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HIV-1假病毒包装及感染条件优化
被引量：
3
1
作者
陈丹瑛
李蕊
+3 位作者
张玥
宋川
韩俊燕
张媛媛
《检验医学与临床》
CAS
2017年第15期2172-2174,共3页
目的对人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)假病毒包装及感染条件进行优化,获得高重复性、高稳定性和高滴度的假病毒包装方法和较高的感染效率。方法采用pSG3△env质粒与pcDNA3.1-SF162rev/env质粒共转染293T细胞包装病毒,对HIV假病毒骨架质粒与...
目的对人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)假病毒包装及感染条件进行优化,获得高重复性、高稳定性和高滴度的假病毒包装方法和较高的感染效率。方法采用pSG3△env质粒与pcDNA3.1-SF162rev/env质粒共转染293T细胞包装病毒,对HIV假病毒骨架质粒与env真核表达质粒转染比例、转染试剂与质粒比例、假病毒收获时间对HIV假病毒包装滴度的影响进行实验,同时对感染过程中假病毒接种剂量与二乙氨乙基葡聚糖(DEAE-Dextran)使用浓度进行了优化。结果在包装过程中当HIV假病毒骨架质粒与env真核表达质粒转染比例为4∶1、转染试剂与质粒比例为3∶1,转染后培养48hHIV-1假病毒的滴度最高;在假病毒感染过程中,15μg/mL的DEAE-Dextran可有效增加假病毒的感染效率且不会对细胞造成较大毒性。结论通过对包装和感染过程中关键条件的优化,可以有效提高HIV-1假病毒的包装和感染效率,增加实验技术稳定性,为新型抗艾滋病药物筛选和艾滋病疫苗评价等研究奠定了基础。
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关键词
人类免疫缺陷病毒
假病毒
包装方法
二乙氨乙基葡聚糖
暂未订购
DEAE-磁性纳米粒子提纯质粒的研究
被引量：
5
2
作者
孙敏莉
王强斌
+2 位作者
张皓
古宏晨
张柏根
《上海第二医科大学学报》
CSCD
2003年第6期512-514,共3页
目的应用纳米磁性粒子纯化质粒。 方法将葡聚糖-DEAE通过共沉淀法包裹在纳米磁性粒子 表面,利用带正电荷的DEAE与带负电荷的核酸之间的电荷吸附作用,通过离子交换,在细菌裂解上清液中提纯质 粒。 结果可以提纯出高纯度的质粒。 结论在...
目的应用纳米磁性粒子纯化质粒。 方法将葡聚糖-DEAE通过共沉淀法包裹在纳米磁性粒子 表面,利用带正电荷的DEAE与带负电荷的核酸之间的电荷吸附作用,通过离子交换,在细菌裂解上清液中提纯质 粒。 结果可以提纯出高纯度的质粒。 结论在纳米磁性粒子外包裹上DEAE基团,可以提纯出高纯度的质粒。
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关键词
磁性纳米粒子
质粒
葡聚糖-DEAE
二乙基氨基乙基
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职称材料
DEAE-葡聚糖在SHIV病毒TCID50滴定及扩增中的作用
被引量：
2
3
作者
丛喆
姚南
+2 位作者
蒋虹
金光
魏强
《中国实验动物学报》
CAS
CSCD
2011年第3期193-196,共4页
目的确定DEAE-葡聚糖对CEMx174细胞的半数抑制浓度,明确其在SHIV病毒TCID50滴定及病毒扩增中的促进作用。方法分别使用含DEAE和无DEAE的DMEM完全培养基测定SHIVchn19p7的TCID50。用无血清DMEM培养基系列稀释DEAE,加入CEMx174细胞,使用cc...
