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基于CRISPR/dCas9系统构建Sox17基因激活载体及其在绵羊胚胎干细胞中的验证 被引量：1
1
作者 吕文莉 杨花 +1 位作者 徐辉 张艳丽 《生物工程学报》 北大核心 2025年第7期2707-2718,共12页
CIRSPR/dCas9系统是当前较为高效精准的基因编辑工具,在其中加入转录激活因子(如VP64、p65、Rta)即可用于高效稳定激活目标基因。Sox17是SOX家族转录因子,在早期胚胎发育中的胚层分化、细胞命运决定等生物过程中发挥重要调控作用。绵羊... CIRSPR/dCas9系统是当前较为高效精准的基因编辑工具,在其中加入转录激活因子(如VP64、p65、Rta)即可用于高效稳定激活目标基因。Sox17是SOX家族转录因子,在早期胚胎发育中的胚层分化、细胞命运决定等生物过程中发挥重要调控作用。绵羊胚胎干细胞具有自我更新和多向分化的能力,是用于研究胚胎早期发育过程中细胞分化机制的重要体外模型,但是囿于其生长特性,难以实现外源基因的导入。为了探究激活绵羊胚胎干细胞中的Sox17基因的条件,本研究基于CRISPR/dCas9系统,利用脂质体转染、慢病毒侵染与电转等方法,对绵羊胚胎干细胞中的Sox17基因的进行激活,通过荧光定量PCR检测不同转染方法的Sox17表达量,对比不同条件的转染效果。结果表明电转法组在3种转染方法中转染效果最佳,Sox17表达量最高。高效稳定的基因激活方案可为其他物种尤其是家畜动物的胚胎干细胞研究提供参考,并为后续在绵羊胚胎干细胞中通过调控基因表达研究基因功能和实现精准的细胞命运调控奠定基础。 展开更多
关键词 胚胎干细胞 基因编辑 CRISPR/dcas9 Sox17 细胞转染
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可诱导的CRISPR-dCas9基因表达调控策略与方法 被引量：1
2
作者 王清灏 曹浩博 +1 位作者 吴雨璇 李逸豪 《基因组学与应用生物学》 北大核心 2025年第7期750-763,共14页
成簇规律间隔短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)系统作为一种高效、精确的基因编辑工具,已被广泛应用于基因功能研究、疾病治疗和生物技术开发。近年来,通过改造CRISPR系统,尤其是dCas... 成簇规律间隔短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)系统作为一种高效、精确的基因编辑工具,已被广泛应用于基因功能研究、疾病治疗和生物技术开发。近年来,通过改造CRISPR系统,尤其是dCas9蛋白和单链向导RNA(single guide RNA,sgRNA),研究人员开发出多种基因表达调控策略。其中可诱导的CRISPR基因表达调控系统通过整合外部刺激响应元件(如光、化学小分子、温度等),实现了对基因表达的时间和空间精准控制。本文综述了基于CRISPR系统的基因表达调控策略与方法的最新进展,重点介绍了基于蓝光、红光/远红光、化学小分子以及热触发的基因表达调控系统的原理、设计策略。这些策略不仅为功能基因组学研究提供了强有力的工具,也为新一代基因治疗技术的发展奠定了基础。 展开更多
关键词 CRISPR系统 dcas9蛋白 转录调控 可诱导调控系统
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具备高效CRISPR协同激活活性的HIEC6-dCas9-SAM稳转细胞株构建 被引量：1
3
作者 任柱平 杨泰然 +4 位作者 雷元三 金留飞 崔古贞 田益明 陈峥宏 《生物技术通报》 北大核心 2025年第5期52-61,共10页
