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lncRNA DIO3OS在骨肉瘤中的表达及抑制骨肉瘤细胞增殖、侵袭和迁移的研究
1
作者 万宁军 许少伟 +2 位作者 马剑 郝斌 王真 《宁夏医学杂志》 CAS 2023年第6期481-484,I0001,共5页
目的探讨lncRNA DIO3OS在骨肉瘤中的表达及其在调控骨肉瘤细胞生物学行为中的作用。方法收集骨肉瘤标本及配对癌旁正常组织标本6例,qRT-PCR检测骨肉瘤组织中DIO3OS表达。MG-63细胞转染si-DIO3OS或pcDNA3.1-DIO3OS,敲降或过表达DIO3OS后... 目的探讨lncRNA DIO3OS在骨肉瘤中的表达及其在调控骨肉瘤细胞生物学行为中的作用。方法收集骨肉瘤标本及配对癌旁正常组织标本6例,qRT-PCR检测骨肉瘤组织中DIO3OS表达。MG-63细胞转染si-DIO3OS或pcDNA3.1-DIO3OS,敲降或过表达DIO3OS后,通过CCK-8实验评估细胞增殖能力,划痕实验和Transwell实验检测骨肉瘤细胞MG-63迁移与侵袭能力。基于TARGET数据库,根据患者骨肉瘤组织中DIO3OS表达水平分为高表达组与低表达组,Kaplan Meier生存分析评估DIO3OS表达水平与患者预后的关系。结果qRT-PCR结果显示,骨肉瘤组织及细胞中DIO3OS表达下调。敲降DIO3OS表达时,CCK-8实验结果表明骨肉瘤细胞MG-63增殖能力增加,划痕实验和Transwell实验结果显示MG-63细胞迁移与侵袭能力增加(P<0.05)。过表达DIO3OS后,CCK-8、划痕实验和Transwell实验结果显示,MG-63细胞的增殖、迁移与侵袭能力减弱(P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析结果显示,DIO3OS高表达组患者生存率明显高于低表达组(P<0.05)。结论lncRNA DIO3OS在骨肉瘤组织及细胞中表达下调,并且可以抑制骨肉瘤细胞的增殖、迁移与侵袭能力,DIO3OS高表达的骨肉瘤患者预后较好。 展开更多
关键词 骨肉瘤 lncRNA dio3os 细胞增殖 细胞迁移与侵袭
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过表达LncRNA DIO3OS通过结合PTBP1调控BDNF表达以缓解氯胺酮诱导的小鼠海马神经元细胞毒性
2
作者 张琳 刘跃丹 +1 位作者 李伟 唐富东 《中华神经医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期973-983,共11页
目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)DIO3OS对氯胺酮诱导的小鼠海马神经元细胞毒性的影响及其作用机制。方法:(1)分离并培养原代小鼠海马神经元,应用CCK-8法检测不同浓度(0、25、50、100、200μmol/L)氯胺酮对细胞活力的影响,qPCR法检测DIO3... 目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)DIO3OS对氯胺酮诱导的小鼠海马神经元细胞毒性的影响及其作用机制。方法:(1)分离并培养原代小鼠海马神经元,应用CCK-8法检测不同浓度(0、25、50、100、200μmol/L)氯胺酮对细胞活力的影响,qPCR法检测DIO3OS mRNA的表达。(2)将海马神经元分为对照组、氯胺酮组(50μmol/L氯胺酮培养24 h)、氯胺酮+pc组(转染pcDNA3.1质粒48 h后加50μmol/L氯胺酮培养24 h)、氯胺酮+DIO3OS组(转染pcDNA3.1-DIO3OS质粒48 h后加50μmol/L氯胺酮培养24 h),应用CCK-8法检测各组细胞活力,乳酸脱氢酶(LDH)细胞毒性检测试剂盒检测LDH释放量,流式细胞术检测细胞凋亡情况,qPCR法检测DIO3OS、脑源性神经营养因子(BDNF)mRNA的表达,Western blotting实验检测多聚嘧啶区结合蛋白1(PTBP1)、BDNF蛋白的表达。(3)提取正常海马神经元的总蛋白,应用RNA沉降实验检测DIO3OS mRNA及BDNF mRNA与PTBP1蛋白的结合能力。