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青花菜雄性不育相关基因BoDHAR的克隆与表达分析 被引量：7
1
作者 张国裕 康俊根 +2 位作者 张延国 程智慧 王晓武 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期751-756,共6页
以一个与甘蓝显性核不育相关的差异表达片段的序列为信息探针,通过在NCBI与TAIR网站数据库中进行同源EST序列搜索,经人工拼接、RT-PCR、PCR克隆与序列分析,获得了青花菜脱氢抗坏血酸还原酶DHARdehydroascorbatereductase基因的cDNA与DN... 以一个与甘蓝显性核不育相关的差异表达片段的序列为信息探针,通过在NCBI与TAIR网站数据库中进行同源EST序列搜索,经人工拼接、RT-PCR、PCR克隆与序列分析,获得了青花菜脱氢抗坏血酸还原酶DHARdehydroascorbatereductase基因的cDNA与DNA全长序列,命名为BoDHAR。并利用双链接头介导PCR的染色体步行技术(genomewalking)克隆了其上游644bp的5′端序列。所获的BoDHAR基因全长1486bp,存在两个内含子,DNA编码区序列633bp,编码210个氨基酸;序列分析表明BoDHAR与同源基因AT1G19570.1cDNA序列有82.3%的一致性,推导的氨基酸序列有79.6%的一致性;编码的水溶性蛋白存在多个磷酸化位点;5′端上游区存在明显的转录调控序列。半定量RT-PCR结果表明BoDHAR在可育系花蕾中的表达量明显高于不育系花蕾,在花药中的表达明显高于其它部位。 展开更多
关键词 青花菜(Brassica OLERACEA L. var. ITALICA ) dhar(dehydroascorbate reductase) 基因克隆 RT-PCR
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罗汉果果实RNA的提取及SgDHAR基因的克隆与表达 被引量：10
2
作者 韦荣昌 赵欢 +5 位作者 马小军 密克 莫长明 潘丽梅 白隆华 唐其 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期115-123,共9页
针对罗汉果果实富含酚类、多糖、油脂和蛋白质等特点,从3种常用的RNA提取方法中优选出改良Trizol法,应用该法得到的RNA纯度高(OD260/280=2.01;OD260/230=2.02)、完整性好(RIN=9.50)、得率高(260μg·g-1)。以该法提取的RNA为模板,通... 针对罗汉果果实富含酚类、多糖、油脂和蛋白质等特点,从3种常用的RNA提取方法中优选出改良Trizol法,应用该法得到的RNA纯度高(OD260/280=2.01;OD260/230=2.02)、完整性好(RIN=9.50)、得率高(260μg·g-1)。以该法提取的RNA为模板,通过RACE和RT-PCR技术克隆罗汉果脱氢抗坏血酸还原酶基因全长,其长度为1 252 bp,开放阅读框(ORF)为819 bp,命名为SgDHAR,GenBank登录号为KC907731,编码一条272个氨基酸的肽链,理论分子量为30.217 7 kD,等电点为8.76。该蛋白与GenBank中已登录的DHAR序列比对显示与黄瓜同源性最高(87%)。应用实时荧光定量PCR对SgDHAR在罗汉果不同组织及不同倍性中的表达模式分析发现,该基因主要在果实和茎中表达,其次是花,根中的表达量最低;在三倍体中的表达量为二倍体的6.83倍,推测该基因可能参与了三倍体无籽罗汉果的败育过程。 展开更多
关键词 罗汉果 改良Trizol法 dhar基因 RACE 生物信息学
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DHAR与草莓AsA积累关系及DHAR RNAi遗传转化研究 被引量：6
3