【目的】以人正常肠道上皮细胞(HIEC6)为研究模型,建立具有高水平转录激活活性的HIEC6-dCas9-SAM单克隆细胞株,为利用CRISPR激活(CRISPRactivation,CRISPRa)系统筛选人类肠道疾病发生发展相关关键基因和探究分子致病机制提供细胞工具。... 【目的】以人正常肠道上皮细胞(HIEC6)为研究模型,建立具有高水平转录激活活性的HIEC6-dCas9-SAM单克隆细胞株,为利用CRISPR激活(CRISPRactivation,CRISPRa)系统筛选人类肠道疾病发生发展相关关键基因和探究分子致病机制提供细胞工具。【方法】首先利用PiggyBac转座子系统构建HIEC6-dCas9-SAM多克隆细胞;然后通过有限稀释法筛选单克隆细胞株,并使用免疫印迹、间接免疫荧光法鉴定单克隆细胞株中dCas9-SAM蛋白(dCas9、VP64、MS2、HSF1、p65)的表达情况;最后利用CRISPRa荧光报告系统和构建包装特定靶基因sgRNA慢病毒,检测所构建稳转株在转录和蛋白水平的CRISPR激活效率。【结果】成功获得两株HIEC6-dCas9-SAM单克隆细胞,两株细胞均能高水平稳定表达dCas9-SAM蛋白。CRISPRa荧光报告系统检测显示,两株HIEC6-dCas9-SAM稳转细胞的激活效率分别高达96.7%、99.0%。靶基因激活功能验证显示,在转录水平,两株HIEC6-dCas9-SAM稳转细胞中靶基因APN的转录激活水平分别高达2725倍和4521倍,SLC35A1基因的转录激活水平分别为27.5倍和18.1倍;在蛋白水平,APN蛋白的激活效率分别高于12.9倍和11.2倍,SLC35A1蛋白的激活效率分别为1.32倍和0.97倍。两株单克隆稳转细胞均表现出较高的转录激活活性。【结论】成功构建两株具有高水平CRISPR转录激活活性的HIEC6-dCas9-SAM单克隆稳转细胞,为后续基于CRISPRa系统筛选人类肠道疾病发生发展相关关键基因和探究分子致病机制提供了重要细胞工具。 展开更多
关键词 dcas9-SAM HIEC6细胞 CRISPR激活 稳转细胞株
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CRISPR/dCas9在细菌转录调控中的应用及展望 被引量：3
4
作者 钟成 黄龙辉 +2 位作者 刘其敬 谢燕燕 谭之磊 《天津科技大学学报》 CAS 2019年第2期1-5,11,共6页
CRISPR/dCas9是以CRISPR/Cas9系统为基础发展而来的转录调控工具.本文综述了CRISPR/dCas9作为转录抑制工具(CRISPRi)和转录激活工具(CRISPRa)的发展及应用,总结了在细菌中应用CRISPR/dCas9系统时转录调控系统的选择、构建、靶位点的选... CRISPR/dCas9是以CRISPR/Cas9系统为基础发展而来的转录调控工具.本文综述了CRISPR/dCas9作为转录抑制工具(CRISPRi)和转录激活工具(CRISPRa)的发展及应用,总结了在细菌中应用CRISPR/dCas9系统时转录调控系统的选择、构建、靶位点的选择以及gRNA的设计等方面存在的问题,并对相关解决方法进行了展望. 展开更多
关键词 CRISPR/dcas9 sgRNA 转录激活 转录抑制
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环状季铵盐类化合物研究Ⅲ．DCAS的合成及相转移催化作用 被引量：2
5
作者 李润涛 杨锦宗 +1 位作者 陈恒昌 曹胜利 《化学试剂》 CAS CSCD 北大核心 1995年第1期7-8,共2页
设计并合成了新的环状季铵盐ＤＣＡＳ。选择苯酚与环氧氯丙烷，在无水碳酸钾存在下，固－液相转移催化醚化形成苯基缩水甘油醚为基本反应，比较了ＤＣＡＳ与其他几种季铵盐的相转移催化作用。结果表明，ＤＣＡＳ具有很好的相转移催化性... 设计并合成了新的环状季铵盐ＤＣＡＳ。选择苯酚与环氧氯丙烷，在无水碳酸钾存在下，固－液相转移催化醚化形成苯基缩水甘油醚为基本反应，比较了ＤＣＡＳ与其他几种季铵盐的相转移催化作用。结果表明，ＤＣＡＳ具有很好的相转移催化性能，与ＴＢＡＳ相当。 展开更多
关键词 dcas 合成 相转移催化作用 苯基缩水甘油醚
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利用dCas9-FokⅠ编辑大鼠Dnmt1基因 被引量：1
6
作者 张旭 于磊 +4 位作者 陈炜 高珊 潘硕 张连峰 马元武 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期841-848,共8页
