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DHAV-3感染对不同日龄雏鸭胆汁分泌通路的影响
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作者 鲁美希 李慧慧 +2 位作者 唐熠 梁素芸 侯水生 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第6期2830-2838,共9页
【目的】Ⅲ型鸭甲肝病毒(Duck hepatitis A virus genotype 3,DHAV-3)是引发雏鸭急性致死性肝炎的主要病原体之一,其致病性呈现显著的日龄依赖性特征。本研究旨在阐明不同日龄雏鸭感染DHAV-3后胆汁分泌通路的调控机制,揭示宿主日龄因素... 【目的】Ⅲ型鸭甲肝病毒(Duck hepatitis A virus genotype 3,DHAV-3)是引发雏鸭急性致死性肝炎的主要病原体之一,其致病性呈现显著的日龄依赖性特征。本研究旨在阐明不同日龄雏鸭感染DHAV-3后胆汁分泌通路的调控机制,揭示宿主日龄因素对病毒致病过程的影响规律。【方法】本研究以Z2系北京鸭为研究对象,设置7、14、21日龄3个试验组(50只/组)及相应对照组(15只/组)。攻毒组雏鸭腿肌注射0.2 mL DHAV-3(10^(-8.83) ELD_(50)/0.2 mL),对照组注射等体积PBS,隔离饲养至感染后18 h,采集血液、肝脏、回肠样本,检测指标包括血浆生化指标、病毒载量、总胆汁酸(TBA)含量以及胆汁分泌通路相关基因表达量。【结果】各日龄组雏鸭肝脏病毒载量均显著高于回肠(P<0.05),且7日龄雏鸭肝脏病毒载量显著高于14和21日龄(P<0.05)。雏鸭血浆中天冬氨酸转氨酶(AST)活性和总胆固醇(CHOL)水平在对照组随日龄增加而显著下降(P<0.05);DHAV-3感染后,7日龄攻毒组雏鸭血浆中CHOL水平相较于对照组显著降低(P<0.05),而14、21日龄则显著升高(P<0.05),同时伴随免疫球蛋白Y(IgY)水平显著升高(P<0.05)。胆汁酸代谢呈现组织特异性调控,对照组雏鸭TBA含量在肝脏中随日龄增加而减少,而在回肠中则随日龄增加而增加;DHAV-3感染后,7日龄攻毒组雏鸭肝脏和回肠中TBA含量均显著下降(P<0.05),14日龄呈现肝升/肠降的逆向调控(P<0.05),21日龄则呈现双组织同步升高(P<0.05)。胆汁分泌通路相关基因胆固醇-7α-羟化酶(cholesterol-7 α-hydroxyase,CYP7A1)、三磷酸腺苷结合盒转运体G5(ATP binding cassette transporter G5,ABCG5)和ABCG8在对照组雏鸭肝脏中随日龄增长显著上调(P<0.05);DHAV-3感染后,CYP7A1基因转录水平在14、21日龄鸭显著下调(P<0.05),ABCG5和ABCG8基因在7、14日龄鸭回肠显著上调(P<0.05),而在14日龄肝脏中下调(P<0.05);法尼醇X受体(farnesoid X recptor,FXR)基因表达量在对照组雏鸭肝脏中随日龄增长显著上调(P<0.05),在回肠中则显著下调(P<0.05),攻毒后21日龄雏鸭肝脏FXR基因和14日龄雏鸭回肠FXR基因较对照组显著下调(P<0.05)。【结论】本研究描述了北京鸭感染DHAV-3后宿主代谢与免疫应答的日龄依赖性特征,首次阐明DHAV-3感染通过干扰胆汁分泌代谢通路诱发日龄依赖性病理损伤,为解析鸭病毒性肝炎的日龄易感性提供了代谢-免疫交叉调控新视角,同时提示核受体介导的胆汁酸负反馈途径可能是探究DHAV-3感染的日龄依赖性机制的关键线索。 展开更多
关键词 日龄 dhav-3 肠肝轴 胆汁酸
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DHAV-3弱毒活疫苗株(HB80株)与野毒株鉴别检测的RT-PCR-RFLP方法的建立
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作者 傅秋玲 万春和 +13 位作者 焦文龙 韩相敏 程龙飞 陈珍 赖志 陈红梅 梁齐章 江南松 刘荣昌 施少华 陈翠腾 苏敬良 黄瑜 傅光华 《中国预防兽医学报》 北大核心 2025年第7期691-696,共6页
为建立一种能快速、简便、准确鉴别检测我国鸭3型甲肝病毒(DHAV-3)野毒株与弱毒活疫苗HB80株的方法,本研究根据DHAV-3野毒株及HB80株的2A基因序列差异片段设计并合成一对特异性引物,经反应条件的优化,初步建立了鉴别检测我国DHAV-3野毒... 为建立一种能快速、简便、准确鉴别检测我国鸭3型甲肝病毒(DHAV-3)野毒株与弱毒活疫苗HB80株的方法,本研究根据DHAV-3野毒株及HB80株的2A基因序列差异片段设计并合成一对特异性引物,经反应条件的优化,初步建立了鉴别检测我国DHAV-3野毒株与HB80株的反转录聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(RTPCR-RFLP)方法。利用该方法检测DHAV-3野毒株和疫苗株,以及DHAV-1、鸭3型星状病毒、H9亚型禽流感病毒、禽坦布苏病毒、鸭瘟病毒、鸭3型腺病毒、鸭呼肠孤病毒和番鸭细小病毒,结果显示该方法仅能特异性扩增DHAV-3(包括野毒株和疫苗株)的682 bp片段,且仅DHAV-3野毒株的RT-PCR产物(682 bp片段)能够被Apa I酶切为444 bp和238 bp两个片段。将DHAV-3的RNA 10倍倍比稀释(1.7×10^(6)拷贝/μL~1.7×10^(1)拷贝/μL)后作为模板,利用该方法检测,结果显示该方法能够检出DHAV-3 RNA的最低浓度为170拷贝/μL。重复性结果显示,该方法对3个不同浓度DHAV-3野毒株和HB80株RNA的检测结果均一致。利用该方法和常规RT-PCR方法同时对疑似临床鸭肝炎组织、实验感染DHAV-3野毒株(HB株)和免疫DHAV-3活疫苗株鸭组织等10^(1)份样品检测,结果显示两者检测结果的符合率为100%。本研究首次建立了能特异性鉴别检测DHAV-3野毒株与我国弱毒活疫苗株的RT-PCR-RFLP方法,为我国鸭DHAV-3感染的防控提供了技术支撑。 展开更多