作者 张丙秀 李柱刚 +2 位作者 高媛 刘丹 高庆玉 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期1626-1632,共7页
【目的】确定草莓脱氢抗坏血酸还原酶(DHAR)酶活性与抗坏血酸(ASA)的关系,研究DHAR对AsA积累的调控作用,为筛选高AsA草莓品种育种提供理论基础。【方法】于不同时期测定草莓果实AsA含量和DHAR酶活性并进行相关性分析,构建DHAR基因RNAi... 【目的】确定草莓脱氢抗坏血酸还原酶(DHAR)酶活性与抗坏血酸(ASA)的关系,研究DHAR对AsA积累的调控作用,为筛选高AsA草莓品种育种提供理论基础。【方法】于不同时期测定草莓果实AsA含量和DHAR酶活性并进行相关性分析,构建DHAR基因RNAi植物表达载体,通过农杆菌介导法,将RNAi植物表达载体导入草莓中。【结果】草莓果实成熟过程中AsA含量呈现上升趋势,生长后期含量增幅最大。随着草莓果实的成熟,DHAR酶活性逐渐增大,在生长后期酶活性最高。构建了脱氢抗坏血酸酶基因(DHAR)的RNAi植物表达载体(Part27-IDHAR),并采用农杆菌介导法转入草莓,共获7株PCR阳性植株,初步说明目的基因已整合到草莓组织中。【结论】DHAR酶活性与AsA积累呈显著正相关,获得的转基因植株可为下一步研究提供植物材料。 展开更多
关键词 草莓 dhar ASA RNAI 遗传转化
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棉花GhDHAR2基因克隆、功能序列分析及原核表达 被引量：11
4
作者 田大鹏 葛娟 +1 位作者 石峰 李鸿彬 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期65-69,共5页
通过RT-PCR方法从棉花纤维组织中克隆得到脱氢抗坏血酸还原酶基因GhDHAR2的cDNA,该基因开放阅读框为639 bp,编码212个氨基酸的蛋白质。同源性序列对比分析显示,GhDHAR2蛋白具有较高的保守性,具有典型的功能结构域,包括GST-N家族和GST-C-... 通过RT-PCR方法从棉花纤维组织中克隆得到脱氢抗坏血酸还原酶基因GhDHAR2的cDNA,该基因开放阅读框为639 bp,编码212个氨基酸的蛋白质。同源性序列对比分析显示,GhDHAR2蛋白具有较高的保守性,具有典型的功能结构域,包括GST-N家族和GST-C-DHAR家族的功能结构域;进化树分析显示GhDHAR2和拟南芥AtDHAR2在进化关系上较近。将GhDHAR2基因连接到原核表达载体pET-28a中,将重组载体pET28a-GhDHAR2转入到表达菌株BL21(DE3)中,通过IPTG诱导表达出重组GhDHAR2蛋白,SDS-PAGE凝胶电泳分析显示重组蛋白大小约为28 kD,诱导表达的重组蛋白具有较高的DHAR活性。首次克隆了棉花GhDHAR2基因,通过结构域分析其可能的作用,并成功进行蛋白体外表达及酶活性分析。 展开更多
关键词 棉花 脱氢抗坏血酸还原酶基因克隆 原核表达 dhar酶活力
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草莓DHAR基因密码子偏好性分析 被引量：4
5
作者 刘万达 张丙秀 +3 位作者 魏媛媛 王禹 董超 朱延明 《北方园艺》 CAS 北大核心 2014年第14期92-97,共6页
以草莓为试材,运用CHIPS、CUSP和CodonW程序分析了草莓DHAR基因的密码子偏好性,并与大肠杆菌和酵母的基因组密码子偏好性及7种植物的DHAR基因密码子偏好性进行了比较,同时基于DHAR基因的密码子使用偏好性进行了系统聚类分析,以期在作物... 以草莓为试材,运用CHIPS、CUSP和CodonW程序分析了草莓DHAR基因的密码子偏好性,并与大肠杆菌和酵母的基因组密码子偏好性及7种植物的DHAR基因密码子偏好性进行了比较,同时基于DHAR基因的密码子使用偏好性进行了系统聚类分析,以期在作物遗传改良中为草莓DHAR基因选择合适的遗传转化受体及进行基因优化提供依据。结果表明:草莓DHAR基因更适合导入苹果等双子叶植物中,若要提高草莓DHAR基因在大肠杆菌或酵母中的表达水平,还需进行密码子的优化。 展开更多