目的确定DEAE-葡聚糖对CEMx174细胞的半数抑制浓度,明确其在SHIV病毒TCID50滴定及病毒扩增中的促进作用。方法分别使用含DEAE和无DEAE的DMEM完全培养基测定SHIVchn19p7的TCID50。用无血清DMEM培养基系列稀释DEAE,加入CEMx174细胞,使用cck-8测定细胞破坏率。分别选取DEAE浓度为28.125μg/mL和14.0625μg/mL的无血清DMEM培养基对CEMx174细胞预处理3 h。再加入SHIV-KB9病毒液,定期测定培养上清中的P24水平,同时做正常病毒对照和DEAE-1640对照,比对不同处理下的病毒扩增情况。结果使用了DEAE后,SHIVchn19p7的TCID50达到了3.16×104 TCID50/mL,不使用DEAE,病毒的TCID50测定为阴性。DEAE对CEMx174细胞的IC50为44.85μg/mL。经浓度为28.125μg/mL和14.0625μg/mL的DEAE预处理后,SHIV-KB9病毒扩增在13 d～17 d达到高峰。而用不含DEAE的1640生长液培养的实验孔在19 d才开始出现阳性反应。结论高浓度的DEAE对细胞有较强的杀伤作用,低浓度的DEAE对细胞的破坏率较低,并且能显著促进病毒扩增。DEAE在病毒进入细胞的过程中确实起了重要的作用。
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关键词
DEAE-葡聚糖
TZM-bl细胞
半数组织培养感染剂量
半数抑制浓度
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职称材料
沙眼衣原体血清型L2体外培养影响因素的研究
4
作者
张军华
陈丽丽
+1 位作者
李忠玉
吴移谋
《微生物学杂志》
CAS
CSCD
2011年第4期25-30,共6页
研究沙眼衣原体（Chlamydia trachomatis,Ct）血清型LGV L2在体外培养的繁殖规律及其影响因素,确定血清型LGV L2在体外培养的最佳生长发育条件。用沙眼衣原体血清型LGV L2分别感染HEp-2细胞、HeLa229细胞、HepG-2细胞、SGC-7901细胞和V...
研究沙眼衣原体（Chlamydia trachomatis,Ct）血清型LGV L2在体外培养的繁殖规律及其影响因素,确定血清型LGV L2在体外培养的最佳生长发育条件。用沙眼衣原体血清型LGV L2分别感染HEp-2细胞、HeLa229细胞、HepG-2细胞、SGC-7901细胞和Vero细胞,在荧光显微镜下计数包涵体形成单位（inclusion fig-ure unity,IFU）和观察培养不同时间后包涵体的形态,比较不同细胞对血清型LGV L2的敏感性及血清型LGVL2在不同细胞内的生长情况。同时分别设DEAE葡聚糖处理组与未处理组,含放线菌酮培养组与不含放线菌酮培养组,比较培养12、24、36和48 h后血清型LGV L2包涵体形态、IFU和Real-Time PCR定量检测血清型LGV L2的核酸量,判断DEAE葡聚糖和放线菌酮对沙眼衣原体血清型LGV L2生长的影响。在感染20 h后,显微镜下观察发现HEp-2、Vero、HepG-2、HeLa和SGC-7901细胞均不同程度肿胀,5种细胞内均可见包涵体,大约40~48 h后包涵体占据整个胞浆。IFU计数和Real-Time PCR结果显示5种细胞中HeLa细胞感染率最高,HepG-2细胞感染率最低,血清型LGV L2在HeLa细胞中生长速度最快。荧光显微镜下计数IFU,发现DE-AE葡聚糖预处理组和对照组中血清型LGV L2的感染率和生长发育没有明显区别,而含放线菌酮培养组中各细胞内血清型LGV L2生长速度较对照组快,Real-Time PCR检测结果显示放线菌酮组各细胞内血清型LGVL2核酸量较对照组高。血清型LGV L2在HeLa细胞中的感染率最高,DEAE葡聚糖对血清型LGV L2的感染没有明显影响,而体外培养时添加放线菌酮有利于血清型LGV L2的生长发育。
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关键词
沙眼衣原体
LGV
L2
DEAE葡聚糖
放线菌酮
暂未订购
反离子对牛血清白蛋白在荷电葡聚糖接枝介质中色谱行为的影响
被引量：
3
5
作者
韩德涛
白姝
+2 位作者
龚玲莉
余林玲
孙彦
《化工进展》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2018年第1期260-268,共9页
从前期开发的具有极高的吸附容量及传质速率的二乙氨乙基葡聚糖接枝离子交换介质中选取FF-D50-Dex D100和FF-Dex D100为典型代表,利用Cl~–、SCN~–、SO_4^(2–)、HPO_4^(2–)为模型反离子,以牛血清白蛋白(BSA)为模型蛋白,以商品化介质(...