关键词 鸭3型甲肝病毒 野毒株 弱毒疫苗株 聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性方法 鉴别
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绞股蓝皂苷及其磷酸化修饰物体外抗DHAV作用的比较 被引量:5
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作者 白景英 韩开顺 +6 位作者 杜红旭 熊文 张伟 明珂 王金丽 袁文娟 刘家国 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期978-985,共8页
采用三聚磷酸钠和三偏磷酸钠法制备磷酸化绞股蓝皂苷(pGP),然后运用体外细胞培养法比较研究绞股蓝皂苷(GP)和pGP抗DHAV感染鸭胚肝细胞(DEH)的作用。通过MTT法测定了GP和pGP在DEH上的安全质量浓度,并采用先加药物后接种病毒、先... 采用三聚磷酸钠和三偏磷酸钠法制备磷酸化绞股蓝皂苷(pGP),然后运用体外细胞培养法比较研究绞股蓝皂苷(GP)和pGP抗DHAV感染鸭胚肝细胞(DEH)的作用。通过MTT法测定了GP和pGP在DEH上的安全质量浓度,并采用先加药物后接种病毒、先接种病毒后加药物和药物与病毒同时感作3种加药方式观察了GP和pGP对DHAV(duck hepatitis A virus)感染DEH的影响。为了进一步验证药物的抗病毒效果,采用实时荧光定量PCR方法比较分析了最有效药物浓度的GP和pGP对DHAV在DEH上的吸附、复制和释放的影响。结果显示:GP和pGP在一定质量浓度下均能促进DEH的生长;GP和pOP都具有较好的体外抗DHAV的作用,且在先加药后加毒和先加毒后加药作用方式下,pGP的抗DHAV的作用效果优于GP;在先加药后加病毒作用方式时,GP和pGP均能有效抑制DHAV的吸附;在先加病毒后加药作用方式时,GP和pGP对病毒吸附鸭胚肝细胞没有明显的作用,但能有效抑制DHAV的复制和释放,且pGP的抑制效果优于GP。结果表明:磷酸化修饰显著提高了GP的抗DHAV作用,pGP有希望被开发成一种新型抗DHAV药物。 展开更多
关键词 dhav 绞股蓝皂苷 磷酸化修饰 抗病毒活性
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DHAV-3 VP1蛋白优势抗原区的初步鉴定 被引量:2
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作者 崔嘉琦 张雪莲 +5 位作者 刘悦 戚海惠 张忠 张桂红 王君伟 马波 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第9期53-57,共5页
为了研究鸭甲肝病毒3型(DHAV-3)VP1蛋白的优势抗原区,试验根据DHAV-3 VP1基因序列设计4对特异性表达引物,用PCR获得VP1-a^d基因片段,并在p ET-30a(+)/Rosetta(DE3)p LysS系统中进行原核表达;经IPTG诱导重组蛋白获得表达,用Ni-NTA柱亲和... 为了研究鸭甲肝病毒3型(DHAV-3)VP1蛋白的优势抗原区,试验根据DHAV-3 VP1基因序列设计4对特异性表达引物,用PCR获得VP1-a^d基因片段,并在p ET-30a(+)/Rosetta(DE3)p LysS系统中进行原核表达;经IPTG诱导重组蛋白获得表达,用Ni-NTA柱亲和层析获得纯化的重组蛋白;同时以DHAV-3病毒为免疫原制备鼠抗DHAV-3多克隆抗体,通过I-ELISA和Westernblot初步鉴定。结果表明:p ET-30a-VP1-a、p ET-30a-VP1-b、p ET-30a-VP1-c和p ET-30a-VP1-d与鼠抗DHAV-3多克隆抗体都发生反应,抗原量相同的情况下VP1-c和VP1-d段显色较VP1-a和VP1-b深,说明这两段反应性相对较强;4种截短蛋白与鸭抗DHAV-3阳性血清进行反应,只有p ET-30a-VP1-c显色。说明VP1-c免疫原性较强,DHAV-3 VP1蛋白的90~175 aa为其优势抗原区。 展开更多
关键词 鸭甲肝病毒3型(dhav-3) VPL 表达 多克隆抗体 优势抗原区
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芒果苷抗DHAV-1致鸭胚肝细胞炎性损伤的研究 被引量:1
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作者 孙伟翔 秦枫 +6 位作者 袁亚梅 卜潇 张力 吴双 林梦舟 吴植 朱善元 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第11期4485-4494,共10页
