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在多基因PCR中对dNTP与Mg^(2+)的浓度关系的研究 被引量:14
1
作者 吴爱军 王红 俞守义 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期109-111,共3页
目的 通过实验介绍在单一浓度下的Mg2 + 与在不同浓度情况下的dNTP及在单一浓度下的dNTP与在不同浓度下的Mg2 + 进行多基因PCR的反应过程。方法 通过多基因PCR分析比较Mg2 + 和dNTP在不同浓度下的反应结果。结果 PCR反应在 10×P... 目的 通过实验介绍在单一浓度下的Mg2 + 与在不同浓度情况下的dNTP及在单一浓度下的dNTP与在不同浓度下的Mg2 + 进行多基因PCR的反应过程。方法 通过多基因PCR分析比较Mg2 + 和dNTP在不同浓度下的反应结果。结果 PCR反应在 10×PCRBuffer为 0 0 2mol/LMg2 + 浓度时 ,随着dNTP浓度的增大 ,PCR反应增强 ,特别是较大片段PCR产物反映更为明显。但随着dNTP浓度的继续增大 ,PCR反应抑制 ,扩增条带度减弱 ,直至条带完全消失。而在0 0 0 2mmol/LdNTP浓度下 ,随着Mg2 + 浓度的不断增大 ,反应逐渐增强。但随着Mg2 + 浓度的继续增大 ,扩增条带亮度有减弱趋势。结论 在Mg2 + 单一浓度下 ,较大浓度dNTP有增强条带亮度的作用 ;在dNTP单一浓度下 ,过高的Mg2 + 浓度能抑制反应。 展开更多
关键词 dntp MG^2+ 多基因 PCR
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端粒酶活性检测方法的改进及dNTP浓度对端粒酶活性的影响 被引量:5
2
作者 吴东林 张玉静 +2 位作者 李鹏 陈守义 阮承迈 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期585-586,共2页
利用重新设计的引物和反应步骤 ,对检测端粒酶活性的 TRAP反应进行了改进。与原有方法相比 ,新方法在PCR扩增过程中不改变端粒酶产物的长度和比例 ,能更准确地反映端粒酶反应产物的性质。利用这个方法 ,考察了d NTP浓度对端粒酶的影响 ... 利用重新设计的引物和反应步骤 ,对检测端粒酶活性的 TRAP反应进行了改进。与原有方法相比 ,新方法在PCR扩增过程中不改变端粒酶产物的长度和比例 ,能更准确地反映端粒酶反应产物的性质。利用这个方法 ,考察了d NTP浓度对端粒酶的影响 ,发现不同的脱氧核苷酸对端粒酶活性的影响有差异。 展开更多
关键词 酶活性 检测方法 dntp浓度 端粒酶 进行性 TRAP反应 改进方法
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dNTP库与细胞转化间关系的研究 被引量:1
3
作者 雷海新 李忠生 +2 位作者 谢大英 刘秉慈 方福德 《卫生研究》 CAS CSCD 北大核心 1998年第2期73-76,80,共5页
采用反相HPLC法定量测定了BALB/c3T3细胞经烷化突变剂甲基丙烯酸环氧丙酯(GMA)和N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)转化处理后胞内脱氧核糖核苷三磷酸含量(dNTP库)的变化及最终形成的Ⅲ型转化细... 采用反相HPLC法定量测定了BALB/c3T3细胞经烷化突变剂甲基丙烯酸环氧丙酯(GMA)和N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)转化处理后胞内脱氧核糖核苷三磷酸含量(dNTP库)的变化及最终形成的Ⅲ型转化细胞中的dNTP库,发现转化处理后dNTP库的变化规律相似:均表现为脱氧嘌呤核苷三磷酸库与脱氧嘧啶核苷三磷酸库间差距明显扩大;转化细胞中dNTP库也明显异于正常细胞,提示dNTP库可能在细胞转化进程中起着重要作用。 展开更多
关键词 dntp 细胞转化 GMA 烷化剂 MNNG
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细胞dNTP库的稳态维持与基因组稳定性
4
作者 刘聪 冯佳妮 +4 位作者 李玮玮 朱伟伟 薛云新 王岱 赵西林 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期96-106,共11页