从前期开发的具有极高的吸附容量及传质速率的二乙氨乙基葡聚糖接枝离子交换介质中选取FF-D50-Dex D100和FF-Dex D100为典型代表,利用Cl~–、SCN~–、SO_4^(2–)、HPO_4^(2–)为模型反离子,以牛血清白蛋白(BSA)为模型蛋白,以商品化介质(Q Sepharose FF、Q Sepharose XL、DEAE Sepharose FF)为对照,在离子强度为0.06mol/L下,系统研究反离子对二乙氨乙基葡聚糖接枝介质的蛋白质吸附与洗脱行为的影响。结果表明,二乙氨乙基葡聚糖接枝介质对不同反离子的偏好性存在差异,且该偏好性差异与基团所处位置(接枝链配基或表面配基)无关。同时,介质偏好性弱的反离子会通过促进二乙氨乙基葡聚糖接枝介质的"链传递"效应加快蛋白质的传质速率,从而提高动态吸附容量。因此,在使用二乙氨乙基葡聚糖接枝介质进行蛋白质色谱柱分离过程中,可在吸附操作中使用HPO42–,在洗脱操作中使用SCN–来优化分离效果。
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关键词
离子交换
二乙氨乙基葡聚糖
反离子
吸附
动力学
线性梯度洗脱
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职称材料
修饰和导入技术对于反义寡核苷酸的影响
6
作者
周毅
陆长德
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
1996年第S1期45-51,共7页
合成了３′末端三个磷酸二酯键硫代修饰的针对ＤＮＡ聚合酶α的反义核苷酸ＡＳα，利用［３Ｈ］ＴｄＲ参入方法测定了ＡＳα对于ＨｅＬａ细胞ＤＮＡ复制的抑制效力。结果表明，这种修饰明显增强了寡核苷酸在含血清的细胞培养液中的稳定...
合成了３′末端三个磷酸二酯键硫代修饰的针对ＤＮＡ聚合酶α的反义核苷酸ＡＳα，利用［３Ｈ］ＴｄＲ参入方法测定了ＡＳα对于ＨｅＬａ细胞ＤＮＡ复制的抑制效力。结果表明，这种修饰明显增强了寡核苷酸在含血清的细胞培养液中的稳定性。Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ能够促进ＡＳα的入胞并且增强其抑制效力。
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关键词
反义寡核苷酸
稳定性
入胞
代谢
Lipofectin
DEAEDextran
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职称材料
长白山蝮蛇蛇毒的提取分离
7
作者
王恩福
王锐成
张振伟
《黑龙江医药》
CAS
2000年第6期350-351,共2页
应用 DEAE 葡聚糖凝胶 A—50对蝮蛇蛇毒进行柱层析分离得到十三个蛋白峰,其有效组份为凝血酶样酶(精氨酸酯)分布在6、7、8峰,并对该组酶的活性进行初步探讨。
关键词
蛇毒
凝血酶样酶
DEAE
葡聚糖凝胶A-50
暂未订购
题名
HIV-1假病毒包装及感染条件优化
被引量：
3
1
作者
陈丹瑛
李蕊
张玥
宋川
韩俊燕
张媛媛
机构
首都医科大学附属北京地坛医院传染病研究所/新发突发传染病研究北京市重点实验室
出处
《检验医学与临床》
CAS
2017年第15期2172-2174,共3页
基金
北京市医院管理局"青苗"人才计划(QML20151701)
文摘
目的对人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)假病毒包装及感染条件进行优化,获得高重复性、高稳定性和高滴度的假病毒包装方法和较高的感染效率。方法采用pSG3△env质粒与pcDNA3.1-SF162rev/env质粒共转染293T细胞包装病毒,对HIV假病毒骨架质粒与env真核表达质粒转染比例、转染试剂与质粒比例、假病毒收获时间对HIV假病毒包装滴度的影响进行实验,同时对感染过程中假病毒接种剂量与二乙氨乙基葡聚糖(DEAE-Dextran)使用浓度进行了优化。结果在包装过程中当HIV假病毒骨架质粒与env真核表达质粒转染比例为4∶1、转染试剂与质粒比例为3∶1,转染后培养48hHIV-1假病毒的滴度最高;在假病毒感染过程中,15μg/mL的DEAE-Dextran可有效增加假病毒的感染效率且不会对细胞造成较大毒性。结论通过对包装和感染过程中关键条件的优化,可以有效提高HIV-1假病毒的包装和感染效率,增加实验技术稳定性,为新型抗艾滋病药物筛选和艾滋病疫苗评价等研究奠定了基础。