关键词 草莓 dhar 密码子偏好性 聚类分析 基因表达
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普通小麦中双脱氢抗坏血酸还原酶(TaDHAR)基因的克隆与生化特性分析 被引量：7
6
作者 余春梅 杨艳萍 +5 位作者 刘鑫燕 周蓉 华梁 魏贺 丁胜杰 王道文 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期1483-1489,共7页
利用同源克隆技术从六倍体普通小麦中获得了两个不同的双脱氢抗坏血酸还原酶(TaDHAR)基因的cDNA克隆。器官表达模式分析表明,这两个TaDHAR基因(暂时命名为TaDHAR1和TaDHAR2)在小麦根、茎、叶、幼穗以及开花后10d、20d和30d的种子中均有... 利用同源克隆技术从六倍体普通小麦中获得了两个不同的双脱氢抗坏血酸还原酶(TaDHAR)基因的cDNA克隆。器官表达模式分析表明,这两个TaDHAR基因(暂时命名为TaDHAR1和TaDHAR2)在小麦根、茎、叶、幼穗以及开花后10d、20d和30d的种子中均有表达,为组成型表达基因。原生质体表达实验表明,两个基因的产物均可能定位在细胞质中。在细菌中表达并提纯了两个基因的重组蛋白。体外生化测定表明两个重组蛋白均具有将双脱氢抗坏血酸还原成抗坏血酸的能力,其最适pH为7.5,在37oC时的活性比25oC高,但25oC条件下pH6.0和7.0时,两个DHAR蛋白的活性显著不同。本研究的结果为进一步揭示TaDHAR基因在小麦抗坏血酸代谢中的生理作用奠定了基础。 展开更多
关键词 普通小麦 双脱氢抗坏血酸还原酶 抗坏血酸 双脱氢抗坏血酸 表达模式 酶活
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DHAR基因植物表达双元载体的构建及转化百合研究 被引量：3
7
作者 张栋 冯凤娟 +1 位作者 马锋旺 张燕子 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期225-229,共5页
将质粒pSB166中包含ED35s启动子、Omega元件及TNOS终止子的一段核苷酸序列定向克隆到质粒pCAMBIA1303,构建了中间表达载体,将DHAR基因与pCSB定向连接,构建了DHAR基因植物表达载体pCSB-DHAR。进而以百合叶片为受体,通过根癌农杆菌介导的... 将质粒pSB166中包含ED35s启动子、Omega元件及TNOS终止子的一段核苷酸序列定向克隆到质粒pCAMBIA1303,构建了中间表达载体,将DHAR基因与pCSB定向连接,构建了DHAR基因植物表达载体pCSB-DHAR。进而以百合叶片为受体,通过根癌农杆菌介导的方法将DHAR基因转入百合,对转基因百合进行PCR检测,初步表明DHAR基因已整合到百合基因组中。 展开更多
关键词 植物表达载体 百合 根癌农杆菌 遗传转化 dhar
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棉花GhDHAR3基因克隆、功能序列分析及烟草的遗传转化 被引量：13
8
作者 王芳 王斐 +1 位作者 孙辉 李鸿彬 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期88-93,共6页