作为DNA合成的重要前体,细胞中4种脱氧核糖核苷三磷酸(dATP、dTTP、dGTP和dCTP)是DNA复制、重组和修复所必需的原材料,而DNA的正确合成及其完整性则是基因组稳定性的重要体现,因此dNTP库状态的稳定对维持基因组的稳定进而保证细胞的稳... 作为DNA合成的重要前体,细胞中4种脱氧核糖核苷三磷酸(dATP、dTTP、dGTP和dCTP)是DNA复制、重组和修复所必需的原材料,而DNA的正确合成及其完整性则是基因组稳定性的重要体现,因此dNTP库状态的稳定对维持基因组的稳定进而保证细胞的稳定至关重要。从dNTP库的质量上讲,一些异质dNTP如氧化的dNTP掺入DNA容易引发碱基替换甚至DNA断裂重排,会极大地损害基因组的稳定性。但与此同时,细胞也进化出了相应的NTP焦磷酸酶将其清除,并且细胞也会通过形成DNA损伤修复网络来校正损伤的DNA及修复DNA缺口。从dNTP库的数量上讲,dNTP的浓度及比例失衡也会造成碱基突变和移码突变,这同样会引发基因组不的稳定性,由此细胞进化出了庞大的酶控网络以对其进行精密调控。本文主要综述细胞内dNTP库组分受损的潜在危害及受损dNTP的清除和dNTP库组分间平衡的调控及失衡的后果,最后介绍了与dNTP库稳态相关的临床疾病,旨在为细胞dNTP库的稳态维持与基因组稳定性的相关性研究提供一定的思路方向,最终为相关疾病的治疗提供部分理论依据。 展开更多
关键词 dntp 质量控制 数量调控 基因组稳定性 临床疾病
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Role of Deoxyribonucleoside Triphosphates(dNTPs)in Cell Transformation 被引量:1
5
作者 LEI HAI-XIN LI ZHONG-SHENG +1 位作者 XIE DA-YING LIU BING-CI AND FANG FU-DE (Institute of Basic Medical Sciences,Chinese Academy of Medical Sciences,Bniing 100005, China) (Institute of Occupotional Medicine, Chinese Academy of Preventive Medicine, Beijing 100050 《Biomedical and Environmental Sciences》 SCIE CAS CSCD 1998年第4期354-362,共9页
Deoxyribenucleoside triphosphate (dNTP) pools were measured in normal BALB/c3T3 cells, transformation-treated cells and transformed cells with reverse-phase HPLC. The fluctuation of dNTP pools was similar after transf... Deoxyribenucleoside triphosphate (dNTP) pools were measured in normal BALB/c3T3 cells, transformation-treated cells and transformed cells with reverse-phase HPLC. The fluctuation of dNTP pools was similar after transformation treatment with alkylating mutagen glycidyl methacrylate(GMA) or Nmethyl- N'- nitro N- nitrosoguanidine (MNNG ). However,the gap between deoxyguanosine triphosphate + deoxyadenosine triphosphate (dGTP + dATP) pools and deoxythymidine triphosphate + deoxycytidine triphosphate (dTTP + dCTP) pools was greatly intensified. The measurements also indicated that the dNTP pools in transformed cells were quite different from those in normal cells. The results suggested that dNTP pools may play an important role in cell transformation 展开更多
关键词 CELL CELL dntps)in Cell Transformation Role of Deoxyribonucleoside Triphosphates
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Role of dNTPs in Mutagenesis
6
