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基于CRISPR/Cas9技术构建DF-1细胞chGSDME基因敲除株
1
作者 郑好 陈志 +10 位作者 杨霞 张素 赵一萌 汤君宇 曹静怡 李瑾瑜 赖沁妍 高丽 曹红 郑世军 王永强 《中国兽医杂志》 北大核心 2025年第11期35-40,共6页
为明确鸡胚成纤维细胞(DF-1)禽膜穿孔蛋白E(chGSDME)基因与病毒诱导的禽源细胞焦亡的相关性,本试验根据成簇规律间隔短回文重复序列/成簇规律间隔短回文重复序列相关蛋白(CRISPR/Cas9)基因编辑系统原理,设计靶向chGSDME基因的向导RNA(sg... 为明确鸡胚成纤维细胞(DF-1)禽膜穿孔蛋白E(chGSDME)基因与病毒诱导的禽源细胞焦亡的相关性,本试验根据成簇规律间隔短回文重复序列/成簇规律间隔短回文重复序列相关蛋白(CRISPR/Cas9)基因编辑系统原理,设计靶向chGSDME基因的向导RNA(sgRNA),构建敲除质粒并转染至DF-1细胞,对转染成功的细胞进行单克隆培养,随后通过蛋白免疫印迹(WB)和基因测序筛选出成功敲除chGSDME基因的细胞(命名为DF-1-ΔchGSDME),检测其活性并进行细胞功能验证。结果显示,本试验成功构建敲除质粒和chGSDME基因敲除细胞,即DF-1-ΔchGSDME细胞;与野生型DF-1(WT)细胞相比,DF-1-ΔchGSDME细胞活性无显著差异(P>0.05),chGSDME基因敲除不影响细胞正常生长;禽呼肠孤病毒(ARV)、传染性法氏囊病毒(IBDV)和水疱性口炎病毒(VSV)感染WT细胞后,均可诱导细胞焦亡;与WT细胞相比,感染ARV、IBDV和VSV后,DF-1-ΔchGSDME细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)含量显著减少(P<0.01或P<0.05),可以抑制病毒引起的细胞焦亡。结果表明,本试验成功构建了1株chGSDME基因敲除DF-1细胞,chGSDME基因与病毒诱导的禽源细胞焦亡具有明显相关性,为后续chGSDME基因的深入研究提供了参考。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9 基因敲除 禽膜穿孔蛋白E(chGSDME) 鸡胚成纤维细胞(df-1)
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鸡MMP7稳定过表达DF-1细胞系的构建与鉴定
2
作者 邓梦玲 隋敏敏 +3 位作者 宋海洋 杨建发 邹丰才 贺君君 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第12期6442-6449,共8页
旨在构建稳定过表达鸡mmp7基因的DF-1细胞系,为细胞水平研究mmp7基因在相关疾病中的功能奠定基础。合成鸡mmp7基因序列,构建重组慢病毒质粒pLVX-MMP7-IRES-puro,利用三质粒慢病毒包装系统,将pLVX-MMP7-puro与辅助质粒pCMV-VSV-G、psPAX... 旨在构建稳定过表达鸡mmp7基因的DF-1细胞系,为细胞水平研究mmp7基因在相关疾病中的功能奠定基础。合成鸡mmp7基因序列,构建重组慢病毒质粒pLVX-MMP7-IRES-puro,利用三质粒慢病毒包装系统,将pLVX-MMP7-puro与辅助质粒pCMV-VSV-G、psPAX2共转染至对数生长期的293T细胞,获得携带mmp7基因序列的重组慢病毒,重组慢病毒感染DF-1细胞72 h后,使用含1.5μg·mL^(-1)嘌呤霉素的筛选,通过PCR验证mmp7基因在DF-1细胞基因组中的整合情况,RT-PCR检测mmp7基因的转录水平,以及Western blot分析MMP7蛋白的表达水平,以鉴定是否成功获得稳定过表达鸡MMP7的DF-1细胞系,并使用CCK-8试验评估过表达MMP7对DF-1细胞增殖的影响。本研究成功构建了稳定过表达鸡MMP7的DF-1细胞系,过表达MMP7在24~48 h对细胞活力无明显影响,但120~144 h后细胞活力显著降低(P<0.05)。该细胞系的构建为后续深入探究MMP7的生物学功能提供了重要工具。 展开更多
关键词 基质金属蛋白酶7 慢病毒 稳定过表达 df-1细胞系
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稳定表达IRF2基因DF-1细胞株的建立及其对H9N2 AIV复制的影响
