文摘目的探究DDX解旋酶39A(DEAD-box RNA helicases 39A,DDX39A)对食管鳞癌KYSE-150和TE-1细胞生物学行为的影响及作用机制。方法利用癌症基因组图谱(the cancer genome atlas,TCGA)和高通量基因表达数据库(gene expression omnibus,GEO)分析DDX39A在食管鳞癌肿瘤组织和正常组织中的表达差异。进一步在TCGA数据库中,采用Spearman相关分析(设置r>0.5,P<0.05)得到与DDX39A表达最相关基因,通过京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)和基因集富集分析(gene set enrichment analysis,GSEA),注释DDX39A在食管鳞癌中的生物学功能。通过慢病毒介导的短发夹RNA(shRNA)干扰技术下调DDX39A在食管鳞癌KYSE-150和TE-1细胞中的表达,并将细胞分为对照(shCtrl)组和DDX39A敲减(shDDX39A)组。利用qPCR和Western blot法检测敲减效率;利用Celigo法、克隆形成实验和MTT法检测KYSE-150和TE-1细胞的增殖能力和活力;利用流式细胞术检测KYSE-150和TE-1细胞的凋亡水平;利用Transwell实验检测KYSE-150和TE-1细胞的迁移和侵袭能力;利用裸鼠成瘤实验检测敲减DDX39A对体内肿瘤的作用。利用Western blot法筛选敲减DDX39A后KYSE-150细胞内蛋白表达水平显著变化的肿瘤相关经典通路分子。通过慢病毒转染法构建已筛选的分子CDH2(Cadherin 2)过表达的稳转细胞系,并将KYSE-150细胞分为shDDX39A+NC-OE组(转染shDDX39A慢病毒和过表达空载对照病毒)和shDDX39A+CDH2-OE组(转染shDDX39A慢病毒和过表达CDH2病毒)。利用Celigo法、MTT法和Transwell实验分别检测过表达CDH2对DDX39A敲减细胞增殖能力、活力以及转移能力的影响。结果与正常组织相比,食管鳞癌组织中DDX39A的表达显著上调(P<0.001)。DDX39A及其相关基因主要作用于遗传信息的翻译与加工和细胞凋亡等过程。与shCtrl组相比,shDDX39A组KYSE-150和TE-1细胞中DDX39A的mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.01),KYSE-150和TE-1细胞增殖和细胞活力显著下降(P<0.001),KYSE-150和TE-1细胞的克隆形成能力显著降低(P<0.01),KYSE-150和TE-1细胞的凋亡水平显著升高(P<0.01),KYSE-150和TE-1细胞的迁移和侵袭能力显著下降(P<0.001)。裸鼠成瘤实验提示DDX39A敲减后瘤体的体积和质量均明显减少(P<0.001)。与shDDX39A+NC-OE组相比,shDDX39A+CDH2-OE组KYSE-150细胞的增殖、细胞活力以及转移能力均显著提高(P<0.001)。结论DDX39A可作为食管鳞癌诊治的新靶点,上调其表达可能通过诱导上皮间充质转化促进食管鳞癌细胞生长、迁移与侵袭。