作者 LEI HAI-XIN LI ZHONG-SHENG +2 位作者 XIE DA-YING LIU BING-CI ZUO JIN AND FANG FU-DE (Institute of Basic Medical Sciences, Chinese Academy of Medical Sciences (CAMS), Beijing 100005, China) (Institute of Occupotional Medicine, Chinese Academy of Preventive Me 《Biomedical and Environmental Sciences》 SCIE CAS CSCD 1998年第4期345-353,共9页
The induced mutation frequency by alkylating mutagen glycldyl methacrylate (GMA) and N-methyl-N'- nitro- N-nitrosoguanidine (MNNG) was investigated with or without perturbation of deoxyribenucleoside triphosphate ... The induced mutation frequency by alkylating mutagen glycldyl methacrylate (GMA) and N-methyl-N'- nitro- N-nitrosoguanidine (MNNG) was investigated with or without perturbation of deoxyribenucleoside triphosphate (dNTP)pools; the influence of short treatment at different concentrations of GMA or MNNG on dNTP pools was also explored. The results indicated that the induced mutation frequency increased greatly at high dosages of mutagen (GMA~ 64 μg/ml, MNNG~ 8 μg/ml) and the perturbation on dNTP pools was carried out before the treatment of mutagen; the short treatment with mutagen could induce distinct fluctuations of dNTP pools, but different mutagen might have different effects on dNTP pools.According to the results of the present study and other reports in literature, we conclude that dNTP pools may be the targets of alkylating mutagens and the fluctuations of dNTP pools are closely associated with mutagenesis 展开更多
关键词 DNA RES Role of dntps in Mutagenesis
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Effects Analysis of Mg^2+, dNTPs and Taq DNA Polymerase on SSR-PCR System of Pear
7
作者 Min Lu Xiaoyang Chen Ling Lin Ya Luo Yong Zhang Zejing Liu Liyi Li Haoru Tang 《Journal of Life Sciences》 2011年第6期428-433,共6页
Effects of Mg^2+, NTPs and Taq DNA polymerase in pear SSR-PCR system were analyzed by quadratic regressive orthogonal rotational combinational design. Results showed: absolute IOD (Integrated OD of each band) valu... Effects of Mg^2+, NTPs and Taq DNA polymerase in pear SSR-PCR system were analyzed by quadratic regressive orthogonal rotational combinational design. Results showed: absolute IOD (Integrated OD of each band) value of target band reduced with concentration rising of Mg^2+ and Taq DNA polymerase, but heightened