3
作者 晋晨阳 马露露 +2 位作者 郭梓轩 赵青青 代曼曼 《中国农业大学学报》 北大核心 2025年第5期169-178,共10页
为构建一种稳定表达干扰素调节因子2(Interferon regulatory factor 2,IRF2)的DF-1细胞株,本研究首先针对IRF2成功构建重组慢病毒,再用重组慢病毒感染DF-1细胞,通过嘌呤霉素及有限稀释法筛选获得IRF2过表达多克隆细胞株。对构建的细胞... 为构建一种稳定表达干扰素调节因子2(Interferon regulatory factor 2,IRF2)的DF-1细胞株,本研究首先针对IRF2成功构建重组慢病毒,再用重组慢病毒感染DF-1细胞,通过嘌呤霉素及有限稀释法筛选获得IRF2过表达多克隆细胞株。对构建的细胞株进行活力检测、Real-time qPCR以及Western blot等方法验证IRF2的体外表达效率,病毒增殖试验验证该细胞株对H9N2 AIV复制的影响,最后,通过双荧光素报告系统验证IRF2对干扰素刺激基因的调控作用。结果表明:1)细胞活性检测显示,稳定表达IRF2对细胞活性无显著影响(P>0.05)。2)Realtime qPCR以及Western blot证明IRF2的mRNA水平和蛋白水平在筛选的细胞株中表达相较于对照组细胞极显著增高(P<0.001)。3)Real-time qPCR(P<0.001)、Western blot(P<0.01)、TCID50(P<0.01)的体外试验证明,过表达DF-1-IRF2细胞株具有促进H9N2 AIV增殖的作用。4)双荧光素报告系统结果表明,IRF2能够极显著抑制ISRE(P<0.01)和NF-κB(P<0.01)活性,显著抑制IRF7(P<0.05)的活性。综上,本研究成功构建能够稳定表达IRF2基因的DF-1-IRF2细胞株,其能够增强H9N2 AIV的复制水平,为进一步研究IRF2在H9N2 AIV复制机制中的作用提供基础。 展开更多
关键词 H9N2 AIV 慢病毒载体 df-1细胞 IRF2
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鸡传染性法氏囊病毒在DF-1细胞系上繁殖特性研究 被引量：12
4
作者 王永生 周欣 +3 位作者 杨霞 陈陆 王川庆 王泽霖 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期662-667,共6页
对鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)HQ株在DF-1细胞上的适应及增殖条件进行了研究,结果表明,HQ株不适应在Vero细胞上生长,而在DF-1细胞上能够很好的适应.经培养条件优化,最终选用pH值为7.0,血清含量体积分数为2%的DMEM/F12培养基做维持液,在细... 对鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)HQ株在DF-1细胞上的适应及增殖条件进行了研究,结果表明,HQ株不适应在Vero细胞上生长,而在DF-1细胞上能够很好的适应.经培养条件优化,最终选用pH值为7.0,血清含量体积分数为2%的DMEM/F12培养基做维持液,在细胞传代后第2天接种IBDV HQ株,接毒量为1%(约0.7MOI)后36 h收毒,毒价可达8.5 mL-1以上,是在CEF细胞上培养时毒价的10倍.HQ株在DF-1细胞上培养24～36 h上清液与全悬液毒价基本相同,维持在同一高峰.糖耗的高峰要先于病毒毒价高峰的出现,糖耗在高峰之后快速下降,当降低到接近0时病毒的毒价最高. 展开更多
关键词 传染性法氏囊病毒 df-1细胞 病毒感染复数 糖耗 毒价
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鸡IBDV在微载体微型反应器DF-1细胞系上繁殖特性研究 被引量：5
5
作者 杨霞 周欣 +4 位作者 陈陆 王永生 赵军 王川庆 王泽霖 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期1519-1526,共8页
