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Screening of eye-position related genes with DD-RT-PCR and RDA in the hybrids between Japanese flounder Paralichthys olivaceus and stone flounder Kareius bicoloratus 被引量:2
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作者 陈妍婕 张全启 +6 位作者 齐洁 孙业盈 钟其旺 王旭波 王志刚 李朔 李春梅 《Chinese Journal of Oceanology and Limnology》 SCIE CAS CSCD 2009年第1期92-99,共8页
Flatfish or flounder moves one eye to change body proportion into vertebral asymmetry during metamorphosis, during which some become sinistral while others dextral. However, the mechanism behinds the eye-position has ... Flatfish or flounder moves one eye to change body proportion into vertebral asymmetry during metamorphosis, during which some become sinistral while others dextral. However, the mechanism behinds the eye-position has not been well understood. In this research, hybrids between Japanese flounder(♀) and stone flounder (♂) show mixed eye-location in both dextral type and sinistral type, and thus become good samples for studying the eye-migration. mRNAs from pro-metamorphosis sinistral and dextral hybrids larvae were screened with classical differential display RT-PCR (DD-RT-PCR) and representational difference analysis of cDNA (cDNA-RDA); 30 and 47 putative fragments were isolated, respectively. The cDNA fragments of creatine kinase and trypsinogen 2 precursor genes isolated by cDNA-RDA exhibited eye-position expression patterns during metamorphosis. However, none of the fragments was proved to be related to flatfishes’ eye-position specifically. Therefore, further studies and more sensitive gene isolated methods are needed to solve the problems. 展开更多
关键词 Eye-position dd-rt-pcr RDA Paralichthys olivaceus Kareius bicoloratus hybrid
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小鼠2-细胞胚胎ATP合成酶6基因特异表达分析及鉴定 被引量:6
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作者 杨立新 郁卫东 陈清轩 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期201-204,共4页
合子基因组活化是小鼠胚胎早期发育由细胞质调控向核调控转变的关键 .小鼠合子基因组活化发生在 2 细胞胚胎阶段 ,通过对 2 细胞胚胎阶段特异性表达基因的分析 ,可以从分子水平上揭示早期小鼠胚胎的发育机理 .用DD RTPCR技术 ,从单个... 合子基因组活化是小鼠胚胎早期发育由细胞质调控向核调控转变的关键 .小鼠合子基因组活化发生在 2 细胞胚胎阶段 ,通过对 2 细胞胚胎阶段特异性表达基因的分析 ,可以从分子水平上揭示早期小鼠胚胎的发育机理 .用DD RTPCR技术 ,从单个小鼠 2 细胞胚胎与成熟卵母细胞 (MII细胞 )中分离了 2个差异片段 ,片段 2同小鼠睾丸中表达的一个未知片段具有高度同源性 .经过cDNA文库构建、筛选 ,分离到其全长cDNA .序列分析结果表明 ,该基因为小鼠ATP合成酶亚单位 6基因 .ATP合成酶亚单位 6基因由线粒体DNA编码 ,与细胞内ATP的合成相关 .小鼠 2 细胞胚胎特异表达的ATP合成酶亚单位 展开更多