【目的】探究芒果苷(mangiferin,Man)对鸭甲型肝炎病毒1型(Duck hepatitis A virus-1,DHAV-1)致鸭胚肝细胞(DEHCs)炎性损伤的影响。【方法】从14日龄SPF级麻鸭鸭胚肝脏组织分离原代DEHCs,用含不同浓度芒果苷(0、5、10、20、40、80和160... 【目的】探究芒果苷(mangiferin,Man)对鸭甲型肝炎病毒1型(Duck hepatitis A virus-1,DHAV-1)致鸭胚肝细胞(DEHCs)炎性损伤的影响。【方法】从14日龄SPF级麻鸭鸭胚肝脏组织分离原代DEHCs,用含不同浓度芒果苷(0、5、10、20、40、80和160μmol/L)的培养液培养48 h后,通过CCK-8法检测其安全浓度范围;用安全浓度的芒果苷培养DEHCs 12、24和48 h后,检测培养液上清中乳酸脱氢酶(LDH)的活力,判定芒果苷对DEHCs的毒性作用。将DEHCs分为对照组(Mock)、模型组(Model)、芒果苷组(Man10、Man20和Man40)和利巴韦林组(Rib),每组3个重复,所有组细胞血清饥饿培养12 h后,Mock组加入含10%胎牛血清(FBS)的DMEM培养基,Model、Man10、Man20、Man40和Rib组用DHAV-1(MOI=1.0)攻毒2 h后,Model组更换为含10%FBS的DMEM培养基,Man10、Man20、Man40培养基中分别添加10、20和40μmol/L芒果苷,Rib组添加1μmol/L利巴韦林。48 h后收集各组细胞,用比色法检测丙二醛(MDA)含量及过氧化氢酶(CAT)、总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)、总一氧化氮合酶(T-NOS)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性;免疫荧光(IF)法检测DHAV-1在各组DEHCs中的分布情况;Western blotting法检测NLRP3/Pro-Caspase1/IL-1β通路蛋白的表达情况。提取2日龄SPF麻鸭的新鲜全血,分离鸭外周血单个核细胞(duPBMCs),duPBMCs分组及处理同DEHCs,ELISA法检测各组duPBMCs上清液中白介素8(IL-8)和IL-1β的含量。【结果】与0μmol/L芒果苷组相比,80和160μmol/L芒果苷组细胞的增殖能力显著降低(P<0.05),因此5~40μmol/L芒果苷为处理DEHCs的安全给药浓度。20和40μmol/L芒果苷处理48 h细胞上清液中LDH活力显著低于处理12和24 h(P<0.05),20和40μmol/L芒果苷处理12和24 h细胞上清液中LDH活力显著高于5和10μmol/L芒果苷处理(P<0.05),各浓度芒果苷处理48 h细胞上清液中LDH活力均差异不显著(P>0.05),故48 h为最适处理时间。与Mock组相比,Model组DEHCs中CAT、T-AOC、SOD和GSH-Px活性均显著降低(P<0.05),DEHCs中MDA含量、T-NOS活性、DHAV-1拷贝数、DHAV-1阳性率、NLRP3表达量及duPBMCs中IL-8、IL-1β分泌量均显著升高(P<0.05)。与Model组相比,Man10、Man20和Man40组DEHCs中CAT、T-AOC、SOD和GSH-Px活性均显著提高(P<0.05),DEHCs中MDA含量、T-NOS活性、DHAV-1拷贝数、DHAV-1阳性率、NLRP3表达量及duPBMCs中IL-8、IL-1β分泌量均显著降低(P<0.05)。【结论】芒果苷可通过增加抗氧化能力、降低DHAV-1的复制水平、抑制NLRP3通路的激活、降低促炎细胞因子的释放抗DHAV-1感染DEHCs造成的炎性损伤。 展开更多
关键词 芒果苷 鸭甲型肝炎病毒1型(dhav-1) 鸭胚肝细胞 鸭外周血单个核细胞
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一种基于VP0蛋白检测DHAV(1型和3型)血清抗体的间接ELISA的建立及应用 被引量:2
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作者 马波 戚海惠 +7 位作者 张文晶 陈浩田 张琪 常蕊 刘悦 张雪莲 张桂红 王君伟 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期245-251,共7页
为建立一种快速检测鸭甲肝病毒(DHAV)1型和3型(DHAV-1、DHAV-3)血清抗体的方法,本研究诱导表达了DHAV-1、DHAV-3重组蛋白VP0、VP1、VP3,并采用ELISA方法比较了3者的反应原性,结果显示DHAV-1 VP0更适合作为检测DHAV-1、DHAV-3血清抗体的... 为建立一种快速检测鸭甲肝病毒(DHAV)1型和3型(DHAV-1、DHAV-3)血清抗体的方法,本研究诱导表达了DHAV-1、DHAV-3重组蛋白VP0、VP1、VP3,并采用ELISA方法比较了3者的反应原性,结果显示DHAV-1 VP0更适合作为检测DHAV-1、DHAV-3血清抗体的通用型诊断抗原。经各反应条件优化,建立了一种基于DHAV-1 VP0重组蛋白的可同时检测DHAV-1、DHAV-3血清抗体的间接ELISA方法。优化的主要反应条件为:抗原包被浓度为0.25μg/m L,待检血清稀释度为1100,山羊抗鸭HRP-IgG 1400稀释。该方法特异性较强,只与DHAV-1、DHAV-3阳性血清反应,与鸭源小鹅瘟病毒(GPV)、鸭病毒性肠炎病毒(DEV)、H9N2亚型禽流感病毒(H9N2 AIV)、鸭坦布苏病毒(DTMUV)等阳性血清均无交叉反应;敏感性为1320;批内变异系数小于4%,批间变异系数小于6%;与商品化的ELISA抗体检测试剂盒比较,二者阳性符合率为93.3%,阴性符合率为88.9%,总符合率为95.7%,且该方法可用于临床血清样本的检测。本研究为检/监测DHAV血清抗体水平提供了技术手段。 展开更多