对IBDV在微型生物反应器转管DF-1细胞系上繁殖特性进行了较为系统的研究，转管中接种DF-1细胞3×10’个左右，培养6d细胞增至2．4～2．5×10^8个，确定培养6d为最佳接毒时间；病毒的最佳接种剂量为0．78TCID50／细胞（即0．78MO... 对IBDV在微型生物反应器转管DF-1细胞系上繁殖特性进行了较为系统的研究，转管中接种DF-1细胞3×10’个左右，培养6d细胞增至2．4～2．5×10^8个，确定培养6d为最佳接毒时间；病毒的最佳接种剂量为0．78TCID50／细胞（即0．78MOI），最佳收毒时间为接毒后的28h；上清和全悬液毒价呈平行关系，但后者更高，可达10^9.5TClD5.0／mL以上。细胞数增长与糖耗间呈明显平行关系，在细胞生长期内（6d）平均每个细胞耗糖量为6．5×10μg／24h，可根据糖耗量的多少推测细胞生长状态和数量；接毒后糖耗速率的高峰要先于病毒滴度高峰，在糖耗高峰出现后下降至趋于零的瞬间收获，可获得较高毒价的病毒液。在毒价高峰时收获1／2毒液后9h，收获1／3毒液后18h可再次获得最高毒价的毒液，这可能与高密度培养中及时补充新的培养液有关。本试验为IBDVHQ株在生物反应器上大规模培养提供了参考依据。 展开更多
关键词 传染性法氏囊病毒 df-1细胞 转管微载体微型反应器 病毒感染复数 糖耗
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新城疫病毒DF-1细胞蚀斑纯化方法的建立 被引量：7
6
作者 赵明 戈胜强 +12 位作者 王静静 赵云玲 郑东霞 左媛媛 于松梅 王晓真 刘春菊 王英丽 刘华雷 包静月 吴晓东 单虎 王志亮 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第6期51-54,共4页
本研究对DF-1细胞的培养条件及新城疫病毒(NDV)DF-1细胞的蚀斑纯化方法进行了优化摸索,结果显示相较于DMEM培养基,DF-1细胞更适宜在含15%胎牛血清的DMEM/F12培养基中生长,DF-1细胞以3×105/孔的剂量覆盖6孔板能获得最佳的铺板效果,... 本研究对DF-1细胞的培养条件及新城疫病毒(NDV)DF-1细胞的蚀斑纯化方法进行了优化摸索,结果显示相较于DMEM培养基,DF-1细胞更适宜在含15%胎牛血清的DMEM/F12培养基中生长,DF-1细胞以3×105/孔的剂量覆盖6孔板能获得最佳的铺板效果,吸附病毒后1.5h覆盖第1层琼脂,48h后覆盖第2层琼脂能获得最佳的蚀斑形成效果。通过对蚀斑纯化株F和HN基因测序分析,结果表明蚀斑纯化后无任何变异。通过此方法可在1个星期之内获得稳定的纯化毒株,方法简单、可重复性强、纯化效率高。 展开更多
关键词 新城疫病毒 df-1细胞 蚀斑纯化
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DF-1细胞二维电泳方法的建立 被引量：3
7
作者 范忠军 胡序明 +2 位作者 郁川 秦爱建 王欢莉 《河南科技大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2015年第2期83-87,7,共5页
为了建立和优化DF-1细胞二维电泳方法,对5种细胞裂解液进行了比较;同时,还对提取的蛋白在不同的等电聚焦条件、水化条件、蛋白上样量、SDS-聚丙烯酰胺凝胶浓度条件下的二维电泳图谱进行分析比较,并用PDQuest软件分析优化选择。建立了DF-... 为了建立和优化DF-1细胞二维电泳方法,对5种细胞裂解液进行了比较;同时,还对提取的蛋白在不同的等电聚焦条件、水化条件、蛋白上样量、SDS-聚丙烯酰胺凝胶浓度条件下的二维电泳图谱进行分析比较,并用PDQuest软件分析优化选择。建立了DF-1细胞的二维电泳方法,获得分辨率和重复性均可满足分析要求的DF-1细胞的二维电泳图谱。 展开更多
关键词 df-1 细胞 二维电泳 裂解液 蛋白质组学
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鸡传染性法氏囊病病毒BJQBJQ902株在悬浮培养DF-DF-1细胞上的增殖特性研究 被引量：4
8
作者 沈佳 姜北宇 +4 位作者 章振华 李林 史爱华 黄凤军 张建伟 《中国家禽》 北大核心 2016年第1期16-20,共5页