关键词
人类免疫缺陷病毒
假病毒
包装方法
二乙氨乙基葡聚糖
Keywords
human immunodeficiency virus
pseudovirus
package method~
deae-dextran
分类号
R512.91 [医药卫生—内科学]
暂未订购
题名
DEAE-磁性纳米粒子提纯质粒的研究
被引量：
5
2
作者
孙敏莉
王强斌
张皓
古宏晨
张柏根
机构
上海第二医科大学仁济医院血管外科
上海交通大学纳米科学与技术工程中心
出处
《上海第二医科大学学报》
CSCD
2003年第6期512-514,共3页
基金
上海市浦东新区科技发展基金专项资金资助(00-08)
文摘
目的应用纳米磁性粒子纯化质粒。 方法将葡聚糖-DEAE通过共沉淀法包裹在纳米磁性粒子 表面,利用带正电荷的DEAE与带负电荷的核酸之间的电荷吸附作用,通过离子交换,在细菌裂解上清液中提纯质 粒。 结果可以提纯出高纯度的质粒。 结论在纳米磁性粒子外包裹上DEAE基团,可以提纯出高纯度的质粒。
关键词
磁性纳米粒子
质粒
葡聚糖-DEAE
二乙基氨基乙基
Keywords
magnetic nanoparticles
plasmids
dextran - DEAE
分类号
Q782 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
DEAE-葡聚糖在SHIV病毒TCID50滴定及扩增中的作用
被引量：
2
3
作者
丛喆
姚南
蒋虹
金光
魏强
机构
中国医学科学院医学实验动物研究所
出处
《中国实验动物学报》
CAS
CSCD
2011年第3期193-196,共4页
基金
国家十一五科技重大专项课题(2009ZX10004-402,2008ZX10001-011)
文摘
目的确定DEAE-葡聚糖对CEMx174细胞的半数抑制浓度,明确其在SHIV病毒TCID50滴定及病毒扩增中的促进作用。方法分别使用含DEAE和无DEAE的DMEM完全培养基测定SHIVchn19p7的TCID50。用无血清DMEM培养基系列稀释DEAE,加入CEMx174细胞,使用cck-8测定细胞破坏率。分别选取DEAE浓度为28.125μg/mL和14.0625μg/mL的无血清DMEM培养基对CEMx174细胞预处理3 h。再加入SHIV-KB9病毒液,定期测定培养上清中的P24水平,同时做正常病毒对照和DEAE-1640对照,比对不同处理下的病毒扩增情况。结果使用了DEAE后,SHIVchn19p7的TCID50达到了3.16×104 TCID50/mL,不使用DEAE,病毒的TCID50测定为阴性。DEAE对CEMx174细胞的IC50为44.85μg/mL。经浓度为28.125μg/mL和14.0625μg/mL的DEAE预处理后,SHIV-KB9病毒扩增在13 d～17 d达到高峰。而用不含DEAE的1640生长液培养的实验孔在19 d才开始出现阳性反应。结论高浓度的DEAE对细胞有较强的杀伤作用,低浓度的DEAE对细胞的破坏率较低,并且能显著促进病毒扩增。DEAE在病毒进入细胞的过程中确实起了重要的作用。
关键词
DEAE-葡聚糖
TZM-bl细胞
半数组织培养感染剂量
半数抑制浓度
Keywords
deae-dextran
TZM-bl cell line
TCID50
IC50
SHIV
分类号
Q95-33 [生物学—动物学]
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职称材料
题名
沙眼衣原体血清型L2体外培养影响因素的研究
4
作者
张军华
陈丽丽
李忠玉
吴移谋
机构
南华大学病原生物学研究所
中南大学湘雅三医院输血科
出处