对棉花EST数据库进行同源搜索、比对和序列拼接,经RT-PCR从陆地棉纤维组织中扩增得到脱氢抗坏血酸还原酶基因GhDHAR3的cDNA,其开放阅读框为792bp,编码由263个氨基酸组成的蛋白质。同源性比对分析显示GhDHAR3蛋白具有较高的保守性,进化... 对棉花EST数据库进行同源搜索、比对和序列拼接,经RT-PCR从陆地棉纤维组织中扩增得到脱氢抗坏血酸还原酶基因GhDHAR3的cDNA,其开放阅读框为792bp,编码由263个氨基酸组成的蛋白质。同源性比对分析显示GhDHAR3蛋白具有较高的保守性,进化树分析表明其与拟南芥AtDHAR3亲缘关系较近。利用软件进行蛋白质序列分析,GhDHAR3蛋白具有GST-N家族和GST-C-DHAR典型的结构域,分别属于硫氧还蛋白超家族和GST-C末端超家族。将GhDHAR3基因构建到植物真核表达载体pCAMBIA2300中,利用农杆菌通过叶盘法转化烟草,经PCR分子鉴定,获得了含GhDHAR3转基因烟草植株。首次克隆棉花DHAR基因,通过结构域分析其可能的作用并成功转化烟草。 展开更多
关键词 棉花 脱氢抗坏血酸还原酶 植物表达载体构建 遗传转化
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植物脱氢抗坏血酸还原酶(DHAR)研究进展 被引量：8
9
作者 侯艳霞 张文鑫 +2 位作者 杨婧 李小艳 郭艳 《农业技术与装备》 2017年第2期28-29,32,共3页
脱氢抗坏血酸还原酶是AsA-GSH循环中能够促进抗坏血酸再生的关键酶。文章从植物脱氢抗坏血酸还原酶的发现、功能及分子生物学等方面的研究进展作一综述,以期为该酶的深入研究及其合理利用提供参考。
关键词 植物 脱氢抗坏血酸还原酶 研究
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星星草脱氢抗坏血酸还原酶(PtDHAR)cDNA的克隆及表达分析 被引量：1
10
作者 聂玉哲 张晓磊 +2 位作者 许志茹 张旸 李玉花 《植物生理学通讯》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期583-588,共6页
脱氢抗坏血酸还原酶是抗坏血酸代谢循环中的关键酶,在多种植物中与抗胁迫相关。为了获得抗盐碱植物星星草中该基因序列,利用RACE技术,从星星草中克隆出脱氢抗坏血酸还原酶基因(PtDHAR)的cDNA全长序列,其GenBank登录号为HM125046。PtDHAR... 脱氢抗坏血酸还原酶是抗坏血酸代谢循环中的关键酶,在多种植物中与抗胁迫相关。为了获得抗盐碱植物星星草中该基因序列,利用RACE技术,从星星草中克隆出脱氢抗坏血酸还原酶基因(PtDHAR)的cDNA全长序列,其GenBank登录号为HM125046。PtDHAR cDNA核苷酸序列长度为987bp,开放阅读框为639bp,编码213个氨基酸。该基因编码的氨基酸序列与水稻、小麦等禾本科作物具有很高的同源性。Northern杂交分析表明,该基因在盐碱胁迫下表达量显著升高。 展开更多
关键词 星星草 脱氢抗坏血酸还原酶 基因克隆 表达分析
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3种小麦DHAR蛋白高级结构建模与功能分析 被引量：5
11
作者 王俊生 刘红占 +4 位作者 范小芳 殷贵鸿 韩玉林 周琳 赵锦慧 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期2472-2480,共9页
为揭示小麦脱氢抗坏血酸还原酶(dehydroascorbate reductase,DHAR)的序列特征与其结构和功能的关系,利用DNAman软件比较了小麦3个DHAR基因(Ta DHAR1/2/3)和蛋白质序列特性,利用生物信息软件对蛋白质结构域、亚细胞定位、谷胱甘肽结合位... 为揭示小麦脱氢抗坏血酸还原酶(dehydroascorbate reductase,DHAR)的序列特征与其结构和功能的关系,利用DNAman软件比较了小麦3个DHAR基因(Ta DHAR1/2/3)和蛋白质序列特性,利用生物信息软件对蛋白质结构域、亚细胞定位、谷胱甘肽结合位点、N-末端结构域和C-末端结构域界面残基和二级结构进行了预测,并对蛋白质三级结构、表面电位和可及性的空间分布进行了模建和比较。