为探讨鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)BJ902株感染复数(Multiplicity of infection,MOI)、接种时间和维持液三种因素对在悬浮培养DF-1细胞上的病毒滴度影响,分别以不同MOI的IBDV BJQ902株感染悬浮培养24 h的DF-1细胞,以0.005 MOI的IBDV BJQ... 为探讨鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)BJ902株感染复数(Multiplicity of infection,MOI)、接种时间和维持液三种因素对在悬浮培养DF-1细胞上的病毒滴度影响,分别以不同MOI的IBDV BJQ902株感染悬浮培养24 h的DF-1细胞,以0.005 MOI的IBDV BJQ902株感染悬浮培养不同时间的DF-1细胞,然后以含2%胎牛血清(FBS)的高糖DMEM(HG-DMEM)作为维持液进行培养,观察感染后不同时间的细胞病变、收获感染不同时间的病毒液。以0.005 MOI感染悬浮培养24 h的DF-1细胞,然后使用含2%FBS的不同维持液(MEM、HG-DMEM、LG-DMEM)进行病毒增殖,收获不同时间的病毒液,测定病毒液的TCID_(50)。结果显示,以0.005 MOI的IBDV BJQ902种毒接种悬浮培养24 h的DF-1细胞,维持液为2%FBS的HG-DMEM进行病毒增殖,病毒接种后24~36 h收获的病毒毒价可达10^(8.3) TCID_(50)/0.1 m L以上。表明IBDV BJQ902株可以在微载体悬浮培养的DF-1细胞上高密度增殖。 展开更多
关键词 IBDV BJQ902株 悬浮培养 df-1细胞 病毒增殖
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蛋白激酶CK2抑制剂对鸡朊蛋白高表达和抑制表达DF-1细胞生物学行为的影响 被引量：2
9
作者 万学瑞 杨润霞 +2 位作者 王川 刘桂林 吴润 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期985-992,共8页
为探讨CK2在鸡细胞型朊蛋白(ChPrP^C)高表达和抑制表达的DF-1细胞增殖、黏附、侵袭和凋亡过程中的作用及其与ChPrP^C表达量的关系,以DF-1-PrP和DF-1-SiRNA-3细胞为模型,DF-1细胞为对照,分别用0、25、50、100nmol·L^(-1)米托蒽醌处... 为探讨CK2在鸡细胞型朊蛋白(ChPrP^C)高表达和抑制表达的DF-1细胞增殖、黏附、侵袭和凋亡过程中的作用及其与ChPrP^C表达量的关系,以DF-1-PrP和DF-1-SiRNA-3细胞为模型,DF-1细胞为对照,分别用0、25、50、100nmol·L^(-1)米托蒽醌处理以抑制CK2,检测细胞对鼠尾胶原的黏附能力,Transwell小室法检测细胞侵袭力,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,RT-PCR法检测PRNP基因mRNA转录。结果显示,DF-1-PrP、DF-1-SiRNA-3和DF-1细胞的PRNP基因mRNA转录量随着米托蒽醌浓度的增加均减少,其增殖、黏附、侵袭能力相应下降,而总凋亡率均升高;但在同一米托蒽醌浓度下,DF-1-PrP细胞增殖、黏附、侵袭能力始终高于DF-1细胞,总凋亡率均低于DF-1细胞;DF-1-SiRNA-3细胞则相反。表明ChPrP^C的高表达可促进DF-1细胞增殖、黏附和侵袭,抑制其凋亡,而ChPrP^C的低表达则相反;CK2在ChPrP^C介导DF-1细胞增殖、黏附、侵袭和凋亡过程中具有重要的作用。本研究结果为进一步阐明ChPrP^C生理功能的分子机制奠定基础。 展开更多
关键词 蛋白激酶2 鸡朊蛋白 df-1细胞系 米托蒽醌 凋亡
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PI3K/Akt抑制剂对鸡朊蛋白过表达DF-1细胞增殖、侵袭和凋亡的影响 被引量：2
10
作者 万学瑞 朱曼玲 +3 位作者 杨润霞 刘桂林 刘磊 吴润 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期1844-1850,共7页