CRISPR/Cas9的发现为多种生物的基因编辑提供了强有力的工具。然而,该系统在提供靶向性基因修饰的同时,会产生一些不需要的突变,即脱靶现象。为提高CRISPR/Cas9的特异性,我们将野生型Fok I核酸内切酶的功能结构域与催化功能区失活的Cas... CRISPR/Cas9的发现为多种生物的基因编辑提供了强有力的工具。然而,该系统在提供靶向性基因修饰的同时,会产生一些不需要的突变,即脱靶现象。为提高CRISPR/Cas9的特异性,我们将野生型Fok I核酸内切酶的功能结构域与催化功能区失活的Cas9蛋白(dCas9)进行融合,形成融合蛋白用于降低脱靶效应。FokⅠ是一种依赖于二聚化才能行使内切酶活性的核酸酶,在本研究中,通过将FokⅠ功能结构融合到dCas9的N端,构建表达质粒p ST1374-dCas9-FokⅠ。我们前期研究中,发现一个sgRNA在介导Cas9编辑Dnmt1基因建立条件敲除大鼠时,存在显著的脱靶现象。以此为基础,我们利用dCas9-FokⅠ/sgRNA系统编辑大鼠Dnmt1基因,研究该系统是否能够进行基因编辑以及是否能够提高基因编辑特异性。将转录好的dCas9-FokⅠmRNA和sgRNA显微注射到SD大鼠的受精卵中,用于产生基因编辑大鼠。通过显微注射以及胚胎移植,最终获得43只F0代大鼠,其中两只在靶点位置包含突变,突变效率达4.5%。对脱靶情况进行分析,结果显示,无脱靶现象存在。综上,表明dCas9-FokⅠ/sgRNA可以应用于编辑大鼠基因,并能显著提高特异性。尽管dCas9-FokⅠ/sgRNA系统相比于Cas9/sgRNA系统,基因编辑效率有所下降,但是该技术的发展为基因治疗提供了可供选择的潜在工具。 展开更多
关键词 DNMT1 基因编辑 大鼠 dcas9 FokⅠ 脱靶
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CRISPR/dCas9-KRAB系统沉默猪LncRNA-NEAT1基因 被引量：1
7
作者 赵为民 戴超辉 +6 位作者 陈哲 涂枫 李辉 付言峰 李碧侠 任守文 程金花 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2023年第4期1036-1042,共7页
本研究利用RT-PCR检测LncRNA-NEAT1基因表达在细胞中的亚定位,采用5′RACE获得LncRNA-NEAT1基因的转录起始位点;利用CRISPOR软件对-300~0 bp区域的LncRNA-NEAT1启动子序列设计sgRNA并构建到px330载体,通过转染细胞与T7E1酶切验证sgRNA效... 本研究利用RT-PCR检测LncRNA-NEAT1基因表达在细胞中的亚定位,采用5′RACE获得LncRNA-NEAT1基因的转录起始位点;利用CRISPOR软件对-300~0 bp区域的LncRNA-NEAT1启动子序列设计sgRNA并构建到px330载体,通过转染细胞与T7E1酶切验证sgRNA效率;利用酶切和亚克隆方法将dCas9-KRAB-BSD片段替换px330载体的Cas9序列,形成重组px330-dCas9-KRAB载体;将验证有效的sgRNA构建到px330-dCas9-KRAB载体,形成px330-sgRNA-dCas9-KRAB载体。添加不同质量浓度的Blasticidin S处理细胞,以最小致死质量浓度来确定筛选质量浓度。转染px330-sgRNA-dCas9-KRAB载体并用Blasticidin S筛选细胞7 d后进行LncRNA-NEAT1基因的表达检测,同时对sgRNA在LncRNA-NEAT1基因启动子上的结合位点进行Sanger测序,以进一步验证上述结合位点是否发生切割。结果显示LncRNA-NEAT1主要表达于细胞核,而在细胞质中几乎不表达。5′RACE获得了LncRNA-NEAT15′端大约270 bp的序列。qPCR检测结果显示,与对照组相比,sgRNA1和sgRNA2能够显著抑制LncRNA-NEAT1的表达(P<0.05)。Sanger测序结果表明sgRNA1和sgRNA2所在的位点并没有发生碱基缺失和插入。研究结果为后续进一步研究LncRNA-NEAT1在先天性免疫反应中的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 CRISPR dcas9-KRAB LncRNA-NEAT1基因 猪 基因沉默
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CRISPR/dCas9技术在基因表达调控中的研究进展 被引量：2
8