结果表明,小麦Ta DHAR1和Ta DHAR2蛋白质序列长度一致,均定位于细胞质中,仅存在2个氨基酸残基差异,具有完全一致的保守结构域和三级结构;Ta DHAR3定位于线粒体中,与前2者在核酸与蛋白质序列上差异较大,但其保守域、谷胱甘肽结合位点氨基酸残基、假定的N-末端结构域界面残基和C末端结构域界面残基与前2者几乎完全一致,因此,3者可能执行相同的功能。模建的Ta DHAR1/2/3的三级结构均符合立体化学品质规则,其中Ta DHAR1/2的N端形成βαβαββα结构,Ta DHAR3的N端可能形成αββαβαβββ结构,3者在C端均形成β束结构,属于α+β球形蛋白。Ta DHAR1/2蛋白质的空间结构表面基本呈现负电分布,同时也分布着一些较小的正电集团,而Ta DHAR3蛋白质的空间结构表面整体上为均匀负电分布,基本不存在正电,3种小麦DHAR蛋白质表面的氨基酸残基可及性较强,内部可及性相对较弱。本研究有助于理解小麦DHAR蛋白的功能。 展开更多
关键词 小麦 脱氢抗坏血酸还原酶 序列特性 高级结构 模建
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小麦DHAR基因的克隆及生物信息学分析
12
作者 范小芳 王俊生 +2 位作者 武安全 殷贵鸿 陈灿 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2014年第7期14-18,22,共6页
以电子克隆和RT-PCR克隆获得了1个小麦脱氢抗坏血酸还原酶(DHAR)基因,并对其编码的蛋白质序列进行了生物信息学分析。结果表明,该基因cDNA序列长1 187bp,编码263个氨基酸,蛋白质分子量为28 908.2Da,PI为6.84;具有GST-N家族和GST-C-DHAR... 以电子克隆和RT-PCR克隆获得了1个小麦脱氢抗坏血酸还原酶(DHAR)基因,并对其编码的蛋白质序列进行了生物信息学分析。结果表明,该基因cDNA序列长1 187bp,编码263个氨基酸,蛋白质分子量为28 908.2Da,PI为6.84;具有GST-N家族和GST-C-DHAR结构域,分别属于硫氧还蛋白超家族和GST-C末端超家族;该蛋白序列无信号肽,是亲水性蛋白,定位于细胞质叶绿体中,二级结构中以无规则卷曲(40.30%)和α螺旋(37.64%)为主,并含有少量的片层结构(17.11%);该蛋白序列与大麦、二穗短柄草、玉米、水稻、拟南芥的同源蛋白序列相似性较高,其中与大麦胞质DHAR(BAJ97007.1)蛋白进化距离最近。 展开更多
关键词 小麦 dhar基因 电子克隆 生物信息学
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高山松及其亲本种油松和云南松DHAR基因的功能分化 被引量：7
13
作者 考洪娜 兰婷 +1 位作者 王晓茹 曾庆银 《植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期1-10,共10页
高山松(Pinus densata)是油松(P.tabulaeformis)与云南松(P.yunnanensis)自然杂交产生的同倍性杂种,分布于青藏高原东南缘,占据了油松和云南松两个亲本种都不能正常生长的高海拔地带。为了揭示高山松、油松和云南松脱氢抗坏血酸还原酶(D... 高山松(Pinus densata)是油松(P.tabulaeformis)与云南松(P.yunnanensis)自然杂交产生的同倍性杂种,分布于青藏高原东南缘,占据了油松和云南松两个亲本种都不能正常生长的高海拔地带。为了揭示高山松、油松和云南松脱氢抗坏血酸还原酶(DHAR)基因的组成和功能分化,分别从高山松、油松和云南松中克隆到2类DHAR基因(DHAR1与DHAR2)。组织表达模式分析表明,这6个基因在根、韧皮部、叶和芽中均有表达;通过系统发育分析发现,高山松在物种形成过程中保留了油松的DHAR1拷贝以及云南松的DHAR2拷贝;酶学性质分析则表明,高山松与油松DHAR1蛋白对底物具有相似的催化活性、催化效率、最适pH和热力学稳定性,但其催化活性比云南松DHAR1蛋白高约300倍。高山松DHAR2蛋白对底物的催化活性和热力学稳定性均高于油松DHAR2蛋白。高山松DHAR基因在生化功能上显示出优于或类似亲本DHAR,这种优势功能的选择与杂种独特的生态适应性可能有重要的相关性。 展开更多
