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人Dcp2基因克隆表达、多克隆抗体的制备及其应用
被引量：
1
1
作者
刘利新
刘树峰
+2 位作者
常乃柏
刘辉
王嵬
《中国科学院研究生院学报》
CAS
CSCD
2007年第3期362-367,共6页
mRNA在细胞质内的稳定性是调控基因表达的重要方式.细胞以mRNA降解的方式对过时的、突变有害的mRNA进行及时清除,以保证基因的正确表达和细胞正常的生命活动.其中脱帽酶Dcp1/Dcp2在mRNA降解中起到主要作用,但对其降解mRNA的详细作用机...
mRNA在细胞质内的稳定性是调控基因表达的重要方式.细胞以mRNA降解的方式对过时的、突变有害的mRNA进行及时清除,以保证基因的正确表达和细胞正常的生命活动.其中脱帽酶Dcp1/Dcp2在mRNA降解中起到主要作用,但对其降解mRNA的详细作用机制了解甚少.到目前为止,尚没有该基因市售的抗体出现,阻碍了对该基因机理的研究.目的是利用PCR方法,从人的胎肝文库中克隆到Dcp2基因,制备其多克隆抗体血清.实验结果显示,通过溴化氰偶联柱子对该多克隆抗体血清经纯化得到的多克隆抗体,用于Western Blotting试验,可以检测到该蛋白内源性的表达;用于激光共聚焦定位实验显示,该内源性蛋白定位在细胞核内;此抗体同时可用于免疫沉淀实验.因此Dcp2基因和多克隆抗体的获得,为进一步研究该基因的功能创造了条件.
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关键词
dcp2
基因
多克隆抗体血清
蛋白印迹
免疫沉淀
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职称材料
Marc145细胞源DCP2基因克隆及其X1亚型蛋白高免血清制备
2
作者
陈绍品
温贵兰
+8 位作者
林汉卿
张升波
李昌红
徐丽
龚新勇
汪德生
文明
周碧君
程振涛
《基因组学与应用生物学》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第7期3017-3024,共8页
为分析DCP2基因的特点,研究其编码蛋白的生物学功能及其在病毒复制中的作用机制。本试验拟获取Marc145细胞源DCP2基因序列,构建其原核表达质粒,获得重组蛋白,制备高免血清。结果显示,成功获得了DCP2基因的两种转录变异体编码区,即长度为...
为分析DCP2基因的特点,研究其编码蛋白的生物学功能及其在病毒复制中的作用机制。本试验拟获取Marc145细胞源DCP2基因序列,构建其原核表达质粒,获得重组蛋白,制备高免血清。结果显示,成功获得了DCP2基因的两种转录变异体编码区,即长度为1263 bp的X1亚型和1158 bp的X2亚型,X1亚型基因序列与X2亚型相比,除了第576位碱基A变成G,第613位碱基C变成T,第945~1049位多出105 bp碱基外,其他地方完全一致。DCP2X1亚型基因编码氨基酸序列与X2亚型相比,除945~1049位多出的105 bp基因造成的第314~349个氨基酸的位置多出36个氨基酸外,其余完全一致,第576位、第613位碱基的不同并没有造成氨基酸的变化。DCP2 X1亚型蛋白二级结构与X2相比,除了多出的36个氨基酸不同外,其余地方也不一样。构建的携带DCP2 X1亚型基因的原核表达质粒,诱导表达的蛋白为不可溶性蛋白,纯化后免疫兔子,成功获得了针对DCP2 X1亚型原核表达蛋白的兔源高免血清,效价为1∶6400。本试验成功获得了DCP2基因X1、X2亚型编码区序列,并大量制得X1亚型重组原核表达蛋白及其高免血清,为进一步研究DCP2的生物学功能及其在病毒复制中的作用机制提供了必要材料。
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关键词
dcp2
Marc145
高免血清
原核表达
原文传递
题名
人Dcp2基因克隆表达、多克隆抗体的制备及其应用
被引量：
1
1
作者
刘利新
刘树峰
常乃柏
刘辉
王嵬
机构
中国科学院研究生院生物系
中国科学院生物物理研究所
卫生部北京医院血液科
出处
《中国科学院研究生院学报》
CAS
CSCD
2007年第3期362-367,共6页
基金
中国科学院院长基金项目(055001F)资助
文摘
mRNA在细胞质内的稳定性是调控基因表达的重要方式.细胞以mRNA降解的方式对过时的、突变有害的mRNA进行及时清除,以保证基因的正确表达和细胞正常的生命活动.其中脱帽酶Dcp1/Dcp2在mRNA降解中起到主要作用,但对其降解mRNA的详细作用机制了解甚少.到目前为止,尚没有该基因市售的抗体出现,阻碍了对该基因机理的研究.目的是利用PCR方法,从人的胎肝文库中克隆到Dcp2基因,制备其多克隆抗体血清.实验结果显示,通过溴化氰偶联柱子对该多克隆抗体血清经纯化得到的多克隆抗体,用于Western Blotting试验,可以检测到该蛋白内源性的表达;用于激光共聚焦定位实验显示,该内源性蛋白定位在细胞核内;此抗体同时可用于免疫沉淀实验.因此Dcp2基因和多克隆抗体的获得,为进一步研究该基因的功能创造了条件.
