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LncRNA PRR34-AS1调节miR-296-5p/DDI2轴对结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响
1
作者 陈海洋 王春梅 +1 位作者 石金升 代贺阳 《中国细胞生物学学报》 2025年第7期1593-1603,共11页
该文旨在探究LncRNA PRR34-AS1调节miR-296-5p/DDI2轴对结直肠癌(CRC)细胞增殖、迁移和侵袭的影响。qRT-PCR法检测CRC细胞与组织中LncRNA PRR34-AS1、miR-296-5p、DDI2 mRNA水平;用双荧光素酶实验检测LncRNA PRR34-AS1与miR-296-5p及DDI... 该文旨在探究LncRNA PRR34-AS1调节miR-296-5p/DDI2轴对结直肠癌(CRC)细胞增殖、迁移和侵袭的影响。qRT-PCR法检测CRC细胞与组织中LncRNA PRR34-AS1、miR-296-5p、DDI2 mRNA水平;用双荧光素酶实验检测LncRNA PRR34-AS1与miR-296-5p及DDI2与miR-296-5p的靶向关系;将HCT116细胞分为Control组、sh-NC组、sh-PRR34-AS1组、sh-PRR34-AS1+antiNC组、sh-PRR34-AS1+anti-miR-296-5p组,除Control组外,其余各组转染质粒;用克隆法、划痕法和Transwell法分别检测HCT116细胞增殖、迁移、侵袭能力;免疫印迹和免疫组化法检测相关蛋白表达水平;裸鼠成瘤实验检测LncRNA PRR34-AS1对CRC移植瘤生长及对miR-296-5p、DDI2表达的影响。在CRC细胞和组织中,LncRNA PRR34-AS1、DDI2 mRNA表达水平升高,miR-296-5p表达水平降低(P<0.05)。在线预测显示,LncRNA PRR34-AS1与miR-296-5p、DDI2与miR-296-5p有靶向关系。与sh-NC组比较,sh-PRR34-AS1组细胞LncRNA PRR34-AS1、DDI2、PCNA、MMP-2、MMP-9表达下调,miR-296-5p表达上调,克隆形成数目、划痕愈合率、侵袭细胞数目降低(P<0.05);与sh-PRR34-AS1+anti-NC组比较,sh-PRR34-AS1+anti-miR-296-5p组miR-296-5p表达下调,DDI2、PCNA、MMP-2、MMP-9表达上调,克隆形成数目、划痕愈合率、侵袭细胞数目上升(P<0.05)。与sh-NC组相比,sh-PRR34-AS1组肿瘤体积更小、质量更低,LncRNA PRR34-AS1、DDI2表达下调,miR-296-5p表达上调(P<0.05)。抑制LncRNA PRR34-AS1可通过靶向miR-296-5p/DDI2轴,抑制CRC细胞的增殖、迁移、侵袭。 展开更多
关键词 结直肠癌 LncRNA PRR34-AS1 miR-296-5p ddi2 增殖 迁移 侵袭
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肝细胞DNA损伤诱导蛋白DDI2的单克隆抗体制备及鉴定 被引量：1
2
作者 沈冰 杜冰 +5 位作者 吕志武 肖凡 董芳 成军 吕联合 魏红山 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2011年第4期313-315,共3页
目的制备鼠抗DDI2蛋白单克隆抗体,并对其在细胞和组织中的定位进行初步研究。方法利用体外原核表达的DDI2蛋白,免疫BLAB/c小鼠,制备单克隆抗体。利用免疫组织化学技术明确该蛋白在组织中的定位。结果利用杂交瘤细胞技术,成功制备了两株D... 目的制备鼠抗DDI2蛋白单克隆抗体,并对其在细胞和组织中的定位进行初步研究。方法利用体外原核表达的DDI2蛋白,免疫BLAB/c小鼠,制备单克隆抗体。利用免疫组织化学技术明确该蛋白在组织中的定位。结果利用杂交瘤细胞技术,成功制备了两株DDI2单克隆抗体细胞系2H3、2B2。表达纯化的单克隆抗体具有较高的免疫活性。与正常对照组相比,肝损伤组织中该蛋白表达增强,且高表达于门脉周围肝实质细胞,并主要表达于细胞核。结论 DDI2的表达与四氯化碳诱导的肝损伤有关,损伤肝细胞主要表达于肝实质细胞的细胞核。 展开更多
关键词 DNA损伤诱导蛋白2(ddi2) 单克隆抗体 肝细胞 损伤 四氯化碳
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糖基转移酶抑制剂诱导原代肝细胞损伤中DNA损伤诱导蛋白DDI2 mRNA表达的研究
3
作者 杜冰 刘美燕 +4 位作者 吕志武 王新红 魏红山 肖凡 金世柱 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2013年第10期1026-1029,共4页