关键词 适应性 dhar 功能分化 自然杂种 蛋白质功能
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苹果脱氢抗坏血酸还原酶(DHAR)基因cDNA片段的克隆及序列分析 被引量：3
14
作者 张燕子 马锋旺 +1 位作者 张军科 梁东 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2007年第1期179-183,共5页
以皇家嘎拉苹果叶片为材料提取总RNA,合成cDNA第一链后,先利用巢式PCR获得苹果脱氢抗坏血酸还原酶(DHAR)基因中间片段,再利用3-′RACE方法进一步获得3′末端核酸序列,共得到840 bp包含完整3′末端的DHAR基因cDNA片段,其序列与烟草、水... 以皇家嘎拉苹果叶片为材料提取总RNA,合成cDNA第一链后,先利用巢式PCR获得苹果脱氢抗坏血酸还原酶(DHAR)基因中间片段,再利用3-′RACE方法进一步获得3′末端核酸序列,共得到840 bp包含完整3′末端的DHAR基因cDNA片段,其序列与烟草、水稻、番茄中DHAR基因序列的同源性均大于70%,证明所克隆到的核苷酸片段确为苹果DHAR基因cDNA片段。 展开更多
关键词 苹果 脱氢抗坏血酸还原酶 克隆 3'-RACE 序列分析
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甘蓝型油菜BnDHAR基因的克隆及表达分析 被引量：2
15
作者 宋验红 冯刚 +2 位作者 王浩杰 张璐 王茂林 《四川大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期851-856,共6页
在甘蓝型油菜矮化突变体与其高秆亲本构建的消减杂交文库中,得到一长约230bp与编码脱氢抗坏血酸还原酶的DHAR基因核苷酸序列相似的DNA片段.采用同源克隆技术,在甘蓝型油菜中获得该基因的全长cDNA序列,命名为BnDHAR.BnDHAR与已公布的甘... 在甘蓝型油菜矮化突变体与其高秆亲本构建的消减杂交文库中,得到一长约230bp与编码脱氢抗坏血酸还原酶的DHAR基因核苷酸序列相似的DNA片段.采用同源克隆技术,在甘蓝型油菜中获得该基因的全长cDNA序列,命名为BnDHAR.BnDHAR与已公布的甘蓝型油菜基因组中的该基因核苷酸序列完全一致.对BnDHAR基因不同发育时期组织的表达分析的结果显示,BnDHAR基因在高秆油菜苗期的叶中表达量最高,是矮化突变体的5倍,在根、茎中表达极低,具有组织特异性.非生物胁迫显著影响BnDHAR表达,高温胁迫使其表达升高,盐胁迫处理9h时达最高,而干旱胁迫时表达量在处理12h时才达最高. 展开更多
关键词 甘蓝型油菜 dhar 基因克隆 非生物胁迫 表达分析
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橡胶树HbDHAR2基因克隆及表达分析 被引量：4
16
作者 李双江 冯成天 +4 位作者 胡义钰 袁坤 刘进平 王真辉 刘辉 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2021年第3期25-32,共8页
脱氢抗坏血酸还原酶(DHAR)通过调节抗坏血酸水平在植物生长发育和抗逆过程中发挥重要作用。为明确橡胶树DHAR基因的序列特征、表达特性以及潜在的生物学功能,采用RT-PCR技术,从橡胶树中克隆了DHAR基因HbDHAR2。该基因开放阅读框为639 bp... 脱氢抗坏血酸还原酶(DHAR)通过调节抗坏血酸水平在植物生长发育和抗逆过程中发挥重要作用。为明确橡胶树DHAR基因的序列特征、表达特性以及潜在的生物学功能,采用RT-PCR技术,从橡胶树中克隆了DHAR基因HbDHAR2。该基因开放阅读框为639 bp,编码212个氨基酸。预测HbDHAR2蛋白等电点为5.69,分子量为23.82 ku,是一个亲水蛋白。