受体亲本93-11为研究材料,对其主要农艺性状进行调查分析;构建2个极早抽穗和极晚抽穗的DNA混合池;对其进行全基因组重测序和BSA-Seq分析定位抽穗期关联的区域,开发该区域内InDel标记进行精细定位,对定位区间进行基因预测和候选基因分析,确定LOC_Os08g07740为目标候选基因;随后对该基因进行克隆和等位基因分析。此外,还利用生物信息学软件对LOC_Os08g07740上下游约40 kb范围内的基因组数据进行分析,确定该基因在Indica、Japonica和O.rufipogon 3个水稻亚群间的遗传和系统进化关系。【结果】在南宁自然长日照和自然短日照条件下,CL33的抽穗期均比受体亲本93-11短20—25 d;此外,在自然长日照条件下,CL33植株除了穗长变短和每穗粒数减少之外,其他农艺性状与93-11无显著差异。遗传分析表明,CL33早抽穗性状受1对隐性基因控制。该基因被精细定位于水稻第8染色体短臂PSM8-6与PSM8-8标记间约100 kb区间内,该区域内有15个预测的候选基因。其中,ORF13(LOC_Os08g07740)与已知抽穗期基因DTH8/Ghd8等位;通过对ORF13基因的测序及序列比对,该基因全长888 bp,无内含子,编码295个氨基酸;与受体亲本93-11相比,CL33中的LOC_Os08g07740在第535—536位碱基和第820—821位碱基之间分别有6 bp的插入和9 bp的缺失,导致编码的氨基酸序列改变。因此,确定其为目标候选基因,暂命名为Os EHD8。进化分析表明,LOC_Os08g07740内,相较于O.rufipogon,Indica和Japonica的遗传多样性显著下降,其中,Indica减少了62.53%,Japonica减少了53.76%,而Indica和Japonica之间的差异不显著。该基因共有13个单倍型,其中Hap_2单倍型可能是3个亚群共同的祖先,不同的单倍型可能由于地理隔离或环境差异被分别固定在Indica和Japonica亚群内,以上结果表明,LOC_Os08g07740在3个亚群中经历了定向选择。【结论】Os EHD8是DTH8/Ghd8的功能性等位基因,在自然长日照和短日照条件下均促进水稻提前抽穗。此外,携带Os EHD8的染色体片段代换系CL33在自然长日照条件下,除了穗长变短和每穗粒数减少之外,其他农艺性状与受体亲本93-11均无显著差异。 展开更多
关键词 水稻 抽穗期 dth8/Ghd8 BSA-seq 进化
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