关键词 鸭甲型肝炎病毒 VP0蛋白 ELISA 免疫反应性
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DHAV-3结构蛋白(VP0、VP3、VP1)免疫原性及免疫保护性比较
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作者 张亚如 门嘉琪 +7 位作者 于李丹依 常蕊 李洪涛 张文龙 高明春 曹永生 马波 王君伟 《东北农业大学学报》 CSCD 北大核心 2024年第8期181-189,共9页
为比较DHAV-3结构蛋白免疫保护性差异,利用原核表达系统表达重组蛋白,制备鸭抗DHAV-3-VP0、-VP3、-VP1多克隆抗体,并测定其中和效价;以制备的r-DHAV-3结构蛋白为免疫原免疫SPF鸭后攻毒,通过保护率、组织病理学分析及病毒载量,评价DHAV-3... 为比较DHAV-3结构蛋白免疫保护性差异,利用原核表达系统表达重组蛋白,制备鸭抗DHAV-3-VP0、-VP3、-VP1多克隆抗体,并测定其中和效价;以制备的r-DHAV-3结构蛋白为免疫原免疫SPF鸭后攻毒,通过保护率、组织病理学分析及病毒载量,评价DHAV-3的3种结构蛋白免疫原性及免疫保护性差异。结果表明:鸭抗DHAV-3-VP0、-VP3、-VP1多克隆抗体ELISA效价分别为1:102 400、1:51 200、1:204 800;中和效价以鸭抗DHAV-3-VP1多克隆抗体最高为1:178,VP3次之为1:149,VP0中和效价最低为1:53;rDHAV-3-optiVP1免疫组保护率为60%;r-DHAV-3-VP0、r-DHAV-3-VP3免疫组保护率为40%。所有免疫组肝脏组织病理损伤程度及肝脏、脾脏病毒载量均显著低于对照组。DHAV-3的3种结构蛋白免疫保护性以VP1最强,VP3、VP0次之。 展开更多
关键词 dhav-3 结构蛋白 多克隆抗体 中和效价 免疫保护
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DHAV-33D蛋白单克隆抗体制备及其DAS-ELISA检测方法的建立 被引量:1
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作者 冯旭东 伍琳楠 +7 位作者 陈天泽 赵梦茹 刘言言 周学慧 杨晓伟 郁蕾 张立武 赵光伟 《中国兽医学报》 CSCD 北大核心 2024年第12期2556-2563,2578,共9页
为实现鸭甲型肝炎病毒3型(DHAV-3)的快速检测,本试验首先对DHAV-3的非结构蛋白3D进行原核表达,纯化后免疫BALB/c小鼠,四免后取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)融合制备单克隆抗体,进而利用单克隆抗体建立双抗夹心ELISA(DAS-ELISA)检测方... 为实现鸭甲型肝炎病毒3型(DHAV-3)的快速检测,本试验首先对DHAV-3的非结构蛋白3D进行原核表达,纯化后免疫BALB/c小鼠,四免后取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)融合制备单克隆抗体,进而利用单克隆抗体建立双抗夹心ELISA(DAS-ELISA)检测方法,评估其灵敏性、特异性和重复性,最后将所建方法应用于临床样本的检测,并与RT-PCR方法进行符合性验证。结果显示:DHAV-33D蛋白在BL21(DE3)中高效表达,经Western blot验证,纯化后的蛋白其特异性良好;细胞融合后经3次亚克隆,成功筛选到6株杂交瘤细胞,分别命名为1A3、1B6、1C7、1D9、2A1和3A9,抗体亚型鉴定结果显示1A3为IgG2b,1B6为IgG2a,3A9为IgG3,1C7、1D9和2A1均为IgG1;经筛选,将1B6和1A3两株亲和性高的单抗分别作为捕获抗体与检测抗体,建立DAS-ELISA检测方法,优化反应条件后确定捕获抗体1B6最佳包被质量浓度为1×10^(-3) g/L,检测抗体1A3的最佳稀释度为1∶1000,阴阳临界值(cut-off)为0.256;灵敏性试验显示该方法对3D蛋白的最低检测限度为4.0×10^(-4) g/L;重复性试验显示,该方法批内、批间变异系数(Cv)均小于9%,重复性好;特异性试验显示,该方法对鸭腺病毒(DAdV)、番鸭细小病毒(MDPV)、鸭圆环病毒(DuCV)、鸭瘟病毒(DPV)、鸭呼肠孤病毒(DRV)、鸭疫里默氏杆菌(RA)病原无特异性反应,但与鸭甲型肝炎病毒1型(DHAV-1)具有交叉反应,可以同时检测出DHAV-3与DHAV-1病原;应用该试验建立的DASELISA方法与RT-PCR检测方法同时对186份临床样本进行检测,DAS-ELISA方法可同时识别DHAV-1和DHAV-3,且与RT-PCR检测方法的符合率为98.9%。结果表明,本试验建立的DAS-ELISA方法重复性好、灵敏性高,可用于DHAV-1与DHAV-3的诊断,为我国鸭甲型肝炎的流行病学调查及防控提供了技术支撑。 展开更多
关键词 dhav-3 单克隆抗体 DAS-ELISA 3D蛋白 检测方法
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北京鸭DHAV-3抗性与易感品系的脂质轮廓鉴定与分析