HbDHAR2蛋白含有谷胱甘肽S-转移酶(GST)N-端结构域和GST C-端DHAR结构域,属于GST超家族DHAR亚类。序列比对表明,HbDHAR2与木薯MeDHAR2和蓖麻RcDHAR2具有很高的一致性。组织表达谱分析显示,HbDHAR2在根、树皮、胶乳、成熟叶、衰老叶、嫩梢、雌花和雄花中均有表达,其中表达量最高的组织为嫩梢,表达量最低的组织为根。乙烯利(ETH)、茉莉酸甲酯(MeJA)、水杨酸(SA)、脱落酸(ABA)、过氧化氢(H2O2)、甲基紫精(MV)、低温、干旱和高盐等处理均能诱导HbDHAR2的表达。由此推测,HbDHAR2可能在橡胶树抵御非生物胁迫过程中发挥作用。结果为进一步研究橡胶树HbDHAR2基因的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 橡胶树 脱氢抗坏血酸还原酶 克隆 表达分析 非生物胁迫
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油菜DHAR蛋白家族序列特性与进化分析 被引量：2
17
作者 王俊生 刘红占 +2 位作者 范小芳 赵锦慧 王小娟 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2017年第8期2937-2948,共12页
脱氢抗坏血酸还原酶(dehydroascorbate reductase,DHAR)能还原被氧化的抗坏血酸分子,是细胞中维持抗坏血酸氧化还原平衡状态的重要酶之一。为获得油菜DHAR蛋白家族成员的序列特征和功能差异信息,本研究基于GenBank油菜基因组数据库,执行... 脱氢抗坏血酸还原酶(dehydroascorbate reductase,DHAR)能还原被氧化的抗坏血酸分子,是细胞中维持抗坏血酸氧化还原平衡状态的重要酶之一。为获得油菜DHAR蛋白家族成员的序列特征和功能差异信息,本研究基于GenBank油菜基因组数据库,执行TBLASTN比对分析,获得了油菜DHAR蛋白家族成员,并比较了序列特性、进化关系、亚细胞定位、基因结构与染色体定位,预测了其蛋白质互作和表达谱信息。结果表明,共获得了11个油菜DHAR蛋白质家族成员,分为2大类,第一类共5个成员,包括DHAR1和DHAR2,均定位于细胞质,除序列XP_013693221外,均由213或214个氨基酸残基组成,在进化关系、基因结构和互作蛋白质的种类和数量方面非常接近,可能具有比较接近的酶活性和功能;第二类共6个成员,均由DHAR3成员组成,定位于叶绿体中,除XP_013665393外,其余成员均由255个或257个氨基酸残基组成,与前两者进化关系较远,并且与其互作的蛋白质种类和数量也与前两者存在显著不同,可能与前两者的酶活性和功能有较大差异。本研究为揭示油菜DHARs的分子特征与功能差异性提供了一些新的见解。 展开更多
关键词 油菜 dhar 序列特性 进化分析
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茶树DHAR酶基因的克隆与非生物胁迫响应分析 被引量：4
18
作者 刘婧愉 滕瑞敏 +2 位作者 李辉 刘昊 庄静 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期983-994,共12页
利用RT-PCR技术从茶树‘龙井43’cDNA中克隆得到1个编码茶树脱氢抗坏血酸还原酶基因CsDHAR,该基因全长639 bp,编码212个氨基酸,属于谷胱甘肽转移酶(GST)超级家族成员,具较高保守性。系统进化分析结果表明CsDHAR蛋白与拟南芥DHAR1、DHAR... 利用RT-PCR技术从茶树‘龙井43’cDNA中克隆得到1个编码茶树脱氢抗坏血酸还原酶基因CsDHAR,该基因全长639 bp,编码212个氨基酸,属于谷胱甘肽转移酶(GST)超级家族成员,具较高保守性。系统进化分析结果表明CsDHAR蛋白与拟南芥DHAR1、DHAR2进化关系近,在不同物种间,与毛果杨、胡杨等植物亲缘关系较近;理化性质分析表明CsDHAR属于亲水性蛋白;结构分析表明CsDHAR蛋白具典型功能结构域,三级结构主要由α–螺旋和不规则卷曲构成。荧光定量PCR分析显示,CsDHAR在茶树叶片不同发育阶段表达量差异不显著;对‘龙井43’与‘安吉白茶’中CsDHAR进行荧光定量PCR分析,‘龙井43’在低温、高温处理4 h表达量最高、干旱和高盐处理24 h表达量最高;‘安吉白茶’在高温、高盐处理4 h表达量最高,干旱处理2 h表达量最高。不同逆境胁迫下CsDHAR均被诱导表达,表明该基因参与茶树响应逆境胁迫调节过程。 展开更多
