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DPF2基因RNA干扰对人胰腺癌细胞PANC-1增殖、凋亡和细胞周期的作用研究 被引量：8
1
作者 刘超 孙如玉 +2 位作者 黄健 刘丽华 方圣云 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期647-653,共7页
目的已知DPF2参与白血病以及肿瘤的发生,但是DPF2是否参与胰腺癌发生和进展还不清楚,因此观察了DPF2基因RNA干扰对胰腺癌细胞系PANC-1细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法采用慢病毒介导的DPF2基因RNA干扰敲低PANC-1细胞的DPF2表达,... 目的已知DPF2参与白血病以及肿瘤的发生,但是DPF2是否参与胰腺癌发生和进展还不清楚,因此观察了DPF2基因RNA干扰对胰腺癌细胞系PANC-1细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法采用慢病毒介导的DPF2基因RNA干扰敲低PANC-1细胞的DPF2表达,通过克隆形成实验和MTT实验检测DPF2基因RNA干扰对PANC-1细胞增殖的作用,通过流式细胞术检测DPF2基因RNA干扰对PANC-1细胞凋亡和细胞周期的作用。结果慢病毒介导的DPF2基因RNA干扰中剂量和高剂量(2μL和4μL)使PANC-1细胞的DPF2表达明显降低。与阴性对照组比较,DPF2基因RNA干扰明显抑制PANC-1细胞活力和克隆形成,还促进PANC-1的凋亡。此外,DPF2基因RNA干扰引起细胞周期的S期阻滞,明显减少G2/M周期的细胞数量。结论 DPF2可能参与胰腺癌细胞PANC-1的增殖、凋亡过程和细胞周期的调控,通过慢病毒介导的DPF2基因RNA干扰敲低DPF2蛋白表达,可能为寻找潜在的抗胰腺癌的新方法提供实验依据。 展开更多
关键词 dpf2 RNA干扰 慢病毒 PANC-1 增殖 凋亡 细胞周期
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利用改良的CRISPR/Cas9n double nick系统构建DPF2基因敲除的人胰腺癌PANC-1细胞株
2
作者 黄卫东 张文胜 +1 位作者 陈一帆 郭嘉义 《宁夏医科大学学报》 2023年第12期1189-1193,共5页
目的利用改良的CRISPR/Cas9n double nick系统构建DPF2基因敲除的PANC-1人胰腺癌细胞模型。方法设计两对靶向DPF2基因第四外显子上下游的单链向导RNA(single guide RNA,sgRNA),化学合成sgRNA寡核苷酸序列,并克隆至pGL3-U6-sgRNA-PGK-pur... 目的利用改良的CRISPR/Cas9n double nick系统构建DPF2基因敲除的PANC-1人胰腺癌细胞模型。方法设计两对靶向DPF2基因第四外显子上下游的单链向导RNA(single guide RNA,sgRNA),化学合成sgRNA寡核苷酸序列,并克隆至pGL3-U6-sgRNA-PGK-puromycin真核表达质粒中。将克隆正确的DPF2-sgRNA重组真核表达质粒与Cas9真核表达载体pST1374-N-NLS-flag-linker-Cas9共转染至PANC-1细胞中,通过嘌呤霉素和杀稻瘟菌素筛选阳性转染细胞,进一步通过有限稀释法筛选获得单克隆细胞株。提取细胞基因组DNA对敲除位点进行聚合酶链反应(PCR)鉴定和测序鉴定。Western blot检测细胞中DPF2蛋白表达情况。结果sgRNA成功插入pGL3-U6-sgRNA-PGK-puromycin中且序列正确。PCR扩增鉴定和测序结果表明,PANC-1细胞中一段包括完整第四外显子在内的长度为401 bp的DPF2基因片段被敲除。Western blot检测结果表明,DPF2基因敲除细胞中的DPF2蛋白表达缺失。结论通过改良的CRISPR/Cas9n double nick基因编辑系统成功构建DPF2基因敲除PANC-1稳定细胞株。 展开更多
关键词 dpf2基因 CRISPR/Cas9n double nike系统 基因敲除 PANC-1细胞株
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DPF2基因研究进展
3
作者 刘静 奎翔 +3 位作者 郭敏敏 欧志燕 何青晏 王燕 《四川医学》 CAS 2023年第11期1221-1224,共4页
开关/蔗糖-非发酵(switch/sucrose non-fermentable,SWI/SNF)复合体,在哺乳动物中也称为BAF复合体,是腺嘌呤核苷三磷酸(adenosine triphosphate,ATP)依赖性染色质重塑复合物超家族的一个亚家族。BAF45是BAF复合体的组成成员,包括BAF45B(... 开关/蔗糖-非发酵(switch/sucrose non-fermentable,SWI/SNF)复合体,在哺乳动物中也称为BAF复合体,是腺嘌呤核苷三磷酸(adenosine triphosphate,ATP)依赖性染色质重塑复合物超家族的一个亚家族。BAF45是BAF复合体的组成成员,包括BAF45B(DPF1)、BAF45C(DPF3)、BAF45D(DPF2)以及一个远亲蛋白BAF45A(PHF10)[1]。 展开更多
关键词 dpf2 SWI/SNF染色质重塑复合物 恶性肿瘤 非肿瘤性疾病 生物学标志
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DPF2干扰慢病毒感染人胚胎干细胞建立稳定细胞系
4
作者 张涤娟 刘超 《齐齐哈尔医学院学报》 2021年第11期932-935,共4页
目的对DPF2干扰慢病毒感染H9细胞,获得稳定的人胚胎干细胞克隆细胞系的方法学探讨。方法将各型带有GFP荧光标签的DPF2-RNAi慢病毒导入H9细胞中,嘌呤霉素筛选前后,相差和荧光显微镜下观察细胞形态和细胞感染效率;Western blot鉴定感染后... 目的对DPF2干扰慢病毒感染H9细胞,获得稳定的人胚胎干细胞克隆细胞系的方法学探讨。方法将各型带有GFP荧光标签的DPF2-RNAi慢病毒导入H9细胞中,嘌呤霉素筛选前后,相差和荧光显微镜下观察细胞形态和细胞感染效率;Western blot鉴定感染后的各组H9细胞系内DPF2蛋白表达水平。结果成功获得慢病毒感染后的H9稳定细胞系,成功筛选出#25540 DPF2-RNAi慢病毒,其沉默或敲低H9细胞的效率更高,稳定性更好。结论应用携带DPF2-RNAi的慢病毒感染人胚胎干细胞,使目标基因沉默,探索建立稳定细胞系的方法,为进一步研究提供细胞模型。 展开更多
关键词 H9细胞 慢病毒 dpf2-RNAi 稳定细胞系
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