with concentration rising of dNTPs. The decay rate of absolute IOD value increased progressively with rising Mg^2+ concentration, decreased gradually with rising Taq DNA polymerase concentration; the rising speed would be slower than the dNTPs increase. Absolute IOD value would reduce with concentration rising of dNTPs at a low level of Mg^2+ concentration. Conversely it would rise with the increase of dNTPs while high Mg^2+ concentration. Absolute IOD value would generally rise with concentration rising of Taq DNA polymerase while low Mg^2+ concentration. On the contrary it would reduce with concentration rising of Taq DNA polymerase while high Mg^2+ concentration. 展开更多
关键词 PEAR SSR-PCR system quadratic regressive orthogonal rotational combinational design effects analysis.
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dNTP库在致突变中的作用 被引量:2
8
作者 雷海新 《国外医学(分子生物学分册)》 CSCD 1997年第1期26-31,共6页
dNTP库平衡对遗传稳定有重要意义,库失衡将引发一系列遗传效应,特别是对细胞自发性和诱导性突变率有重要影响。dNTP库失衡诱发的突变以替换为主的单碱基对事件。
关键词 dntp 基因突变
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促进跨学科概念“物质与能量”构建的高中生物学教学设计——以“DNA的复制和PCR技术”复习课为例
9
作者 许润青 《中学生物学》 2025年第9期32-35,共4页
本文对“DNA的复制”与“PCR技术的操作过程”相关内容进行跨模块整合,引导学生深度思考dNTP在DNA复制过程中的双重作用,帮助其从分子水平进一步理解“物质与能量”跨学科概念的内涵,进而促进其生物学学科核心素养的形成和发展。
关键词 跨学科概念 物质与能量 DNA的复制 PCR dntp
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脱氧核糖鸟苷酸对染色质松弛程度的调控作用
10
作者 李英杰 王小军 +2 位作者 刘聪 曾鸣 郭莲娣 《西南民族大学学报(自然科学版)》 CAS 2024年第3期299-304,共6页
真核生物的染色质结构在基因转录、DNA修复等生物学过程中发生动态变化,其松弛程度和组蛋白修饰受到多种机制的严密调控.在研究DNA修复机制的过程中,发现敲除S期抑制基因(Spd1)可以逆转多种DNA损伤应答(DDR)突变体的表型缺陷,该遗传相... 真核生物的染色质结构在基因转录、DNA修复等生物学过程中发生动态变化,其松弛程度和组蛋白修饰受到多种机制的严密调控.在研究DNA修复机制的过程中,发现敲除S期抑制基因(Spd1)可以逆转多种DNA损伤应答(DDR)突变体的表型缺陷,该遗传相互作用涉及到DDR的多个信号转导通路.Spd1的主要功能是抑制脱氧核糖核苷酸(dNTP)的生物合成,这说明敲除Spd1可以通过改变dNTP库的水平或组分来影响DNA损伤应答.进一步分析发现,Spd1缺陷促进染色质松弛,导致突变菌株的染色质对微球菌核酸酶的敏感,由此说明dNTP水平的增高可以促进染色质的紧密程度.最后,通过利用可以转运外源dNTP的FY2317菌株,制备原生质体,利用半离体的体系证明过量的dNTP,特别是脱氧核糖鸟苷酸(dGTP)可以模拟Spd1缺失菌株的表型,显著提高染色质的松弛程度.综上所述,研究发现了一种新的调控染色质松弛程度的遗传机制,可以影响DNA损伤修复的应答. 展开更多
关键词 脱氧核糖核苷酸(dntp) 脱氧核糖鸟苷酸(dGTP) 染色质浓缩 DNA复制
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蛋黄果SCoT-PCR反应体系的建立与优化
11
作者 周彩霞 李文砚 +6 位作者 卢美瑛 周之珞 颜桢灵 韦雪英 卓福昌 韦优 周婧 《中国南方果树》 北大核心 2024年第2期112-116,共5页