为探讨PI3K/Akt信号通路在鸡细胞型朊蛋白(ChPrPC)过表达的DF-1细胞(DF-1-PrP)增殖、黏附、侵袭和凋亡过程中的作用及其与ChPrPC表达量的关系,以DF-1-PrP细胞为模型,空载体转染的DF-1-NC细胞和DF-1细胞为对照,分别用0、10、20、50、100... 为探讨PI3K/Akt信号通路在鸡细胞型朊蛋白(ChPrPC)过表达的DF-1细胞(DF-1-PrP)增殖、黏附、侵袭和凋亡过程中的作用及其与ChPrPC表达量的关系,以DF-1-PrP细胞为模型,空载体转染的DF-1-NC细胞和DF-1细胞为对照,分别用0、10、20、50、100、200nmol·L-1渥曼青霉素处理以抑制PI3K/Akt信号通路,检测细胞对鼠尾胶原的黏附能力,Transwell小室法检测细胞侵袭力,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,RT-PCR法检测PRNP基因转录量。结果显示,随着渥曼青霉素浓度的增加,DF-1-PrP、DF-1-NC和DF-1细胞的PRNP基因转录量均减少,其增殖、黏附、侵袭能力相应下降,而总凋亡率均升高;但在低于100nmol·L-1的同一渥曼青霉素浓度下,DF-1-PrP细胞增殖、黏附、侵袭能力始终高于对照组,而总凋亡率均低于对照组。本研究表明ChPrPC的过量表达可促进DF-1细胞增殖、黏附和侵袭,抑制其凋亡,在以上过程中,PI3K/Akt信号通路可能具有重要的作用,渥曼青霉素能有效阻断这一通路,但PI3K/Akt信号通路并不是ChPrPC调节细胞凋亡的唯一途径。 展开更多
关键词 PI3K/AKT 鸡朊蛋白 df-1细胞系 渥曼青霉素 凋亡
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鸡传染性法氏囊病病毒BJQ902株在DF-1细胞系上增殖工艺研究 被引量：5
11
作者 章振华 李林 +6 位作者 景小冬 张建伟 沈佳 史爱华 郑小兰 黄凤军 姜北宇 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第10期2775-2779,共5页
试验旨在通过DF-1细胞增殖获得高效价的鸡传染性法氏囊病病毒（infectious bursal disease virus,IBDV）抗原。通过病毒接种量、收毒时间、接毒时间、温度和维持液血清浓度5个培养条件的筛选和优化,对IBDV BJQ902株在DF-1细胞上的增殖... 试验旨在通过DF-1细胞增殖获得高效价的鸡传染性法氏囊病病毒（infectious bursal disease virus,IBDV）抗原。通过病毒接种量、收毒时间、接毒时间、温度和维持液血清浓度5个培养条件的筛选和优化,对IBDV BJQ902株在DF-1细胞上的增殖工艺进行了研究。结果表明,IBDV BJQ902株在DF-1细胞上最佳增殖条件为：在37℃条件下培养,接毒量在0.01%～0.1%之间,接种时间为细胞传代后生长48～72h,维持液血清浓度为1%～2%,收毒时间为病毒接种后60～72h。在此培养条件下增殖病毒毒价在108.3～108.7 TCID50/0.1mL之间。 展开更多
关键词 鸡传染性法氏囊病病毒 BJQ902株 df-1细胞 毒价
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稳定表达禽β防御素6的DF-1细胞系的建立及其抑菌活性 被引量：3
12
作者 涂健 李芳果 +4 位作者 李怡彤 殷冬冬 邵颖 宋祥军 祁克宗 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期778-786,共9页
【背景】禽β防御素6是禽体内分泌的一类抗菌肽,在抵抗病原入侵和免疫调节中发挥着重要作用,但其常规表达方式效率较低,难以在产业化生产中加以应用。【目的】建立稳定表达AvBD6的细胞系,并检测其表达产物对耐药大肠杆菌的抗菌活性,为... 【背景】禽β防御素6是禽体内分泌的一类抗菌肽,在抵抗病原入侵和免疫调节中发挥着重要作用,但其常规表达方式效率较低,难以在产业化生产中加以应用。【目的】建立稳定表达AvBD6的细胞系,并检测其表达产物对耐药大肠杆菌的抗菌活性,为其他防御素表达提供参考。【方法】利用显微镜观察构建真核重组表达载体pLOV-eGFP-AvBD6转染至293T细胞后的转染效率;收集293T细胞上清液并感染DF-1细胞,通过嘌呤霉素加压筛选稳定表达株;利用RT-PCR和Western Blot分别检测目的基因在转录水平和蛋白水平的表达情况;利用扫描电镜观察细胞培养上清液对耐药大肠杆菌的抗菌效果及其对菌体的损伤。【结果】成功构建重组表达载体pLOV-eGFP-AvBD6,筛选出稳定表达AvBD6的DF-1细胞系,而且目的基因在转录水平和蛋白水平均有表达;细胞培养上清显著降低大肠杆菌和副伤寒沙门菌存活率,对金黄色葡萄球菌的抗菌活性较低。【结论】建立了稳定表达AvBD6的DF-1细胞系,其表达产物对耐药大肠杆菌具有良好的抗菌效果,对推动防御素的应用提供技术支持。 展开更多