作者 杨莎 郝海生 +6 位作者 杜卫华 庞云渭 赵善江 邹惠影 朱化彬 杨宇泽 赵学明 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第1期53-59,共7页
CRISPR/dCas9是在CRISPR/Cas9基因编辑系统的基础上改造升级建立起的一种用于调控基因组转录与表观遗传修饰的系统,它不仅继承了CRISPR/Cas9系统的精准性,同时还展现出了良好的作用效果。在该系统中dCas9蛋白保留了Cas9蛋白结合DNA的能... CRISPR/dCas9是在CRISPR/Cas9基因编辑系统的基础上改造升级建立起的一种用于调控基因组转录与表观遗传修饰的系统,它不仅继承了CRISPR/Cas9系统的精准性,同时还展现出了良好的作用效果。在该系统中dCas9蛋白保留了Cas9蛋白结合DNA的能力而切割功能不复存在。将dCas9蛋白与不同的激活、抑制效应子域和表观遗传调控酶偶联,可以对基因表达与表观遗传修饰进行精确调控。组蛋白乙酰化、组蛋白甲基化、DNA甲基化等表观遗传修饰过程是基因表达的基础,对整个生命过程作出了巨大的贡献,同时表观遗传与多种疾病和癌症都存在因果关系,因此以CRISPR/dCas9系统为框架的不同表观遗传修饰系统在人类疾病治疗和癌症研究领域具有重要的研究价值。笔者简要介绍了CRISPR/Cas9系统的发现过程以及作用原理,主要总结了以CRISPR/dCas9系统为框架的不同调控系统在基因表达调控和表观遗传调控中的应用以及优化过程,以期为从事相关领域的科研工作者提供一些参考。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9 dcas9 激活 抑制 表观遗传修饰
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CRISPR/dCas9干扰bcsD基因表达调控细菌纤维素结构 被引量：2
9
作者 黄龙辉 李雪晶 +4 位作者 孙雪文 王旭 王祎彤 贾士儒 钟成 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期772-779,共8页
木葡糖酸醋杆菌(Gluconacetobacter xylinus)是细菌纤维素的主要生产菌株。在该菌中,BcsD是纤维素合酶的亚基之一,参与细菌纤维素的组装过程。利用CRISPR/dCas9系统调控bcsD基因的表达量,获得了一系列bcsD基因表达量不同的木葡糖酸醋杆... 木葡糖酸醋杆菌(Gluconacetobacter xylinus)是细菌纤维素的主要生产菌株。在该菌中,BcsD是纤维素合酶的亚基之一,参与细菌纤维素的组装过程。利用CRISPR/dCas9系统调控bcsD基因的表达量,获得了一系列bcsD基因表达量不同的木葡糖酸醋杆菌。通过分析细菌纤维素的结构特征发现,细菌纤维素的结晶度和孔隙率随着木葡糖酸醋杆菌中bcsD表达量的变化而发生改变。其中孔隙率的变化范围在59.95%–84.05%之间,结晶度的变化范围在74.26%–93.75%之间,而细菌纤维素的产量并未因bcsD的表达量变化而发生显著下降。结果表明,bcsD的表达量低于55.34%后,细菌纤维素的孔隙率显著上升,并且细菌纤维素的结晶度与bcsD的表达量呈正相关。最终,通过干扰bcsD基因的表达,实现了一步发酵木葡糖酸醋杆菌获得了产量稳定且结构不同的细菌纤维素。 展开更多
关键词 CRISPR/dcas9 木葡糖酸醋杆菌 细菌纤维素 bcsD
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CRISPR/dCas9系统在活细胞成像领域的研究进展 被引量：1
10
作者 林斯雨 钟星 +2 位作者 马立新 乔洁 刘奕 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第9期3061-3070,共10页
研究不同基因、染色体以及基因与染色体之间的时空关系在遗传学、发育生物学和生物医学等领域具有重要意义。CRISPR/Cas9基因编辑技术具有优异的靶向性,已经成为应用最广泛的基因编辑工具。近年来,研究人员基于Cas9的核酸酶失活突变体dC... 研究不同基因、染色体以及基因与染色体之间的时空关系在遗传学、发育生物学和生物医学等领域具有重要意义。CRISPR/Cas9基因编辑技术具有优异的靶向性,已经成为应用最广泛的基因编辑工具。近年来,研究人员基于Cas9的核酸酶失活突变体dCas9发展了一系列先进的活细胞成像技术,为染色质、基因组特定位点的高分辨成像提供了快速、方便的研究工具。文中从细胞递送方式、荧光信号优化以及正交多色成像3个方面对CRISPR/dCas9系统在活细胞成像中的研究进展进行了综述,并对该领域的发展趋势进行了展望。 展开更多