关键词 茶树 脱氢抗坏血酸还原酶 序列特性 逆境响应 表达分析
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ApDHAR基因的克隆与RT-qPCR 检测 被引量：1
19
作者 徐欣 周其明 +3 位作者 张永君 张耀亭 刘中文 朱绪伟 《北方蚕业》 2019年第1期17-20,共4页
在柞蚕体内,由其他昆虫脱氢抗坏血酸还原酶(dehydroascorbate reductase,DHAR)序列设计引物,克隆得到ApDHAR基因。并运用RT-qPCR方法,在体外注射维生素C条件下,测定该基因在4龄柞蚕幼虫体内表达量的变化,初步检验该基因的功能,以期为研... 在柞蚕体内,由其他昆虫脱氢抗坏血酸还原酶(dehydroascorbate reductase,DHAR)序列设计引物,克隆得到ApDHAR基因。并运用RT-qPCR方法,在体外注射维生素C条件下,测定该基因在4龄柞蚕幼虫体内表达量的变化,初步检验该基因的功能,以期为研究柞蚕维生素C代谢的分子机理提供帮助。 展开更多
关键词 柞蚕 维生素C dhar
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刺梨GGP和DHAR基因序列多态性及其与果实维生素C含量的关联分析 被引量：1
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作者 李广贵 林国都 +4 位作者 胡玉乾 张怀山 白静 安华明 鲁敏 《江苏农业科学》 2020年第8期63-69,共7页
高含量的维生素C是刺梨果实的重要性状,挖掘与维生素C含量相关联的基因序列变异及单倍型对刺梨的品种改良具有指导意义。在21份野生刺梨资源中对GGP和DHAR基因进行PCR扩增和测序,分析基因序列多态性及其与果实维生素C含量的相关性。GGP... 高含量的维生素C是刺梨果实的重要性状,挖掘与维生素C含量相关联的基因序列变异及单倍型对刺梨的品种改良具有指导意义。在21份野生刺梨资源中对GGP和DHAR基因进行PCR扩增和测序,分析基因序列多态性及其与果实维生素C含量的相关性。GGP基因在21份野生刺梨中共扩增出长度为2035 bp的同源序列,其中包含22处变异位点,产生15种单倍型,在0.01显著性水平上,3个单核苷酸多态性(SNP)及Hap15与刺梨果实高含量维生素C相关;在0.05显著性水平上,3个SNP及Hap7与刺梨果实低含量维生素C相关;GGP基因单倍型存在网状进化。DHAR基因在21份野生刺梨中共扩增出长度为1609 bp的同源序列,其中包含69处变异位点,产生9种单倍型,在0.05显著性水平上,8个SNP、9个InDel及Hap9与刺梨果实中低含量维生素C相关,1个SNP及单倍型Hap4~Hap6与刺梨果实中高含量维生素C相关;DHAR基因单倍型呈现扇形进化。GGP基因具有更高的单倍型多样性,DHAR基因具有更高的DNA多态性;GGP基因特异单倍型Hap15和DHAR基因特异单倍型Hap4共同存在于刺梨中时,可以使果实维生素C含量表现为高的状态;而GGP基因特异单倍型Hap7和DHAR基因单倍型Hap9同时存在于刺梨中时,可以使果实维生素C含量表现为低的状态。 展开更多
关键词 刺梨 维生素C GGP基因 dhar基因 基因序列多态性 单倍型 关联分析
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