《微生物学杂志》
CAS
CSCD
2011年第4期25-30,共6页
基金
国家自然科学基金(81001318)
文摘
研究沙眼衣原体（Chlamydia trachomatis,Ct）血清型LGV L2在体外培养的繁殖规律及其影响因素,确定血清型LGV L2在体外培养的最佳生长发育条件。用沙眼衣原体血清型LGV L2分别感染HEp-2细胞、HeLa229细胞、HepG-2细胞、SGC-7901细胞和Vero细胞,在荧光显微镜下计数包涵体形成单位（inclusion fig-ure unity,IFU）和观察培养不同时间后包涵体的形态,比较不同细胞对血清型LGV L2的敏感性及血清型LGVL2在不同细胞内的生长情况。同时分别设DEAE葡聚糖处理组与未处理组,含放线菌酮培养组与不含放线菌酮培养组,比较培养12、24、36和48 h后血清型LGV L2包涵体形态、IFU和Real-Time PCR定量检测血清型LGV L2的核酸量,判断DEAE葡聚糖和放线菌酮对沙眼衣原体血清型LGV L2生长的影响。在感染20 h后,显微镜下观察发现HEp-2、Vero、HepG-2、HeLa和SGC-7901细胞均不同程度肿胀,5种细胞内均可见包涵体,大约40~48 h后包涵体占据整个胞浆。IFU计数和Real-Time PCR结果显示5种细胞中HeLa细胞感染率最高,HepG-2细胞感染率最低,血清型LGV L2在HeLa细胞中生长速度最快。荧光显微镜下计数IFU,发现DE-AE葡聚糖预处理组和对照组中血清型LGV L2的感染率和生长发育没有明显区别,而含放线菌酮培养组中各细胞内血清型LGV L2生长速度较对照组快,Real-Time PCR检测结果显示放线菌酮组各细胞内血清型LGVL2核酸量较对照组高。血清型LGV L2在HeLa细胞中的感染率最高,DEAE葡聚糖对血清型LGV L2的感染没有明显影响,而体外培养时添加放线菌酮有利于血清型LGV L2的生长发育。
关键词
沙眼衣原体
LGV
L2
DEAE葡聚糖
放线菌酮
Keywords
Chlamydia trachomatis
LGV L2
deae-dextran
cycloheximide
分类号
R374 [医药卫生—病原生物学]
暂未订购
题名
反离子对牛血清白蛋白在荷电葡聚糖接枝介质中色谱行为的影响
被引量：
3
5
作者
韩德涛
白姝
龚玲莉
余林玲
孙彦
机构
天津大学化工学院生物化工系系统生物工程教育部重点实验室
出处
《化工进展》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2018年第1期260-268,共9页
基金
国家自然科学基金项目(21406160
21236005
21621004)
文摘
从前期开发的具有极高的吸附容量及传质速率的二乙氨乙基葡聚糖接枝离子交换介质中选取FF-D50-Dex D100和FF-Dex D100为典型代表,利用Cl~–、SCN~–、SO_4^(2–)、HPO_4^(2–)为模型反离子,以牛血清白蛋白(BSA)为模型蛋白,以商品化介质(Q Sepharose FF、Q Sepharose XL、DEAE Sepharose FF)为对照,在离子强度为0.06mol/L下,系统研究反离子对二乙氨乙基葡聚糖接枝介质的蛋白质吸附与洗脱行为的影响。结果表明,二乙氨乙基葡聚糖接枝介质对不同反离子的偏好性存在差异,且该偏好性差异与基团所处位置(接枝链配基或表面配基)无关。同时,介质偏好性弱的反离子会通过促进二乙氨乙基葡聚糖接枝介质的"链传递"效应加快蛋白质的传质速率,从而提高动态吸附容量。因此,在使用二乙氨乙基葡聚糖接枝介质进行蛋白质色谱柱分离过程中,可在吸附操作中使用HPO42–,在洗脱操作中使用SCN–来优化分离效果。
关键词
离子交换
二乙氨乙基葡聚糖
反离子
吸附
动力学
线性梯度洗脱
Keywords
ion exchange
deae-dextran
grafting
counterions
adsorption
uptake kinetics
linear gradient elution
分类号
TQ936.2 [化学工程]