关键词 基因编辑 CRISPR/dcas9 基因组成像 染色体成像
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CRISPR-dCas9系统在基因表达调控中的最新研究进展 被引量：2
11
作者 罗旻 顾华 《实验室研究与探索》 CAS 北大核心 2016年第3期20-23,共4页
CRISPR-Cas9系统自问世以来一直被广泛地应用于基因组编辑技术中,直到人们通过点突变的方式将Cas9的Ruv C和HNH剪切结构域失活得到d Cas9后,这个系统又有了新的功能——调节基因的表达水平。研究者通过改变g RNA的结构,并与RNA结合蛋白... CRISPR-Cas9系统自问世以来一直被广泛地应用于基因组编辑技术中,直到人们通过点突变的方式将Cas9的Ruv C和HNH剪切结构域失活得到d Cas9后,这个系统又有了新的功能——调节基因的表达水平。研究者通过改变g RNA的结构,并与RNA结合蛋白配对,从而招募转录因子以调节基因的转录水平,达到影响基因表达的目的。本文主要讨论了CRISPR-d Cas9系统的结构特点、作用原理和目前对调节基因表达的最新研究进展,以期为此领域的研究者提供参考。 展开更多
关键词 CRISPR dcas9 引导RNA 协同激活因子
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CRISPR/dCas9在苜蓿中华根瘤菌中的建立与应用 被引量：1
12
作者 吴香莹 董会娜 +1 位作者 刘振权 张大伟 《工业微生物》 CAS 2019年第6期32-38,共7页
本文探讨了CRISPR/dCas9系统对苜蓿中华根瘤菌Sinorhizobium meliloti 320内源hemE基因的弱化效果,以提高其维生素B 12的能力。实验首先验证了CRISPR/dCas9系统及CRISPR/dCas9系统不同N20靶向位点在S.meliloti 320中对外源基因gfp的弱... 本文探讨了CRISPR/dCas9系统对苜蓿中华根瘤菌Sinorhizobium meliloti 320内源hemE基因的弱化效果,以提高其维生素B 12的能力。实验首先验证了CRISPR/dCas9系统及CRISPR/dCas9系统不同N20靶向位点在S.meliloti 320中对外源基因gfp的弱化效果。结果显示,当添加诱导剂1%木糖时,单位OD荧光值降低为对照菌株的34.18%,当N20靶位靠近翻译起始位点时,对结构基因弱化效果明显。进一步探究CRISPR/dCas9对S.meliloti 320中内源的弱化效果发现,在加入终浓度为1%木糖诱导后,hemE基因的转录水平与对照相比下降了28.3%。将hemE基因弱化后的工程菌进行摇瓶发酵,其维生素B 12产量较对照株提高了9.86%。研究结果显示,hemE基因的弱化有效促进了代谢流引向维生素B 12合成,CRISPR/dCas9系统对S.meliloti 320内源结构基因具有较好的弱化效果。 展开更多
关键词 维生素B12 SINORHIZOBIUM MELILOTI CRISPR/dcas9 hemE基因
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基于CRISPR/dCas9-SAM系统筛选胃癌细胞增殖相关基因 被引量：1
13
作者 彭玉 巩琦凡 +5 位作者 台福敏 王田田 葛常辉 郑晓飞 秦宜德 付汉江 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2022年第11期1693-1698,共6页