关键词
dcp2
基因
多克隆抗体血清
蛋白印迹
免疫沉淀
Keywords
dcp2
, polyclonal antibody, Western Blotting, immunoprecipitation
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
Marc145细胞源DCP2基因克隆及其X1亚型蛋白高免血清制备
2
作者
陈绍品
温贵兰
林汉卿
张升波
李昌红
徐丽
龚新勇
汪德生
文明
周碧君
程振涛
机构
贵州大学动物科学学院
毕节市七星关区农业农村局
贵州大学大数据与信息工程学院
出处
《基因组学与应用生物学》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第7期3017-3024,共8页
基金
国家自然科学基金(国科金计项[2014]44,批准号:31460668)
贵州省科学技术基金(黔科合J字[2015]2046号)
贵州省高层次创新型人才培养(黔财教[2017]号)共同资助。
文摘
为分析DCP2基因的特点,研究其编码蛋白的生物学功能及其在病毒复制中的作用机制。本试验拟获取Marc145细胞源DCP2基因序列,构建其原核表达质粒,获得重组蛋白,制备高免血清。结果显示,成功获得了DCP2基因的两种转录变异体编码区,即长度为1263 bp的X1亚型和1158 bp的X2亚型,X1亚型基因序列与X2亚型相比,除了第576位碱基A变成G,第613位碱基C变成T,第945~1049位多出105 bp碱基外,其他地方完全一致。DCP2X1亚型基因编码氨基酸序列与X2亚型相比,除945~1049位多出的105 bp基因造成的第314~349个氨基酸的位置多出36个氨基酸外,其余完全一致,第576位、第613位碱基的不同并没有造成氨基酸的变化。DCP2 X1亚型蛋白二级结构与X2相比,除了多出的36个氨基酸不同外,其余地方也不一样。构建的携带DCP2 X1亚型基因的原核表达质粒,诱导表达的蛋白为不可溶性蛋白,纯化后免疫兔子,成功获得了针对DCP2 X1亚型原核表达蛋白的兔源高免血清,效价为1∶6400。本试验成功获得了DCP2基因X1、X2亚型编码区序列,并大量制得X1亚型重组原核表达蛋白及其高免血清,为进一步研究DCP2的生物学功能及其在病毒复制中的作用机制提供了必要材料。
关键词
dcp2
Marc145
高免血清
原核表达
Keywords
dcp2
Marc145
Hyper immunized serum
Prokaryotic expression
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人Dcp2基因克隆表达、多克隆抗体的制备及其应用
刘利新
刘树峰
常乃柏
刘辉
王嵬
《中国科学院研究生院学报》
CAS
CSCD
2007
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
Marc145细胞源DCP2基因克隆及其X1亚型蛋白高免血清制备
陈绍品
温贵兰
林汉卿
张升波
李昌红
徐丽
龚新勇
汪德生
文明
周碧君
程振涛
《基因组学与应用生物学》
CAS
CSCD
北大核心
2020
0
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