关键词 禽 β 防御素 6 df-1 细胞 稳定表达 抗菌活性
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利用PiggyBac转座系统构建稳定表达鹅RIG-I的DF-1细胞系 被引量：4
13
作者 胡跃 孙英杰 +5 位作者 王晓旭 仇旭升 宋翠萍 谭磊 胡桂学 丁铲 《中国动物传染病学报》 CAS 2014年第3期53-60,共8页
维甲酸诱导基因-I(retinoic acid inducible gene-I,RIG-I)是最近几年发现的一种细胞内模式识别受体,能够特异性的识别并结合病毒RNA,进而发挥抗病毒效应。RIG-I在进化中相对保守,但已有报道和我们的前期研究显示:家禽中鸭和鹅体内均有R... 维甲酸诱导基因-I(retinoic acid inducible gene-I,RIG-I)是最近几年发现的一种细胞内模式识别受体,能够特异性的识别并结合病毒RNA,进而发挥抗病毒效应。RIG-I在进化中相对保守,但已有报道和我们的前期研究显示:家禽中鸭和鹅体内均有RIG-I受体,但鸡却缺乏RIG-I受体。为了研究这种天然缺失对鸡是否有不利影响,本研究利用PiggyBac转座系统将鹅源RIG-I转染入鸡胚成纤维细胞系DF-1,两次亚克隆后获得单个克隆,以荧光、RT-PCR及Western blot进行鉴定,最终获得稳定表达鹅RIG-I的DF-1细胞系,为进一步研究鸡的先天性免疫机制和鹅RIG-I的功能打下基础。 展开更多
关键词 鹅维甲酸诱导基因-I 鸡胚成纤维细胞系df-1 PiggyBac转座系统
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3种花色苷对DF-1细胞的影响 被引量：7
14
作者 盖丽丽 张莉 +1 位作者 姜世金 雷用东 《生物技术通讯》 CAS 2012年第4期542-545,共4页
目的:探讨来自心里美萝卜、紫甘薯和紫玉米的3种不同的花色苷对DF-1细胞单层生长的影响。方法:直观观察3种花色苷对DF-1细胞生长的影响,初步摸索其最适终浓度;用MTT法检测花色苷在提高细胞活性方面的作用。结果:不同浓度的3种花色苷均... 目的:探讨来自心里美萝卜、紫甘薯和紫玉米的3种不同的花色苷对DF-1细胞单层生长的影响。方法:直观观察3种花色苷对DF-1细胞生长的影响,初步摸索其最适终浓度;用MTT法检测花色苷在提高细胞活性方面的作用。结果:不同浓度的3种花色苷均对细胞单层生长有不同的影响,心里美萝卜花色苷、紫甘薯花色苷和紫玉米花色苷对细胞生长的最适终浓度分别为100、75和50μg/mL;用MTT法获得相应数据并制成细胞活性图表。结论:不同品种来源及不同浓度的花色苷对DF-1细胞单层生长均有明显影响,为今后开展花色苷促细胞生长,提高细胞抗病毒活性研究提供了数据基础。 展开更多
关键词 花色苷 df-1细胞系 生长 MTT实验
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EGCG通过NF-κB信号通路抑制感染ALV-J病毒的DF-1细胞凋亡 被引量：2
15
作者 张莹 尹华东 +5 位作者 邬秀宏 杨海滨 钟应富 袁林颖 李中林 徐泽 《四川农业大学学报》 CSCD 北大核心 2018年第2期261-266,共6页
【目的】评价表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)是否具有抗J亚型禽白血病毒(ALV-J)效应,为AVL-J防治药物的研发提供理论依据。【方法】在感染ALV-J病毒的DF-1细胞中分别添加浓度为0,5,10,20和40μg/mL的EGCG溶液后培养的0,24,48,72和96 h... 【目的】评价表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)是否具有抗J亚型禽白血病毒(ALV-J)效应,为AVL-J防治药物的研发提供理论依据。【方法】在感染ALV-J病毒的DF-1细胞中分别添加浓度为0,5,10,20和40μg/mL的EGCG溶液后培养的0,24,48,72和96 h,对其细胞活性、细胞中env基因表达量,禽白血病p27抗原水平,NF-κB活性以及NF-κB p50和p65蛋白表达进行了测定。【结果】EGCG对感染ALV-J病毒后DF-1的保护作用具有剂量效应,10μg/mL效果最好。在ALV-J侵染的DF-1细胞中添加10μg/mL的EGCG溶液96 h后,可显著抑制由于ALV-J病毒导致的NF-κB亚基p50和p65跨膜转移,降低由于ALV-J病毒造成的细胞凋亡。【结论】EGCG通过抑制NF-κB信号的激活来提高DF-1细胞对ALV-J病毒的抵御能力,且具有显著的剂量效应,10μg/mL为最佳添加浓度。 展开更多