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作者 常卓 梁素芸 +6 位作者 王帅钦 杨宇泽 薛振华 赵春颖 林逍然 路永强 侯水生 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期2253-2260,共8页
【目的】试验旨在研究抗鸭甲肝病毒基因3型(Duck hepatitis A virus genotype 3,DHAV-3)的北京鸭专门化品系(即抗性品系Z7-R)与DHAV-3易感品系(Z7-S)的脂质代谢轮廓,并筛选品系间差异脂质标志物。【方法】选取2日龄Z7系DHAV-3抗性北京... 【目的】试验旨在研究抗鸭甲肝病毒基因3型(Duck hepatitis A virus genotype 3,DHAV-3)的北京鸭专门化品系(即抗性品系Z7-R)与DHAV-3易感品系(Z7-S)的脂质代谢轮廓,并筛选品系间差异脂质标志物。【方法】选取2日龄Z7系DHAV-3抗性北京鸭和易感北京鸭各6只,采集血液与肝脏组织,进行血液生化指标测定与基于液相色谱-质谱联用技术(LC-MS)的非靶向肝脏脂质组检测。采用t检验、偏最小二乘分析(PLS-DA)和差异倍数(FC)综合筛选品系间显著差异脂质。【结果】Z7-R系北京鸭血浆总胆固醇、低密度脂蛋白和磷脂含量均显著高于Z7-S系(P<0.05)。脂质组分析共鉴定到1 532个脂质代谢物,涵盖了脂肪酰(FA)、甘油酯(GL)、甘油磷脂(GP)、鞘脂(SP)、固醇脂(ST)5个大类。共筛选到84个显著差异脂质,其中甘油酯类主要为甘油三酯(TG),且Z7-R系含量均高于Z7-S系(P<0.05);甘油磷脂类主要为溶血磷脂酰胆碱(LPC)、溶血磷脂酰乙醇胺(LPE)和游离脂肪酸(FFAs),且Z7-R系含量均低于Z7-S系(P<0.05)。共筛选到10个显著差异的脂质显著富集到鞘脂代谢、甘油磷脂代谢、甘油酯代谢、亚油酸代谢和α-亚麻酸代谢通路中。【结论】脂质组学技术可用于区分北京鸭Z7-R系与Z7-S系,筛选到的10个显著差异脂质物质可作为潜在的DHAV-3抗性与易感性状相关生物标志物。 展开更多
关键词 北京鸭 鸭甲肝病毒基因3型 脂质组 代谢
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鸭甲肝病毒基因3型弱毒株与其返强毒株的生物学特性比较 被引量:1
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作者 胡晓阳 黄晶晶 +1 位作者 彭铎 张大丙 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第9期4284-4290,共7页
【目的】探究鸭甲肝病毒基因3型(Duck hepatitis A virus genotype 3,DHAV-3)弱毒株毒力返强的机制,通过雏鸭试验和基因组序列分析对DHAV-3弱毒株与其返强毒株的生物学特性进行比较。【方法】用DHAV-3分离株YDF的第140代鸡胚化弱毒株Y14... 【目的】探究鸭甲肝病毒基因3型(Duck hepatitis A virus genotype 3,DHAV-3)弱毒株毒力返强的机制,通过雏鸭试验和基因组序列分析对DHAV-3弱毒株与其返强毒株的生物学特性进行比较。【方法】用DHAV-3分离株YDF的第140代鸡胚化弱毒株Y140及其第4代雏鸭传代毒株Y140/4R接种1日龄北京鸭,观察临床症状、病理变化、发病率和死亡率,用实时荧光定量PCR检测雏鸭肝脏、肾脏和血清中的病毒RNA水平。对Y140株及其第1~4代雏鸭传代病毒基因组序列进行测序分析,探究与毒力返强有关的分子机制。【结果】接种Y140株的雏鸭均未出现临床症状和病理变化,接种Y140/4R株的雏鸭出现鸭病毒性肝炎的特征性临床症状和大体病变,死亡率为40%。与Y140株相比,Y140/4R株感染后3 d存活鸭肝脏和肾脏中病毒RNA水平显著升高(P<0.05),感染后2~3 d死亡鸭肝脏和肾脏中病毒RNA水平极显著升高(P<0.01)。感染后2~4 d,Y140/4R株产生的病毒血症水平显著高于Y140株(P<0.05)。基因组测序结果显示,从第2代开始,2C、3D蛋白和3′-非翻译区分别发生I149V、V236I和A25G突变;从第3代开始,VP1蛋白发生E202D突变。【结论】雏鸭传代可驱动DHAV-3弱毒株基因组发生突变,导致毒力变异株出现,使病毒在靶器官的复制能力以及形成病毒血症的能力显著提高。 展开更多
关键词 鸭甲肝病毒基因3型(dhav-3) 弱毒株 毒力返强 复制 病毒血症
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表达1型和3型鸭甲型肝炎病毒VP1基因重组新城疫病毒的构建及其免疫原性 被引量:7
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作者 郑文卿 宋敏训 +6 位作者 李建亮 黄兵 李玉峰 于可响 刘存霞 马秀丽 崔言顺 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期1641-1647,共7页