目的利用CRISPR/dCas9-SAM系统探究影响胃癌细胞AGS增殖相关基因,分析其在胃癌发生发展中的作用。方法针对胃癌与正常胃组织差异表达的基因设计sgRNA,构建包装后获得慢病毒文库。以该文库感染AGS细胞后不同时间点作为筛选压力,收取第0、... 目的利用CRISPR/dCas9-SAM系统探究影响胃癌细胞AGS增殖相关基因,分析其在胃癌发生发展中的作用。方法针对胃癌与正常胃组织差异表达的基因设计sgRNA,构建包装后获得慢病毒文库。以该文库感染AGS细胞后不同时间点作为筛选压力,收取第0、7、14天3个时间点的AGS细胞。高通量测序分析感染后不同时间点AGS细胞中sgRNA富集情况,获得与AGS细胞增殖相关差异基因。结果生物信息学显示与0 d组相比,7 d组、14 d组分别获得阴性筛选差异基因42、45个,阳性筛选差异基因59、40个。其中7 d组和14 d组中阴性筛选和阳性筛选共有的基因各11个。结论筛选获得11个抑制AGS细胞增殖的基因,其中5个为蛋白编码基因,6个为长链非编码RNA(lncRNA)基因;筛选获得11个促进AGS细胞增殖的候选基因,其中3个为蛋白编码基因,8个为lncRNA基因。为进一步功能验证、全面解析胃癌发生发展过程奠定基础。 展开更多
关键词 CRISPR/dcas9-SAM系统 细胞增殖 胃癌 长链非编码RNA
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采用dCas9-SunTag-DNMT3A技术调控玻璃化冷冻牛卵母细胞IVF囊胚中IGF2R基因甲基化水平
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作者 杨莎 杨宇泽 +7 位作者 徐茜 郝海生 杜卫华 庞云渭 赵善江 邹惠影 朱化彬 赵学明 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期2015-2023,共9页
旨在探究dCas9-SunTag-DNMT3A编辑系统对玻璃化冷冻牛卵母细胞IVF囊胚中IGF2R基因甲基化水平及胚胎发育能力的影响,为冷冻卵母细胞/胚胎特定位点DNA甲基化的精确调控奠定基础。本研究将经过体外成熟的牛卵母细胞进行玻璃化冷冻,随后进... 旨在探究dCas9-SunTag-DNMT3A编辑系统对玻璃化冷冻牛卵母细胞IVF囊胚中IGF2R基因甲基化水平及胚胎发育能力的影响,为冷冻卵母细胞/胚胎特定位点DNA甲基化的精确调控奠定基础。本研究将经过体外成熟的牛卵母细胞进行玻璃化冷冻,随后进行体外受精,将受精所得到的原核胚进行dCas9-SunTag-DNMT3A编辑系统的注射,统计并计算卵母细胞的发育情况;通过亚硫酸盐测序的方式检测IGF2R基因启动子的甲基化水平,并利用荧光定量PCR检测IGF2R及相关基因的表达水平。与冷冻组相比,注射不同浓度的dCas9-SunTag-DNMT3A编辑系统后,只有40 ng·μL^(-1)组显著地提高了玻璃化冷冻卵母细胞IVF后的发育能力(P<0.05),20和60 ng·μL^(-1)组间差异不显著(P>0.05),但40 ng·μL^(-1)组发育效果仍然显著低于新鲜对照组(P<0.05);对检测冷冻组、新鲜组、40 ng·μL^(-1)组IGF2R基因启动子甲基化水平分析发现,40 ng·μL^(-1)组水平与新鲜组相似,显著高于冷冻组(P<0.05);荧光定量试验结果显示,40 ng·μL^(-1)组IGF2R基因mRNA表达水平相较于冷冻组显著降低(P<0.05),与新鲜组相似。注射40 ng·μL^(-1)的dCas9-SunTag-DNMT3A甲基化编辑系统能够通过有效升高IGF2R基因启动子甲基化水平(P<0.05)及显著降低其mRNA表达水平(P<0.05),来正向调节玻璃化冷冻卵母细胞IVF胚胎的发育情况,提高胚胎发育能力,使得其卵裂率和囊胚率都得到显著提高(P<0.05),同时促进胚胎发育相关基因的表达。 展开更多
关键词 dcas9-SunTag-DNMT3A 玻璃化冷冻 牛 IGF2R
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酿酒酵母中基于CRISPR/dCas9的基因转录调控工具的开发与应用 被引量：1
15
作者 陈永灿 张建志 司同 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期1-12,共12页
酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)是重要的模式真核微生物,广泛用于基础研究和工业发酵。基于CRISPR/dCas9系统开发的转录调控方法具有可编程、多重性和正交性等优点,在酿酒酵母的基因调控、功能基因组学、代谢工程等研究领域具有巨... 酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)是重要的模式真核微生物,广泛用于基础研究和工业发酵。基于CRISPR/dCas9系统开发的转录调控方法具有可编程、多重性和正交性等优点,在酿酒酵母的基因调控、功能基因组学、代谢工程等研究领域具有巨大潜力。本文关注酿酒酵母中CRISPR/dCas9基因转录调控工具的研究进展,阐述了不同转录调节结构域对dCas9或gRNA活性的调节,设计与优化dCas9和gRNA表达的方法,影响CRISPR/dCas9系统转录调控效率、特异性和通量的靶向性因素,最后总结了该工具在酿酒酵母代谢工程中的应用,并对该技术的未来发展提出了展望。 展开更多
关键词 酿酒酵母 CRISPR/dcas9 gRNA 转录调控 代谢工程
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dCas9基因激活系统在HIV体外扩增检测中的应用
16
作者 王蓓蕊 薛原 +3 位作者 张秀秀 冯佳 张勇刚 马峰 《中国输血杂志》 CAS 2019年第4期329-334,F0001,共7页
目的改进和提高HIV体外扩增检测的灵敏度,缩短检测时间。方法 1)用Broad Institute gRNA设计工具选取HIV的长末端重复序列(LTR)段设计20条gRNA(引导RNA)。2)用含荧光素酶报告的基因HIV(HIV-Luc)感染具有dCas9基因激活系统的Jurkat6465... 目的改进和提高HIV体外扩增检测的灵敏度,缩短检测时间。方法 1)用Broad Institute gRNA设计工具选取HIV的长末端重复序列(LTR)段设计20条gRNA(引导RNA)。2)用含荧光素酶报告的基因HIV(HIV-Luc)感染具有dCas9基因激活系统的Jurkat6465细胞系构建Jurkat6465-Luc细胞系,并将20条gRNA置于Jurkat6465-Luc细胞系中筛选出激活能力筛选,选取效率最高的gRNA-L,gRNA-L与dCas9基因激活系统包装成慢病毒感染Jurkat细胞系,建立可对HIV序列高效扩增的工作细胞系Jurkat6465-L。3)用HIV-Luc感染Jurkat细胞系构建HIV潜伏测试细胞系,设定其潜伏频率为1∶500,并与工作细胞Jurkat6465-L置于细胞培养箱中共同培养7和14 d观察工作细胞对HIV潜伏细胞系的激活能力。4)使用HIV激活剂SAHA和dCas9基因激活系统分别作用于设定潜伏频率为1∶500的潜伏细胞,分别比较对潜伏HIV的激活能力。结果首先,测定荧光素酶活性筛选出的2条具有高效HIV扩增能力的gRNA-L和gRNA-O,二者及对照组促进Jurkat6465-Luc的扩增效力(荧光素酶活性强度)(n=3,pg/mL),6 d分别为:85 530±979.2 vs 96 925±2 759 vs 9 876±437(P<0.01);选取gRNA-L与dCas9基因激活系统构建的Jurkat6465L细胞系作为工作细胞,测试设定潜伏频率为1/500的HIV潜伏测试细胞,在培养7、14 d激活HIV潜伏测试细胞的频率测定分别1/864和1/755,比培养14 d用SAHA激活HIV潜伏模型细胞频率1/1 180更接近设定潜伏频率值1/500;用HIV潜伏细胞测试dCas9基因激活系统激活HIV潜伏细胞频率1/615与对照SAHA激活剂激活HIV潜伏细胞频率1/749相比,更接近于设定频数1/500。结论 dCas9基因激活系统改进HIV体外扩增,可以提高HIV体外扩增检测的效率和灵敏度。 展开更多
关键词 HIV dcas9基因激活系统 体外扩增 潜伏病毒 荧光素酶活性
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CRISPR/dCas9系统的研究进展和应用 被引量：1
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作者 刘雅睿 《生物化工》 CAS 2023年第3期156-161,共6页