目的研究糖基转移酶抑制剂对原代培养大鼠肝细胞损伤中DNA损伤诱导蛋白2(DNA-damage inducible protein 2,DDI2)在mRNA水平表达的影响。方法原位胶原酶灌流法分离纯化大鼠原代肝细胞并培养,并用O-糖基化修饰抑制剂苄基-2-乙酰胺基-2-脱... 目的研究糖基转移酶抑制剂对原代培养大鼠肝细胞损伤中DNA损伤诱导蛋白2(DNA-damage inducible protein 2,DDI2)在mRNA水平表达的影响。方法原位胶原酶灌流法分离纯化大鼠原代肝细胞并培养,并用O-糖基化修饰抑制剂苄基-2-乙酰胺基-2-脱氧-α-D-吡喃半乳糖苷(Benzyl-α-GalNAc)及N-糖基化修饰抑制剂衣霉素(tunicamycin,TM)处理细胞,Real time-PCR法测定DDI2 mRNA表达水平。结果衣霉素处理后的原代培养肝细胞DDI2表达上调,而Benzyl-α-GalNAc处理后的原代培养细胞DDI2表达有所下调。结论衣霉素及Benzyl-α-GalNAc在转录水平上分别上调和下调大鼠原代肝细胞DDI2的表达,从而参与肝细胞损伤的调节。 展开更多
关键词 糖基转移酶抑制剂 DNA损伤诱导蛋白2 原代肝细胞 MRNA表达 肝细胞损伤
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miR-1271靶向DDI2对胶质瘤细胞增殖、凋亡的影响及机制
4
作者 杨明环 张波 +2 位作者 汤祥军 黄晓东 罗杰 《生物技术》 CAS 2022年第3期325-331,393,共8页
[目的]研究微小RNA-1271(miR-1271)对胶质瘤细胞增殖及凋亡的影响,并探讨其可能作用机制。[方法]体外培养胶质瘤细胞U251、A172、SHG139与人脑正常胶质细胞HEB,将胶质瘤U251细胞分为miR-con组、miRNA-1271组、anti-miR-con组、anti-miR-... [目的]研究微小RNA-1271(miR-1271)对胶质瘤细胞增殖及凋亡的影响,并探讨其可能作用机制。[方法]体外培养胶质瘤细胞U251、A172、SHG139与人脑正常胶质细胞HEB,将胶质瘤U251细胞分为miR-con组、miRNA-1271组、anti-miR-con组、anti-miR-1271组、si-con组、si-DDI2组、miRNA-1271+pcDNA组、miRNA-1271+pcDNA-DDI2组。qRT-PCR与蛋白印迹(Western Blot)检测细胞中miRNA-1271与DNA损伤诱导蛋白2(DDI2)的表达。应用MTT实验评估转染后胶质瘤U251细胞的增殖能力;应用流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测miRNA-1271与DDI2的靶标关系。[结果]与HEB细胞相比,miRNA-1271在胶质瘤U251、A172、SHG139细胞中的表达水平显著降低[(0.24±0.04)/(0.314±0.04)/(0.29±0.03)vs(1.00±0.12)](P<0.05),而DDI2 mRNA[(5.25±0.55)/(4.08±0.29)/(4.58±0.36)vs(1.00±0.11)]及蛋白表达水平[(0.64±0.07)/(0.51±0.06)/(0.59±0.07)vs(0.41±0.05)]均显著升高(P<0.05);与阴性对照组相比,miRNA-1271组胶质瘤U251细胞增殖活性显著降低[(1.24±0.15)vs(0.88±0.09)](P<0.05),而细胞凋亡率[(7.95±0.45)%vs(19.23±1.25)%]显著升高(P<0.05),Bax蛋白表达明显上调(P<0.05);与阴性对照组相比,si-DDI2组胶质瘤U251细胞增殖活性显著降低[(1.31±0.14)vs(0.89±0.09)](P<0.05),而细胞凋亡率[(4.73±0.58)%vs(18.67±1.08)%]显著升高(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实DDI2是miRNA-1271的靶基因;与miRNA-1271+pcDNA组相比,miRNA-1271+pcDNA-DDI2组胶质瘤U251细胞增殖活性显著升高[(0.81±0.11)vs(0.97±0.13)](P<0.05),而细胞凋亡率显著降低[(19.28±1.19)%vs(12.67±1.11)%](P<0.05)。[结论]miRNA-1271过表达可通过靶向DDI2基因进而抑制脑胶质瘤细胞增殖[(1.24±0.15)vs(0.88±0.09)]并诱导细胞凋亡[(7.95±0.45)%vs(19.23±1.25)%]。 展开更多
关键词 miRNA-1271 ddi2 胶质瘤 增殖 凋亡
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