为进一步研发安全有效的鸭甲型肝炎病毒(DHAV)多价疫苗,本研究以新城疫病毒(NDV)LaSota弱毒疫苗株为载体,构建出共表达DHAV-1和-3型VP1基因的重组病毒rLS-1VP1-2A-3VP1,并对其毒力、生物学特性进行鉴定。通过间接免疫荧光试验(IFA)验证D... 为进一步研发安全有效的鸭甲型肝炎病毒(DHAV)多价疫苗,本研究以新城疫病毒(NDV)LaSota弱毒疫苗株为载体,构建出共表达DHAV-1和-3型VP1基因的重组病毒rLS-1VP1-2A-3VP1,并对其毒力、生物学特性进行鉴定。通过间接免疫荧光试验(IFA)验证DHAV-1和-3型VP1蛋白在细胞内能够有效表达。利用Western blot进一步验证重组病毒产生的中和抗体能和DHAV-1和DHAV-3VP1表达蛋白发生较强的反应。重组病毒rLS-1VP1-2A-3VP1保持了原重组疫苗株rLS-RFP对鸡胚的高滴度生长适应和低致病的特性。将重组病毒rLS-1VP1-2A-3VP1免疫种鸭1次,通过中和试验检测该重组病毒能够在鸭体内产生针对DHAV-1和DHAV-3的中和抗体,平均效价分别为1∶18.17和1∶16.60。本研究结果表明重组病毒rLS-1VP1-2A-3VP1具有作为鸭肝炎重组病毒活载体疫苗用于种鸭的潜力。 展开更多
关键词 鸭甲型肝炎病毒(dhav) dhav-1 dhav-3 反向遗传操作 重组新城疫病毒
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鸭坦布苏病毒、基因C型鸭甲肝病毒、鸭圆环病毒一步法多重PCR鉴别检测方法的建立及应用 被引量:1
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作者 艾伟昌 刘艳美 陈振辉 《畜牧与兽医》 北大核心 2025年第2期118-123,共6页
旨在建立一种快速鉴别检测鸭坦布苏病毒(DTMUV)、基因C型鸭甲肝病毒(DHAV-C)、鸭圆环病毒(DuCV)的多重PCR方法。参考GenBank中DTMUV E基因序列、DHAV-C VP1基因序列、DuCV Cap基因序列分别设计特异性检测引物,建立鉴别检测DTMUV、DHAV-C... 旨在建立一种快速鉴别检测鸭坦布苏病毒(DTMUV)、基因C型鸭甲肝病毒(DHAV-C)、鸭圆环病毒(DuCV)的多重PCR方法。参考GenBank中DTMUV E基因序列、DHAV-C VP1基因序列、DuCV Cap基因序列分别设计特异性检测引物,建立鉴别检测DTMUV、DHAV-C、DuCV的一步法多重PCR。该方法对DTMUV、DHAV-C、DuCV分别扩增出720、480和250 bp片段,对基因A型鸭甲肝病毒(DHAV-A)、新城疫病毒(NDV)、H9亚型禽流感病毒(AIV-H9)、鸭瘟病毒(DEV)、鸭细小病毒(DPV)、鸭呼肠孤病毒(MDRV)均无扩增产物;对DTMUV、DHAV-C、DuCV最低检测限度分别为3.8×10^(-5)、5.4×10^(-5)和6.2×10^(-5)μg/μL;与DTMUV、DHAV-C、DuCV单项PCR方法的符合率均为100%;该方法检测290份临床病料样品,DTMUV阳性率为8.97%,DHAV-C阳性率为10.69%,DuCV阳性率为2.07%,DTMUV/DuCV混合感染阳性率为4.14%,DHAV-C/DuCV混合感染阳性率为3.10%,DTMUV/DHAV-C/DuCV混合感染阳性率为0.34%。结论:成功建立了一种能同时鉴别检测DTMUV、DHAV-C、DuCV的一步法多重PCR,可用于临床中3种病毒单独感染或混合感染的鉴别检测和流行病学调查。 展开更多
关键词 鸭坦布苏病毒 基因C型鸭甲肝病毒 鸭圆环病毒 多重PCR 鉴别
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检测鸭1型甲肝病毒抗体间接ELISA方法的建立 被引量:3
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作者 刘伟 傅秋玲 +7 位作者 黄瑜 傅光华 陈珍 陈红梅 程龙飞 万春和 施少华 林建生 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2015年第6期10-13,共4页
为了建立快速检测鸭1型甲肝病毒亚型(DHAV-1a)抗体的血清学方法,本试验利用纯化浓缩的鸭1型甲肝病毒亚型MPZJ1206株病毒作为包被抗原,建立了检测DHAV-1a血清抗体的间接ELISA方法,并对各种检测条件进行了优化。结果表明,该方法简单、快... 为了建立快速检测鸭1型甲肝病毒亚型(DHAV-1a)抗体的血清学方法,本试验利用纯化浓缩的鸭1型甲肝病毒亚型MPZJ1206株病毒作为包被抗原,建立了检测DHAV-1a血清抗体的间接ELISA方法,并对各种检测条件进行了优化。结果表明,该方法简单、快速、特异性强、重复性好、稳定性高,可用于鸭群DHAV-1a感染的血清学监测及其抗体消长规律的检测。 展开更多
关键词 鸭1型甲肝病毒亚型(dhav-1a) 间接ELISA 抗体检测
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鸭甲肝病毒3型2012年山东分离株VP1基因的序列分析 被引量:8
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作者 徐倩 陈琳琳 +5 位作者 张瑞华 杨蕾 谢之景 朱岩丽 姜世金 司兴奎 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期522-528,共7页
为揭示近年来鸭甲肝病毒3型(DHAV-3)中国分离株VP1基因的遗传变异规律,本研究对2012年从山东省分离到的13株DHAV-3的VP1基因分别进行PCR扩增、序列测序与分析。结果显示,13株DHAV-3的VP1基因均由720个核苷酸组成,共编码240个氨基酸,核... 为揭示近年来鸭甲肝病毒3型(DHAV-3)中国分离株VP1基因的遗传变异规律,本研究对2012年从山东省分离到的13株DHAV-3的VP1基因分别进行PCR扩增、序列测序与分析。结果显示,13株DHAV-3的VP1基因均由720个核苷酸组成,共编码240个氨基酸,核苷酸序列和氨基酸序列同源性分别为94.6%~99.9%和95.0%~100%。与GenBank中公布的31株DHAV-3的VP1基因的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为92.5%~100%和90.8%~100%。系统进化分析显示,DHAV-3可分为两个基因型,其中除疫苗毒B63之外所有中国分离株均属于GⅠ型,越南分离毒株主要属于GⅡ型S1亚型,而韩国分离株组成GⅡ型中的S2亚型,具有明显的地域特征。 展开更多