为建立和优化蛋黄果SCoT-PCR反应体系,以“仙桃1号”蛋黄果为试材,SCoT1为引物,采用L_(16)(4^(5))正交试验,对影响SCoT-PCR反应的DNA、Mg^(2+)、dNTPs、引物及Taq聚合酶等因素进行优化;并选用3份地理位置相距较远的蛋黄果种质为模板,对... 为建立和优化蛋黄果SCoT-PCR反应体系,以“仙桃1号”蛋黄果为试材,SCoT1为引物,采用L_(16)(4^(5))正交试验,对影响SCoT-PCR反应的DNA、Mg^(2+)、dNTPs、引物及Taq聚合酶等因素进行优化;并选用3份地理位置相距较远的蛋黄果种质为模板,对优化反应体系进行验证。结果表明,不同因素对蛋黄果SCoT-PCR反应体系的影响存在差异,但不显著,其中最大的影响因素是Taq聚合酶含量,其次是dNTPs浓度、模板DNA含量、引物浓度和Mg^(2+)浓度。蛋黄果SCoT-PCR最佳反应体系(20μL)为模板DNA 80 ng、3 mmol/L Mg^(2+)、0.25 mmol/L dNTPs、0.4μmol/L引物、Taq 2 U。在该体系下,3份蛋黄果种质均能稳定扩增出清晰明亮、数目丰富且稳定性高的条带,说明优化的SCoT-PCR反应体系适用于蛋黄果SCoT分子标记。 展开更多
关键词 蛋黄果 SCoT-PCR 正交试验 Taq聚合酶 dntps浓度
原文传递
濒危竹种小蓬竹(Drepanostachyum luodianense)RAPD-PCR反应体系优化 被引量:4
12
作者 刘济明 王敏 +5 位作者 闫国华 赵小鹏 文萍 池馨 颜强 李鹏 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2014年第3期667-674,共8页
为了建立小蓬竹(Drepanostachyum luodianense)RAPD-PCR反应的最优体系,以小蓬竹基因组DNA为模板,对影响其RAPD扩增的dNTPs浓度、模板DNA浓度、Taq DNA聚合酶量、引物浓度、Mg2+浓度等重要参数进行了单因子和正交试验。试验得出小蓬竹R... 为了建立小蓬竹(Drepanostachyum luodianense)RAPD-PCR反应的最优体系,以小蓬竹基因组DNA为模板,对影响其RAPD扩增的dNTPs浓度、模板DNA浓度、Taq DNA聚合酶量、引物浓度、Mg2+浓度等重要参数进行了单因子和正交试验。试验得出小蓬竹RAPD最优反应体系为:20μL反应体系,10×PCR buffer为1/10体积,dNTPs为100μmol·L-1,模板DNA量为30 ng,Taq DNA聚合酶为1.0 U,引物浓度为0.2μmol·L-1,Mg2+浓度为1.5 mmol·L-1。优化后的RAPD-PCR反应程序为:94℃预变性5 min,然后进入35个循环,即94℃变性1 min,35℃退火30 s,72℃延伸90 s,循环完毕后于72℃延伸7 min,最后在4℃保持。 展开更多
关键词 小蓬竹 RAPD-PCR 引物 dntps TAQ DNA聚合酶
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利用正交设计优化水曲柳ISSR-PCR反应体系 被引量:117
13
作者 谢运海 夏德安 +1 位作者 姜静 林萍 《分子植物育种》 CAS CSCD 2005年第3期445-450,共6页
利用正交设计L16(45)对水曲柳ISSR-PCR反应体系的5因素(Taq酶,Mg2+,模板DNA,dNTP,引物)在4个水平上进行优化试验,PCR结果用统计软件MINITAB分析:①各因素的不同水平对PCR反应结果都有显著的影响,其中Taq酶量影响最大;②筛选出各反应因... 利用正交设计L16(45)对水曲柳ISSR-PCR反应体系的5因素(Taq酶,Mg2+,模板DNA,dNTP,引物)在4个水平上进行优化试验,PCR结果用统计软件MINITAB分析:①各因素的不同水平对PCR反应结果都有显著的影响,其中Taq酶量影响最大;②筛选出各反应因素的最佳水平,建立水曲柳ISSR-PCR反应的最佳体系(20滋l)为:Taq酶1.0U,Mg2+2.0mmol/L,模板DNA50 ̄200ng,dNTP0.15mmol/L,引物0.3滋mol/L。最后,对水曲柳ISSR-PCR最佳反应体系进行梯度退火,得到最佳退火温度为58.3℃。这一优化系统的建立为今后利用ISSR标记技术,研究水曲柳的地理变异提供一个标准化程序。 展开更多
关键词 PCR反应体系 水曲柳 设计优化 ISSR-PCR ISSR标记技术 MINITAB MG^2+ Taq酶 最佳反应体系 模板DNA 标准化程序 正交设计 dntp 优化试验 统计软件 退火温度 优化系统 地理变异 水平 mol 引物 果用
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红景天属植物DALP反应体系的建立 被引量:8
14