关键词 表没食子儿茶素没食子酸酯 J 亚型禽白血病 NF-ΚB 信号途径 df-1细胞
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基于DF-1协议的交通灯控制实验设计及实现 被引量：3
16
作者 崔平 翁正新 《实验室研究与探索》 CAS 2003年第4期55-57,共3页
基于DF-1协议,采用罗克韦尔公司的控制器和罗克韦尔软件,对交通灯控制实验进行了设计及实现。该实验为PLC教学提供了一个完整的实验平台。
关键词 可编程逻辑控制器 罗克韦尔软件 df-1协议 网络通讯 远程监控 PLC控制 实验教学
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新型鸭呼肠孤病毒在DF-1细胞系中的增殖特性 被引量：1
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作者 云涛 华炯钢 +3 位作者 叶伟成 倪征 陈柳 张存 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2019年第5期716-721,共6页
为了研究新型鸭呼肠孤病毒(new-type duck reovirus,NDRV)在鸡胚成纤维细胞DF-1中的增殖特性,将NDRV JDM10毒株接种到DF-1细胞,连续传代后,通过观察病毒对细胞的致病变效应,测定半数组织感染量(TCID_(50))、RT-PCR检测、间接免疫荧光(I... 为了研究新型鸭呼肠孤病毒(new-type duck reovirus,NDRV)在鸡胚成纤维细胞DF-1中的增殖特性,将NDRV JDM10毒株接种到DF-1细胞,连续传代后,通过观察病毒对细胞的致病变效应,测定半数组织感染量(TCID_(50))、RT-PCR检测、间接免疫荧光(IFA)及Western-blot免疫学检测,探索NDRV对DF-1细胞的作用效果。结果表明,NDRV JDM10毒株在DF-1细胞中能有效增殖,产生明显的致病变效应;RT-PCR检测成功扩增出1条大小为1 001 bp的条带;病毒蛋白在细胞中获得了良好的表达,并与抗NDRVσC单克隆抗体发生特异性反应;NDRV JDM10毒株在感染DF-1细胞后会经历潜伏期、快速增长期、稳定期3个时期,并在72 h病毒效价达到峰值,TCID_(50)为1×10^(-7.90)·(0.1mL)^(-1)。本研究为进一步研究NDRV的致病机理和研制细胞疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 新型鸭呼肠孤病毒(NDRV) 鸡胚成纤维(df-1)细胞 增殖特性
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DF-1细胞替代CEF细胞测定IBDV液抗原含量和血清中和抗体效价的研究 被引量：1
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作者 李林 沈佳 +5 位作者 史爱华 赵蕾 习硕 姜北宇 张建伟 章振华 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第15期90-92,97,共4页
为了探讨DF-1细胞替代鸡胚成纤维(chicken embryo fibroblast,CEF)细胞作为培养基质用于测定鸡传染性法氏囊病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)液抗原含量及血清中和抗体效价的可行性,试验以DF-1细胞和CEF细胞作为培养基质测定... 为了探讨DF-1细胞替代鸡胚成纤维(chicken embryo fibroblast,CEF)细胞作为培养基质用于测定鸡传染性法氏囊病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)液抗原含量及血清中和抗体效价的可行性,试验以DF-1细胞和CEF细胞作为培养基质测定了6批次IBDV BJQ902株病毒液抗原含量和用不同剂量ND、IB、IBD三联灭活疫苗(La Sota株+M41株+BJQ902株)免疫SPF鸡血清和未免疫SPF鸡血清的中和抗体效价。