关键词 dhav-3 VP1基因 序列分析 GENBANK
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检测鸭甲型肝炎病毒3型的免疫组织化学方法的建立和应用 被引量:4
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作者 柯晨 程安春 +7 位作者 汪铭书 贾仁勇 朱德康 陈舜 刘马峰 刘菲 杨乔 孙昆峰 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期1013-1020,共8页
收集鸭甲型肝炎病毒3型(DHAV3)接种10日龄鸭胚后死亡胚体的尿囊液,用差速离心法获得纯化的DHAV3抗原免疫家兔后制备家兔抗DHAV3超免疫血清,提取家兔抗DHAV3IgG,成功建立和优化了检测DHAV3的免疫组织化学方法。该法能够检测DHAV3感染雏... 收集鸭甲型肝炎病毒3型(DHAV3)接种10日龄鸭胚后死亡胚体的尿囊液,用差速离心法获得纯化的DHAV3抗原免疫家兔后制备家兔抗DHAV3超免疫血清,提取家兔抗DHAV3IgG,成功建立和优化了检测DHAV3的免疫组织化学方法。该法能够检测DHAV3感染雏鸭肝组织的病毒抗原,阳性信号主要分布于受感染细胞的细胞质,而用它检测鸭瘟病毒、鸭疫里氏杆菌、大肠杆菌、肠炎沙门菌、多杀性巴氏杆菌感染发病死亡雏鸭和健康雏鸭时则呈现阴性反应。应用该方法对临床确诊并经福尔马林溶液保存的5份DHAV3感染雏鸭的肝、脾、肾、小肠、法氏囊、哈氏腺、胸腺的样品进行检测,结果均为阳性。以上试验结果表明,该方法具有良好的特异性,可用于DHAV3感染雏鸭的临床诊断和福尔马林溶液固定样品的回顾性诊断。 展开更多
关键词 鸭甲型肝炎病毒3型(dhav3) 免疫组织化学方法 诊断
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两株1型鸭甲肝病毒山东分离株的鉴定与致病性分析 被引量:4
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作者 王宇飞 孙伟 +7 位作者 陈佶慧 刘芹防 滕巧泱 杨健美 苑纯秀 李泽君 李雪松 关平原 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2021年第1期26-30,共5页
鸭病毒性肝炎(DVH)是危害雏鸭的一种急性高度致死性传染病,引发DVH的主要病原体为鸭甲肝病毒(DHAV),其中1型鸭肝炎病毒在中国各省流行最广。本研究于2018年从山东某养鸭场的病料中分离得到两株DHAV,经分子生物学鉴定、序列比对和进化树... 鸭病毒性肝炎(DVH)是危害雏鸭的一种急性高度致死性传染病,引发DVH的主要病原体为鸭甲肝病毒(DHAV),其中1型鸭肝炎病毒在中国各省流行最广。本研究于2018年从山东某养鸭场的病料中分离得到两株DHAV,经分子生物学鉴定、序列比对和进化树分析,鉴定引起雏鸭患病的病原体为DHAV-1。经过纯化后,对SPF雏鸭进行致病性试验,用鸭胚滴定和荧光定量的方法测定脏器病毒含量,致病性分析结果显示,两株DHAV-1对雏鸭的致病性不同,SD37毒株引起雏鸭致死率为100%,而SD63引起雏鸭致死率为12.5%,这可能与VP1氨基酸差异有关。本研究通过对山东地区两株DHAV-1的鉴定和致病性研究,为我国DHAV的分子流行病学、防治以及疫苗研制提供了材料和理论指导。 展开更多
关键词 鸭肝炎病毒 dhav-1 鉴定 致病性
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鸭甲型肝炎病毒的研究进展 被引量:3
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作者 张帆帆 王维 +2 位作者 饶煜玲 韦启鹏 杨群 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期1350-1356,共7页
鸭病毒性肝炎(duck viral hepatitis, DVH)主要是由鸭甲型肝炎病毒(duck hepatitis A virus, DHAV)引起的一种高度接触性和致死性的传染病,以肝脏出血肿大、肝空泡增多和神经症状为基本特征。近年来,病毒变异导致其致病性的改变为该病... 鸭病毒性肝炎(duck viral hepatitis, DVH)主要是由鸭甲型肝炎病毒(duck hepatitis A virus, DHAV)引起的一种高度接触性和致死性的传染病,以肝脏出血肿大、肝空泡增多和神经症状为基本特征。近年来,病毒变异导致其致病性的改变为该病的诊断和防控带来了巨大挑战。对DHAV的分子生物学特征、病毒引起的流行与传播、病理变化、致病机制以及该病的诊断与防控等方面进行综述,将为今后该病的诊断和预防提供科学依据。 展开更多
关键词 鸭甲型肝炎病毒(dhav) 流行病学 致病机制 诊断与防控
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一例鸭1型甲肝病毒和11型鸭疫里默氏杆菌混合感染的诊断及其病原的分离鉴定 被引量:9
