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非竞争ELISA法测定抗DR5单克隆抗体功能性亲和常数 被引量：7
1
作者 白慧玲 赵粤萍 +1 位作者 刘广超 马远方 《河南大学学报（医学版）》 CAS 2005年第4期11-13,共3页
目的:测定抗DR5单克隆抗体功能性亲和常数。方法:采用非竞争性ELISA固相法,经确定最佳抗原包板浓度、最佳抗原包板时间及最佳抗原与抗体结合反应时间后,得到DR5与抗DR5的两株单克隆抗体的抗原抗体结合反应曲线,计算抗DR5两株单抗的亲和... 目的:测定抗DR5单克隆抗体功能性亲和常数。方法:采用非竞争性ELISA固相法,经确定最佳抗原包板浓度、最佳抗原包板时间及最佳抗原与抗体结合反应时间后,得到DR5与抗DR5的两株单克隆抗体的抗原抗体结合反应曲线,计算抗DR5两株单抗的亲和常数。结果:抗DR5(366EC)的功能性亲和常数在2.63×109M-1水平,抗DR5(mDRA-6)的功能性亲和常数在1.004×109。结论:抗DR5与DR5结合能力较强,为今后进行免疫学检测和开发进行肿瘤靶向治疗提供了理论基础。 展开更多
关键词 酶联免疫吸附测定 dil5 抗dil5单克隆抗体 抗体亲和力
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DR5胞外段基因的表达及功能初步鉴定 被引量：1
2
作者 陈居杲 王玉刚 +4 位作者 赵昆朋 谷欣 黎燕 马远方 沈倍奋 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期791-793,共3页
目的:获得具有生物活性的人DR5胞外段蛋白。方法:通过RT-PCR从Jurkat细胞中钓取DR5的胞外段基因(55-183位氨基酸),克隆到pGEM(-T Easy载体中,经核酸序列测定正确后,将其再次克隆入原核表达载体pET30 a中,在E.coliBL21(DE3)实现蛋白表达... 目的:获得具有生物活性的人DR5胞外段蛋白。方法:通过RT-PCR从Jurkat细胞中钓取DR5的胞外段基因(55-183位氨基酸),克隆到pGEM(-T Easy载体中,经核酸序列测定正确后,将其再次克隆入原核表达载体pET30 a中,在E.coliBL21(DE3)实现蛋白表达。通过SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物。ELISA法分析其与抗DR5单克隆抗体(mAb)结合能力。结果:克隆到人DR5基因的胞外段基因,测序结果和报道的一致;构建了人DR5胞外段基因的原核表达载体并实现在E.coliBL21(DE3)中大量表达;SDS-PAGE表明所表达蛋白与预期蛋白的相对分子质量(Mr)一致;Western blot及ELISA的结果表明该蛋白能与抗DR5抗体反应,竞争阻断试验表明DR5胞外段可阻断TRAIL对Jurkat细胞生长的抑制。结论:成功地制备了具有生物活性的DR5胞外区,为后续研究打下了基础。 展开更多
关键词 dil5 RT-PCR 原核表达
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TRAIL及其受体在直肠癌中的表达及意义 被引量：2
3
作者 阎艳 李青 +2 位作者 赵大庆 陈广生 王映梅 《现代肿瘤医学》 CAS 2007年第4期541-543,共3页
目的:探讨人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis inducing ligand,TRAIL)及其受体DR4、DR5、DcR1、DcR2在直肠癌及癌旁组织中的表达及意义。方法:采用免疫组化EliVision法检测37例直肠癌及其癌旁组织和10例正常直肠粘... 目的:探讨人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis inducing ligand,TRAIL)及其受体DR4、DR5、DcR1、DcR2在直肠癌及癌旁组织中的表达及意义。方法:采用免疫组化EliVision法检测37例直肠癌及其癌旁组织和10例正常直肠粘膜组织中TRAIL及其受体DR4、DR5、DcR1、DcR2表达水平。结果:TRAIL在正常直肠粘膜组织、癌旁及直肠癌组织中的表达呈递减趋势,而DR4、DR5的表达则与之相反(P<0.05);TRAIL在中、低分化癌中的表达与高分化癌中的表达无差异,而DR4、DR5、DcR1、DcR2在中、低分化癌中的表达高于高分化癌中的表达(P<0.05);TRAIL及其受体的表达与肿瘤的病理类型、患者的年龄、性别等因素无明显相关性(P<0.05)。结论:TRAIL在直肠癌中表达较正常直肠粘膜组织减弱,DcR1、DcR2在直肠癌中的表达高于DR4、DR5,提示TRAIL及其受体可能与直肠癌的发生、发展密切相关,为临床应用提供了一定的理论依据。 展开更多
关键词 TRAIL DR4 dil5 DCR1 DcR2 直肠癌 免疫组织化学
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TRAIL/死亡受体5途径在缺氧再给氧诱导人肝细胞凋亡中的作用及相关机制 被引量：6
4
作者 曹丽丽 李幼平 +2 位作者 李胜富 程峰 龙丹 《华西医学》 CAS 2006年第3期516-517,共2页
目的:研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)/死亡受体5(Death receptor 5,DR5)途径在人肝细胞缺氧/再给氧(Hypoxia/reoxygenation,H/R)损伤中的作用,并探讨其作用机制。方法:在体外建立肝细... 目的:研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)/死亡受体5(Death receptor 5,DR5)途径在人肝细胞缺氧/再给氧(Hypoxia/reoxygenation,H/R)损伤中的作用,并探讨其作用机制。方法:在体外建立肝细胞H/R模型,模拟肝脏的缺血再灌注。H/R处理后,培养基中加入不同浓度外源性TRAIL蛋白,噻唑盐比色法(MTT)和流式细胞术检测细胞活力和凋亡率。半定量RT-PCR检测DR5mRNA的表达。结果:以正常人肝细胞为对照,H/R使人肝细胞的DR5 mRNA的表达上调,再给氧2小时达峰值,此后直至再给氧20小时维持在相对高的水平。单纯缺氧6小时不能引起肝细胞的大量凋亡。TRAIL诱导H/R处理后的肝细胞发生凋亡,并呈浓度依赖性。H/R大大增强TRAIL的肝毒性。结论:H/R使DR5在人肝细胞的表达上调,增加TRAIL的肝毒性。TRAIL/DR5途径可能在IRI诱导人肝细胞凋亡过程中发挥重要作用。 展开更多
关键词 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 缺氧/再给氧 凋亡 死亡受体5
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