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酵母双杂交 BBTV DNA2 ORF诱饵质粒构建及其互作蛋白筛选
被引量:
1
1
作者
余乃通
王健华
+2 位作者
张雨良
周朋
刘志昕
《植物病理学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第4期376-383,共8页
香蕉束顶病毒DNA2组分编码蛋白的功能尚不清楚,为了揭示其编码蛋白的功能,以本实验室保存的BBTV Haikou4分离物总DNA为模板进行PCR扩增,利用Gateway重组技术将BBTV DNA2 ORF构建到酵母双杂交系统(Pro QuestTM Two-Hybrid System,Invitro...
香蕉束顶病毒DNA2组分编码蛋白的功能尚不清楚,为了揭示其编码蛋白的功能,以本实验室保存的BBTV Haikou4分离物总DNA为模板进行PCR扩增,利用Gateway重组技术将BBTV DNA2 ORF构建到酵母双杂交系统(Pro QuestTM Two-Hybrid System,Invitrogen)的诱饵载体pDEST-32中,并通过酵母表型验证、诱饵质粒毒性验证以及自激活验证。结果显示,转有pDEST32-DNA2 ORF质粒的Ma V203酵母菌具有弱的自激活背景,在3-AT浓度为25 mmol/L的Se C-Leu-TrpHis平板上生长较弱,但在3-AT浓度为50 mmol/L Se C-Leu-Trp-His平板上不生长,表明诱饵质粒背景自激活可被浓度为50 mmol/L的3-AT所抑制。在该条件下共转pDEST32-DNA2 ORF和文库质粒到MaV203感受态细胞进行互作蛋白筛选,通过PCR和测序等手段最终鉴定35个候选蛋白基因,分别编码转录调控因子、生长发育相关蛋白、代谢相关蛋白、抗逆相关蛋白和未知蛋白等。酵母双杂交BBTV DNA2 ORF诱饵质粒的构建及其与寄主互作蛋白的筛选,为揭示DNA2组分的蛋白功能提供了科学线索。
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关键词
dna2orf
酵母双杂交
质粒构建
自激活验证
原文传递
题名
酵母双杂交 BBTV DNA2 ORF诱饵质粒构建及其互作蛋白筛选
被引量:
1
1
作者
余乃通
王健华
张雨良
周朋
刘志昕
机构
中国热带农业科学院热带生物技术研究所农业部热带作物生物学与遗传资源利用重点实验室
出处
《植物病理学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第4期376-383,共8页
基金
国家自然科学基金资助项目(31401709
31070131)
+1 种基金
海南省重大科技项目(ZDZX2013023)
中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资助(ITBB110304)
文摘
香蕉束顶病毒DNA2组分编码蛋白的功能尚不清楚,为了揭示其编码蛋白的功能,以本实验室保存的BBTV Haikou4分离物总DNA为模板进行PCR扩增,利用Gateway重组技术将BBTV DNA2 ORF构建到酵母双杂交系统(Pro QuestTM Two-Hybrid System,Invitrogen)的诱饵载体pDEST-32中,并通过酵母表型验证、诱饵质粒毒性验证以及自激活验证。结果显示,转有pDEST32-DNA2 ORF质粒的Ma V203酵母菌具有弱的自激活背景,在3-AT浓度为25 mmol/L的Se C-Leu-TrpHis平板上生长较弱,但在3-AT浓度为50 mmol/L Se C-Leu-Trp-His平板上不生长,表明诱饵质粒背景自激活可被浓度为50 mmol/L的3-AT所抑制。在该条件下共转pDEST32-DNA2 ORF和文库质粒到MaV203感受态细胞进行互作蛋白筛选,通过PCR和测序等手段最终鉴定35个候选蛋白基因,分别编码转录调控因子、生长发育相关蛋白、代谢相关蛋白、抗逆相关蛋白和未知蛋白等。酵母双杂交BBTV DNA2 ORF诱饵质粒的构建及其与寄主互作蛋白的筛选,为揭示DNA2组分的蛋白功能提供了科学线索。
关键词
dna2orf
酵母双杂交
质粒构建
自激活验证
Keywords
DNA2 0RF
yeast two-hybrid
plasmid construction
self-activation verification
分类号
S432.41 [农业科学—植物病理学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
酵母双杂交 BBTV DNA2 ORF诱饵质粒构建及其互作蛋白筛选
余乃通
王健华
张雨良
周朋
刘志昕
《植物病理学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015
1
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