基于RNA指导的CRISPR/Cas9系统是目前分子生物学研究中最有效和成本最低的工具之一。若Cas9蛋白的HNH、RuvC结构域失活,就会形成失去剪切DNA能力的dCas9蛋白。与其他基因组调控技术相比,CRISPR/dCas9的主要优势在于其直接性、目标特异... 基于RNA指导的CRISPR/Cas9系统是目前分子生物学研究中最有效和成本最低的工具之一。若Cas9蛋白的HNH、RuvC结构域失活,就会形成失去剪切DNA能力的dCas9蛋白。与其他基因组调控技术相比,CRISPR/dCas9的主要优势在于其直接性、目标特异性、适应性和可逆性。本文介绍了CRISPR/dCas9的作用机制,总结了近年来CRISPR/dCas9在基因组调控(CRISPRi和CRISPRa)和表观遗传学修饰(DNA与组蛋白修饰)领域的研究进展及其在基因组成像、植物研究及癌症治疗方面的实际应用,对其未来可能的发展方向进行了展望,为CRISPR/dCas9进一步的研究提供参考。 展开更多
关键词 CRISPR/dcas9 基因组调控 表观遗传学 基因组成像
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基于TrustZone技术的DCAS终端设计
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作者 郝勇钢 李汪蔚 +3 位作者 韦安明 肖辉 黄征 郭捷 《信息安全与通信保密》 2016年第2期99-105,共7页
传统的条件接收系统(CA)的终端认证依赖硬件,当CA终端需要更换系统或者增加新的服务的时候,就必须更换硬件,这需要巨大的资源消耗。可下载的条件接收系统(DCAS)是一种在开放环境的认证授权体系,CA算法和密钥可以动态下载,使得软硬件分离... 传统的条件接收系统(CA)的终端认证依赖硬件,当CA终端需要更换系统或者增加新的服务的时候,就必须更换硬件,这需要巨大的资源消耗。可下载的条件接收系统(DCAS)是一种在开放环境的认证授权体系,CA算法和密钥可以动态下载,使得软硬件分离,DCAS终端可以适配不同的DCAS系统,降低了CA的私有性也解除了相应的潜在风险。DCAS终端为DCAS系统的客户端,它可以在不改变硬件的条件下通过下载CA应用来更新自身的CA系统。ARM TrustZ one技术是ARM架构的安全扩展,本文提出了基于TrustZ one技术的DCAS终端设计,介绍了系统的硬件软件结构,分析了其安全认证机制和安全启动流程,综合给出了一个DCAS终端设计方案。 展开更多
关键词 dcas终端 可下载条件接收系统 TRUSTZONE
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可下载CA(DCAS)的分析与应用实践 被引量：2
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作者 戴维民 刘诚 《广播与电视技术》 2014年第8期89-90,92,共4页
目前中国广电正处于三网融合以及终端智能化的关键时期,有线电视终端已经开始被各种智能终端包围,尽快升级传统的CA技术,实施DCAS显得尤为迫切。本文通过对DCAS的技术原理,系统流程的调查研究,提出了未来在泰州发展DCAS智能终端的方法。
关键词 dcas 技术原理 系统流程 智能终端
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基于TVOS的DCAS规模应用与分析 被引量：2
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作者 陈亮 《广播电视信息》 2017年第10期142-145,共4页
华数对DCAS技术的研究、部署和应用示范工作,突破了传统CAS领域中的关键技术限制,为广电TVOS平台硬件的统一设计生产、全国销售排除了CAS环节的技术障碍。DCAS与TVOS的紧密结合,为广电智能化业务提供了展示平台,有力地促进广电行业的技... 华数对DCAS技术的研究、部署和应用示范工作,突破了传统CAS领域中的关键技术限制,为广电TVOS平台硬件的统一设计生产、全国销售排除了CAS环节的技术障碍。DCAS与TVOS的紧密结合,为广电智能化业务提供了展示平台,有力地促进广电行业的技术革新和产业发展,为进一步推动我国数字媒体内容产业有序发展发挥重要作用。 展开更多
关键词 dcas TVOS 规模应用
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