TQ317.3 [化学工程—高聚物工业]
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职称材料
题名
修饰和导入技术对于反义寡核苷酸的影响
6
作者
周毅
陆长德
机构
中国科学院上海生物化学研究所
出处
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
1996年第S1期45-51,共7页
基金
国家自然科学基金资助项目
文摘
合成了３′末端三个磷酸二酯键硫代修饰的针对ＤＮＡ聚合酶α的反义核苷酸ＡＳα，利用［３Ｈ］ＴｄＲ参入方法测定了ＡＳα对于ＨｅＬａ细胞ＤＮＡ复制的抑制效力。结果表明，这种修饰明显增强了寡核苷酸在含血清的细胞培养液中的稳定性。Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ能够促进ＡＳα的入胞并且增强其抑制效力。
关键词
反义寡核苷酸
稳定性
入胞
代谢
Lipofectin
DEAEDextran
Keywords
Antisense oligonucleotide,stability,cellular uptake,metabolism ,lipofectin,DEAE Dextran
分类号
Q524 [生物学—生物化学]
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职称材料
题名
长白山蝮蛇蛇毒的提取分离
7
作者
王恩福
王锐成
张振伟
机构
黑龙江省大庆市第三医院
出处
《黑龙江医药》
CAS
2000年第6期350-351,共2页
文摘
应用 DEAE 葡聚糖凝胶 A—50对蝮蛇蛇毒进行柱层析分离得到十三个蛋白峰,其有效组份为凝血酶样酶(精氨酸酯)分布在6、7、8峰,并对该组酶的活性进行初步探讨。
关键词
蛇毒
凝血酶样酶
DEAE
葡聚糖凝胶A-50
Keywords
Venom
thrombase
DEAE dextran gel A-50
分类号
R996.3 [医药卫生—毒理学]
暂未订购
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
HIV-1假病毒包装及感染条件优化
陈丹瑛
李蕊
张玥
宋川
韩俊燕
张媛媛
《检验医学与临床》
CAS
2017
3
暂未订购
2
DEAE-磁性纳米粒子提纯质粒的研究
孙敏莉
王强斌
张皓
古宏晨
张柏根
《上海第二医科大学学报》
CSCD
2003
5
在线阅读
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职称材料
3
DEAE-葡聚糖在SHIV病毒TCID50滴定及扩增中的作用
丛喆
姚南
蒋虹
金光
魏强
《中国实验动物学报》
CAS
CSCD
2011
2
在线阅读
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职称材料
4
沙眼衣原体血清型L2体外培养影响因素的研究
张军华
陈丽丽
李忠玉
吴移谋
《微生物学杂志》
CAS
CSCD
2011
0
暂未订购
5
反离子对牛血清白蛋白在荷电葡聚糖接枝介质中色谱行为的影响
韩德涛
白姝
龚玲莉
余林玲
孙彦
《化工进展》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2018
3
在线阅读
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职称材料
6
修饰和导入技术对于反义寡核苷酸的影响
周毅
陆长德
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
1996
0
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职称材料
7
长白山蝮蛇蛇毒的提取分离
王恩福
王锐成
张振伟
《黑龙江医药》
CAS
2000
0
暂未订购
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