(4)将海马神经元分为氯胺酮+DIO3OS+si-NC组(同时转染pcDNA3.1-DIO3OS和si-NC质粒48 h后加50μmol/L氯胺酮培养24 h)、氯胺酮+DIO3OS+si-PTBP1组(同时转染pcDNA3.1-DIO3OS和si-PTBP1质粒48 h后加50μmol/L氯胺酮培养24 h),应用qPCR法检测DIO3OS、BDNF mRNA的表达,Western blotting实验检测PTBP1、BDNF蛋白的表达。(5)将海马神经元分为氯胺酮组(50μmol/L氯胺酮培养24 h)、氯胺酮+si-DIO3OS组(转染si-DIO3OS质粒48 h后加50μmol/L氯胺酮培养24 h)、氯胺酮+si-PTBP1组(转染si-PTBP1质粒48 h后加50μmol/L氯胺酮培养24 h)、氯胺酮+si-DIO3OS+si-PTBP1组(同时转染si-DIO3OS和si-PTBP1质粒48 h后加50μmol/L氯胺酮培养24 h),应用qPCR法检测DIO3OS、BDNF mRNA的表达,Western blotting实验检测BDNF蛋白的表达。(6)将海马神经元分为氯胺酮+DIO3OS+si-NC组(同时转染pcDNA3.1-DIO3OS和si-NC质粒48 h后加50μmol/L氯胺酮培养24 h)、氯胺酮+DIO3OS+si-BDNF组(同时转染pcDNA3.1-DIO3OS和si-BDNF质粒48 h后加50μmol/L氯胺酮培养24 h),应用CCK-8法检测细胞活力,LDH细胞毒性检测试剂盒检测LDH释放量,流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果:(1)25、50、100、200μmol/L氯胺酮组海马神经元细胞活力、DIO3OS mRNA表达均较0μmol/L氯胺酮组明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。(2)与对照组相比,氯胺酮组海马神经元中DIO3OS mRNA表达、细胞活力明显降低,LDH释放量明显增加,凋亡率明显增加,BDNF mRNA和蛋白表达明显降低,PTBP1蛋白表达明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与氯胺酮+pc组相比,氯胺酮+DIO3OS组海马神经元中DIO3OS mRNA表达、细胞活力明显增加,LDH释放量明显降低,凋亡率明显降低,BDNF mRNA和蛋白表达明显增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。(3)RNA沉降实验显示生物素化标记的DIO3OS、BDNF均可吸附PTBP1蛋白,但生物素化标记的DIO3OS、BDNF反义链均不能吸附PTBP1蛋白。(4)与氯胺酮+DIO3OS+si-NC组相比,氯胺酮+DIO3OS+si-PTBP1组海马神经元中BDNF mRNA和蛋白表达均明显降低,PTBP1蛋白表达明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05);2组间DIO3OS mRNA表达的差异无统计学意义(P>0.05)。(5)与氯胺酮组相比,氯胺酮+si-DIO3OS组、氯胺酮+si-DIO3OS+si-PTBP1组海马神经元中DIO3OS mRNA表达均明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与氯胺酮组相比,氯胺酮+si-DIO3OS组、氯胺酮+si-PTBP1组海马神经元中BDNF mRNA和蛋白表达均明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与氯胺酮+si-DIO3OS组、氯胺酮+si-PTBP1组相比,氯胺酮+si-DIO3OS+si-PTBP1组海马神经元中BDNF mRNA和蛋白表达均明显增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。(6)与氯胺酮+DIO3OS+si-NC组相比,氯胺酮+DIO3OS+si-BDNF组海马神经元的细胞活力明显降低,LDH释放量明显增加,凋亡率明显增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:LncRNA DIO3OS在氯胺酮诱导的原代小鼠海马神经元中表达降低,而过表达DIO3OS可通过结合PTBP1调控BDNF的表达来缓解氯胺酮诱导的神经元细胞毒性。 展开更多
关键词 长链非编码RNA dio3os 氯胺酮 海马神经元 细胞毒性 多聚嘧啶区结合蛋白1 脑源性神经营养因子
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