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作者 陈翠腾 程龙飞 +8 位作者 傅光华 万春和 刘荣昌 傅秋玲 陈珍 朱春华 陈红梅 施少华 黄瑜 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第11期3053-3058,共6页
为确定引起2015年6月底福州仓山区某一养鸭场10日龄左右麻鸭发病死亡的病原,无菌采取病死鸭的肝脏、脾脏、脑等组织,经病毒分离、细菌分离纯化、PCR检测、血清学检测、药物敏感性试验,结果检测并分离到鸭1型甲肝病毒和11型鸭疫里默氏杆... 为确定引起2015年6月底福州仓山区某一养鸭场10日龄左右麻鸭发病死亡的病原,无菌采取病死鸭的肝脏、脾脏、脑等组织,经病毒分离、细菌分离纯化、PCR检测、血清学检测、药物敏感性试验,结果检测并分离到鸭1型甲肝病毒和11型鸭疫里默氏杆菌,该鸭1型甲肝病毒分离株与MPZJ1206株和GD株同源性最高,均为98.7%。结果表明,该病例为鸭甲肝病毒1型和11型鸭疫里默氏杆菌混合感染。 展开更多
关键词 鸭甲肝病毒1型 11型鸭疫里默氏杆菌 分离鉴定
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基于基因C型鸭甲肝病毒VP1重组蛋白的鸭甲肝病毒抗体ELISA检测方法的建立 被引量:5
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作者 杨发龙 张焕容 +2 位作者 程方明 岳华 汤承 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期1148-1153,共6页
以纯化的基因C型鸭甲肝病毒(DHAV-C)VP1重组蛋白作为包被抗原,建立检测DHAV-C抗体的间接ELISA方法。结果表明,试验的最佳条件:用pH9.6、0.05 mol·L-1的碳酸盐缓冲液将包被抗原稀释成5μg·mL-1,4℃包被过夜,抗体稀释度为1∶100... 以纯化的基因C型鸭甲肝病毒(DHAV-C)VP1重组蛋白作为包被抗原,建立检测DHAV-C抗体的间接ELISA方法。结果表明,试验的最佳条件:用pH9.6、0.05 mol·L-1的碳酸盐缓冲液将包被抗原稀释成5μg·mL-1,4℃包被过夜,抗体稀释度为1∶100,HRP酶标羊抗鸭IgG稀释度为1∶5 000,封闭液为含10%脱脂乳的0.01mol·L-1 PBS,37℃封闭2h,血清稀释液为含1%BSA的PBS,抗体反应时间为60min,酶标羊抗鸭IgG反应时间为30min,底物作用时间为15min,临界值为OD450nm≥0.474。该方法重复性好,批内变异系数为2.03%~2.95%,批间变异系数为3.28%~7.38%,与鸭圆环病毒(DUCV)、鸭乙型肝炎病毒(DHBV)、鸭瘟病毒(DPV)、新城疫病毒(NDV)、禽流感病毒(AIV)、鸭抗大肠杆菌、鸭抗金黄色葡萄球菌、鸭抗沙门菌、鸭抗禽多杀性巴氏杆菌以及鸭疫里默杆菌阳性血清无交叉反应,而与基因A型鸭甲肝病毒(DHAV-A)阳性血清有交叉反应,表明该方法可以作为检测DHAV-C和DHAV-A抗体的通用ELISA方法。与中和试验相比,阳性血清检测符合率为80%,阴性血清检测符合率为100%。初步临床应用表明:该方法可用于雏鸭母源抗体和免疫后抗体消长的检测。本研究基于DHAV-C VP1重组蛋白建立的间接ELISA方法可用于基因A型和C型鸭甲型肝炎的血清流行病学调查和抗体检测。 展开更多
关键词 基因C型鸭甲肝病毒 VP1蛋白 间接ELISA 抗体检测
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鸭1型甲肝病毒亚型的鉴定 被引量:5
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作者 傅秋玲 陈珍 +7 位作者 黄瑜 傅光华 陈翠腾 万春和 程龙飞 陈红梅 施少华 林建生 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2015年第7期36-38,共3页
为了明确引起雏鸭胰腺炎的新型鸭1型甲肝病毒(duck hepatitis A virus 1,DHAV-1)的分类地位,通过鸭胚血清交叉中和试验测定并分析其与经典的肝炎型DHAV-1的抗原相关性。经血清交叉中和试验测得抗胰腺炎型DHAV-1阳性血清对胰腺炎型DHA... 为了明确引起雏鸭胰腺炎的新型鸭1型甲肝病毒(duck hepatitis A virus 1,DHAV-1)的分类地位,通过鸭胚血清交叉中和试验测定并分析其与经典的肝炎型DHAV-1的抗原相关性。经血清交叉中和试验测得抗胰腺炎型DHAV-1阳性血清对胰腺炎型DHAV-1、经典的肝炎型DHAV-1的中和效价分别为1∶169.8、1∶91.2,而抗肝炎型DHAV-1阳性血清对经典的肝炎型DHAV-1、胰腺炎型DHAV-1的中和效价分别为1∶125.9、1∶89.1。参照同属小RNA病毒科的口蹄疫病毒血清型、亚型的划分标准,计算得出胰腺炎型DHAV-1与经典的肝炎型DHAV-1间的抗原亲源值(R)为0.62,介于0.32-0.7之间,表明胰腺炎型DHAV-1与经典的肝炎型DHAV-1相比其抗原性发生了较大变异,定名为鸭1型甲肝病毒亚型(DHAV-1a)。 展开更多
关键词 鸭1型甲肝病毒 胰腺炎 抗原性变异 亚型
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