关键词 小鼠 胚胎发育 早期发育 ATP合成酶亚单位6基因 DD-RTPCR技术 合子基因组活化 2-细胞胚胎 特异表达 鉴定
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采用改进的差示PCR技术分离胃癌差异表达基因及其临床意义(英文) 被引量:13
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作者 崔大祥 阎小君 苏成芝 《第四军医大学学报》 1998年第6期601-605,共5页
目的:建立优化的差示PCR条件;运用建立的条件分离胃癌GC7901与胃粘膜GES-1细胞株之间的差异表达基因;根据获取的序列,设计引物并运用于检测胃癌组织、血、活检胃粘膜标本,拟筛选出检出率与符合率高的数对引物,建立胃癌基因诊断... 目的:建立优化的差示PCR条件;运用建立的条件分离胃癌GC7901与胃粘膜GES-1细胞株之间的差异表达基因;根据获取的序列,设计引物并运用于检测胃癌组织、血、活检胃粘膜标本,拟筛选出检出率与符合率高的数对引物,建立胃癌基因诊断方法.方法:LJGC7901与GES-1细胞株为研究对象,探索mRNA差示PCR的最佳反应条件,运用优化的条件分离细胞株之间的差异表达基因;以回收的片段作探针,打点杂交证实为真正的差异片段后,对产物进行直接测序及同源性检索;设计引物,采用RT-PCR方法检测胃癌组织、血、活检胃粘膜标本.结果:优化的差示PCR条件为:前5轮PCR循环采用94℃35s,40℃2min,72℃30s,后35轮PCR循环采用94℃45s,55℃2min,72℃1min,最后在72℃延伸7min;分离回收差异条带154条,从中选出17个片段作探针,打点杂交证实在两细胞株之间呈差异表达;对17个片段进行了测序,其中17个新序列被GenBank接受,接受号为AF054162至AF054172,AF071052至AF071058;其中5个序列引物在26例胃癌标本中检出覆盖率为100%,在9例病理确诊的胃癌患者活检胃粘膜中检出率100%,在17例病理确诊为胃癌患者血标本中检出率为53%.结论:优化了mRNA差示PCR技术条件;分离出154个差异表达的基因片段;筛选出17个新序? 展开更多
关键词 胃肿瘤 差异表达基因 差示PCR 聚合酶链反应
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17β-雌二醇对牡蛎性腺发育中P450基因表达的影响
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作者 柴迎 王春德 《水产科学》 CAS 北大核心 2012年第6期339-345,共7页
利用DD RT-PCR技术筛选出牡蛎中受雌激素调节的基因并对其进行测序,得到5条有注释的基因。采用RACE的方法获得了P450基因1400bp的cDNA序列,其中包含一个975bp的开放阅读框。序列比对表明,该基因属于CYP4V2家族。系统进化树分析表明所获... 利用DD RT-PCR技术筛选出牡蛎中受雌激素调节的基因并对其进行测序,得到5条有注释的基因。采用RACE的方法获得了P450基因1400bp的cDNA序列,其中包含一个975bp的开放阅读框。序列比对表明,该基因属于CYP4V2家族。系统进化树分析表明所获得的P450序列与袖扣海兔螺的CYP4V1和CYP4V2并到一起,与其他无脊椎动物的P450基因具有共同起源,但与脊椎动物的P450基因起源不同。应用Real-time PCR技术检测雌、雄长牡蛎在雌激素刺激后不同时间段P450的转录水平的变化。结果表明在17β-雌二醇刺激后,雌性牡蛎处理组性腺组织P450表现出具有显著的时间依赖性,在性腺被刺激后5d和10d时,P450基因的表达量达到最高,而雌激素对雄性牡蛎性腺组织P450的表达无显著影响。雌激素可能通过对P450的表达正反馈调控影响雌性牡蛎的性腺发育。 展开更多
关键词 长牡蛎 差异显示PCR 细胞色素P4504V2 实时荧光定量PCR
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野败型水稻的核质互作与基因差异表达 被引量:1
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作者 钱晓茵 高燕萍 杨金水 《复旦学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 1998年第2期163-167,共5页
运用差异展示(DD-RT-PCR)方法对野败型(wild abortion)细胞质雄性不育系珍汕97A及其相应的保持系珍汕97B基因产物进行比较分析,发现这两个核基因组完全相同的品系间约有10%的基因表达有差异.选取... 运用差异展示(DD-RT-PCR)方法对野败型(wild abortion)细胞质雄性不育系珍汕97A及其相应的保持系珍汕97B基因产物进行比较分析,发现这两个核基因组完全相同的品系间约有10%的基因表达有差异.选取一个差异表达明显的cDNA成员B132进行North-ern杂交发现,该基因在保持系中正常表达,在不育系中表达受到明显抑制,而在杂种一代中又正常表达,在恢复系中表达水平也很低,这是一种典型的核质互作现象.Southern杂交中,B132在HindⅢ和BamHⅠ酶切长度片段上,各品系间未呈现多态性. 展开更多
关键词 细胞质雄性不育 核质互作 基因表达 野败型水稻
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