作者 李永谊 虞泓 +2 位作者 朱荣勋 和锐 倪念春 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期419-423,共5页
目的 利用直接扩增片段长度多态(DALP)这一新分子标记技术建立一套稳定的红景天属植物的DALP反应体系。方法 以红景天基因组DNA为模板,对DALP反应程序的一些重要参数进行摸索和优化试验。结果 建立了一套稳定性强、可靠性高的DALP应用... 目的 利用直接扩增片段长度多态(DALP)这一新分子标记技术建立一套稳定的红景天属植物的DALP反应体系。方法 以红景天基因组DNA为模板,对DALP反应程序的一些重要参数进行摸索和优化试验。结果 建立了一套稳定性强、可靠性高的DALP应用反应体系;经过大量重复性实验,反应体系为20μL,Mg2+浓度为2.5 mmol/L,dNTPs浓度为1.25 mmol/L,模板DNA的量为60 ng,5 pmol/L选择性引物1μL,5 pmol/L反向引物3 μL,引物浓度比为1:3,Taq酶2 U。反应过程为:95℃预变性5 min、94℃变性30 s、50℃退火30 s、72℃延伸1 min;30个循环,再72℃延伸10 min,完成整个PCR反应。结论 该体系可有效地应用于红景天属药材的分类鉴定和地道性鉴定。 展开更多
关键词 红景天属 Taq酶 反应体系 引物 MG^2+ 变性 DNA 反应程序 dntps浓度 地道性
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库尔勒香梨脉黄病毒RT-PCR检测技术研究 被引量:9
15
作者 牛建新 刘连科 +1 位作者 王小兵 覃伟铭 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期561-566,共6页
以库尔勒香梨叶片和皮层为材料 ,对总RNA提取方法进行了研究 ,从中筛选出了适合库尔勒香梨总RNA的提取方法。结果表明 ,要获得良好的RT PCR扩增 ,RT体系中dNTPs浓度、互补引物、AMV、模板的浓度要分别达到 0 .1mmol·L-1、0 .2 μmo... 以库尔勒香梨叶片和皮层为材料 ,对总RNA提取方法进行了研究 ,从中筛选出了适合库尔勒香梨总RNA的提取方法。结果表明 ,要获得良好的RT PCR扩增 ,RT体系中dNTPs浓度、互补引物、AMV、模板的浓度要分别达到 0 .1mmol·L-1、0 .2 μmol·L-1、0 .0 5U·μl-1、0 .0 1μg·μl-1以上。此外 ,使用RNasin能有效抑制RT体系中RNase对病毒RNA的降解作用 ,可使RT过程顺利进行 ;PCR体系中dNTPs浓度至少要达到 0 .1mmol·L-1,0 .2~ 0 .3mmol·L-1可以获得最佳的扩增效果 ;TaqE浓度要达到 0 .0 15U·μl-1以上 ;引物浓度适宜范围 0 .3~ 0 .7μmol·L-1;Mg2 + 要达到 1.2 6mmol·L-1以上。 展开更多
关键词 库尔勒香梨 脉黄病毒 RT-PCR检测技术 RNA提取方法 dntps浓度
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影响小麦RAPD稳定性的试验技术研究 被引量:10
16
作者 安德荣 程继红 +1 位作者 成卓敏 慕小倩 《麦类作物学报》 CAS CSCD 2001年第1期14-17,共4页
随着 PCR和 RAPD技术在生物学领域的广泛应用 ,人们在实验中遇到的问题也越来越多 ,其中RAPD的可重复性差是最主要的一个问题 ,也是该技术最难克服的缺点。作者在利用 RAPD技术标记进行小麦的抗病毒基因研究中 ,对影响扩增结果的模板、... 随着 PCR和 RAPD技术在生物学领域的广泛应用 ,人们在实验中遇到的问题也越来越多 ,其中RAPD的可重复性差是最主要的一个问题 ,也是该技术最难克服的缺点。作者在利用 RAPD技术标记进行小麦的抗病毒基因研究中 ,对影响扩增结果的模板、底物、引物和扩增程序等进行了实验探索 ,结果表明 :模板的浓度、d NTP浓度、引物浓度及反应程序均对 RAPD扩增结果有明显影响。 展开更多
关键词 RAPD PCR 小麦 可重复性 模板浓度 dntp浓度
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小麦雄性不育材料RAPD扩增体系研究 被引量:6
17
作者 马翎健 曹丽华 +3 位作者 周济铭 宋喜悦 胡银岗 何蓓如 《西北农业学报》 CAS CSCD 2003年第4期60-63,共4页