结果表明:6批次病毒液病毒含量为1×10^(7.7)~1×10^(8.1)TCID50/0.1 mL,两种细胞对同一批次病毒样品的测定结果一致,重复测定无差异;IBDV阳性血清样品中和抗体效价为8~17 lb,两种细胞对同一血清样品中和抗体效价的检测结果无差异。说明DF-1细胞可以替代CEF细胞作为培养基质,用于IBDV液抗原含量及血清中和抗体效价的测定。 展开更多
关键词 df-1细胞 CEF细胞 鸡传染性法氏囊病毒 抗原含量 中和抗体效价
原文传递
黄芪提取液对ALV-J在DF-1细胞内转录的影响 被引量：1
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作者 林汉卿 温贵兰 +3 位作者 张喜懿 汪德生 龚新勇 程振涛 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2021年第9期22-26,共5页
J亚群禽白血病病毒(ALV-J)是一种严重危害养禽业的肿瘤疾病之一,因目前尚无可供广泛使用的有效疫苗和特效药,防控主要依靠种群净化。本试验以ALV-J原型毒株的gp37基因序列为参照,设计荧光引物,成功建立了特异性较强的ALV-J荧光定量PCR... J亚群禽白血病病毒(ALV-J)是一种严重危害养禽业的肿瘤疾病之一,因目前尚无可供广泛使用的有效疫苗和特效药,防控主要依靠种群净化。本试验以ALV-J原型毒株的gp37基因序列为参照,设计荧光引物,成功建立了特异性较强的ALV-J荧光定量PCR检测方法。随后,将ALV-J病毒液与黄芪提取液先后或同时作用于DF-1细胞,培养72 h后,提取细胞总RNA,用建立的荧光定量PCR方法检测病毒对照组与直接灭活组、预防组、治疗组之间gp37基因表达量的差异,以此探索黄芪对gp37基因转录的影响。结果显示,病毒对照组与直接灭活组、预防组、治疗组的gp37基因表达量均有显著差异(P<0.05),其中预防组的gp37基因表达量与病毒对照组差异最大,表明黄芪能明显下调gp37基因的表达。因此,黄芪可能对J亚型禽白血病的防治有一定作用。 展开更多
关键词 J亚群禽白血病病毒 黄芪提取液 荧光定量PCR df-1细胞
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电针“内关、心俞”穴对急性心肌梗死大鼠SDF-1、VCAM-1表达影响 被引量：6
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作者 杜慧静 陈峰 +1 位作者 唐关敏 徐文博 《浙江中医药大学学报》 CAS 2016年第1期49-53,共5页
[目的]探索电针"内关"、"心俞"穴对急性心肌梗死大鼠心肌组织SDF-1、VCAM-1的表达量、表达时间及相互调节的影响。[方法]SD大鼠随机分为正常组、模型组与电针组,模型组和电针组根据时间点的不同再各分为3组,采用RT-... [目的]探索电针"内关"、"心俞"穴对急性心肌梗死大鼠心肌组织SDF-1、VCAM-1的表达量、表达时间及相互调节的影响。[方法]SD大鼠随机分为正常组、模型组与电针组,模型组和电针组根据时间点的不同再各分为3组,采用RT-PCR法分别检测各组大鼠心肌组织细胞因子SDF-1m RNA、VCAM-1m RNA相对表达量,并行统计学分析。[结果]与正常组比较,1d模型组、3d模型组SDF-1m RNA、VCAM-1m RNA相对表达量显著升高(P<0.05);与1d模型组比较,1d电针组VCAM-1m RNA相对表达量显著升高(P<0.01);与3d模型组比较3d电针组SDF-1m RNA、VCAM-1m RNA相对表达量明显升高(P<0.05);与5d模型组比较,5d电针组VCAM-1m RNA相对表达量明显升高(P<0.05)。SDF-1m RNA、VCAM-1m RNA两者在电针后有明显依存关系(r2=0.756)。[结论]电针"内关"、"心俞"穴位早期能促进急性心肌梗死大鼠心肌组织细胞因子的表达,且与电针时间相关。 展开更多
关键词 电针 急性心肌梗死 Sdf-1 VCAM-1 内关 心俞
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