以光敏雄性不育系A31及其恢复系1376为材料,使用美国MGREACHE公司生产的PTC-200型PCR,对影响RAPD扩增的因素进行了比较研究,确定了模板、Mg2+、dNTPs、引物和TapDNA聚合酶的适宜浓度和最佳的循环次数,实验结果表明在25μL反应体系中使... 以光敏雄性不育系A31及其恢复系1376为材料,使用美国MGREACHE公司生产的PTC-200型PCR,对影响RAPD扩增的因素进行了比较研究,确定了模板、Mg2+、dNTPs、引物和TapDNA聚合酶的适宜浓度和最佳的循环次数,实验结果表明在25μL反应体系中使用20~40ng的模板DNA,1.5~2.0mmol/L的Mg2+,0.3~0.4mmol/L的dNTPs,0.15~0.20μmol/L随机引物,1.0~1.5单位TaqDNA聚合酶;反应条件为94℃预变性5min,然后进行94℃45s,36°45s,72°90s,45个循环后,再在72℃延伸10min,小麦雄性不育材料RAPD扩增效果较好。 展开更多
关键词 小麦 雄性不育材料 RAPD扩增体系 DNA模板浓度 镁离子 dntps浓度 引物浓度 TAQDNA聚合酶 循环次数
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乌拉尔甘草ISSR-PCR反应体系优化研究 被引量:24
18
作者 佟汉文 孙群 +3 位作者 吴波 丁自勉 孙宝启 王建华 《中国农学通报》 CSCD 2005年第4期70-74,共5页
甘草是中国最大宗的药材之一,具有重要的药用、生态及工业价值。利用ISSR技术对甘草种质资源的遗传多样性进行深入研究,对甘草物种生物多样性的保护及新品种培育具有重要意义。研究了影响甘草ISSR-PCR扩增效果的一些因素,实验结果表明:... 甘草是中国最大宗的药材之一,具有重要的药用、生态及工业价值。利用ISSR技术对甘草种质资源的遗传多样性进行深入研究,对甘草物种生物多样性的保护及新品种培育具有重要意义。研究了影响甘草ISSR-PCR扩增效果的一些因素,实验结果表明:最适宜用于甘草ISSR+PCR分析的反应条件为:20μl反应体系中,1×TaqDNA聚合酶配套缓冲液(10mmol/LTris-HCL,pH9.0,50mmol/LKCL,0.1%TritonX_100,2.0mmol/LMg2+),0.8UnitTaqDNA聚合酶,0.4μmol/L引物,200μmol/LdNTP,10ng模板DNA。 展开更多
关键词 ISSR PCR反应体系 乌拉尔甘草 优化研究 TAQDNA聚合酶 遗传多样性 SSR技术 新品种培育 生物多样性 PCR分析 模板DNA 工业价值 种质资源 扩增效果 反应条件 dntp HCL 缓冲液 mol 药材
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利用正交设计优化辣椒的SRAP反应体系 被引量:4
19
作者 陈书霞 崔鸿文 张延安 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期184-187,共4页
以辣椒雄性不育保持系B-07LP为试材,利用正交设计L16(45)在5个水平上对影响辣椒SRAP反应体系稳定性的dNTP浓度、引物用量及Taq酶活性浓度梯度等外部条件进行了优化试验。在此基础上,通过单因素完全随机试验确定了辣椒SRAP关键反应因子... 以辣椒雄性不育保持系B-07LP为试材,利用正交设计L16(45)在5个水平上对影响辣椒SRAP反应体系稳定性的dNTP浓度、引物用量及Taq酶活性浓度梯度等外部条件进行了优化试验。在此基础上,通过单因素完全随机试验确定了辣椒SRAP关键反应因子的适宜浓度。其中引物浓度为0.4μmol/L、dNTP的适宜浓度为0.2 mmol/L及适宜的Taq酶活性浓度为0.3 U/μL,并对所建体系的稳定性进行了验证。 展开更多
关键词 辣椒 SRAP 正交设计 体系优化 引物浓度梯度 dntp浓度梯度 Taq酶活性浓度梯度
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烟草RAPD反应体系的建立与优化研究 被引量:13
20
作者 杨友才 周清明 尹晗琪 《中国农学通报》 CSCD 2005年第5期97-100,共4页
以烤烟品种为材料,研究了烟草RAPD分析过程中的影响因素,包括模板浓度、Mg2+、dNTP、引物、Taq酶、循环次数、退火温度等,建立了适于烟草RAPD分析的PCR反应体系:即在25μl反应体系中,模板用量为40ng;引物浓度为0.4μM;Mg2+浓度为2.5mM;d... 以烤烟品种为材料,研究了烟草RAPD分析过程中的影响因素,包括模板浓度、Mg2+、dNTP、引物、Taq酶、循环次数、退火温度等,建立了适于烟草RAPD分析的PCR反应体系:即在25μl反应体系中,模板用量为40ng;引物浓度为0.4μM;Mg2+浓度为2.5mM;dNTP浓度为0.2mM;TaqDNA聚合酶用量为1U。扩增程序为94℃预变性5min;然后94℃变性1min,38℃复性1min,72℃延伸1.5min,39个循环;最后72℃延伸5min。 展开更多
关键词 RAPD反应体系 优化研究 烟草 PCR反应体系 Mg^2+浓度 RAPD分析 dntp浓度 烤烟品种 分析过程 模板浓度 Taq酶 循环次数 退火温度 引物浓度 扩增程序 酶用量 DNA 变性 延伸
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