丝胶蛋白对小鼠DC2.4细胞成熟及抗原提呈功能的影响

1

作者 李海波 李海文 +1 位作者 张兆林 骆发增 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期433-439,共7页

抗原提呈在免疫反应中发挥重要作用,是激活特异免疫系统的唯一机制。丝胶蛋白已被证实具有提高天然性免疫的作用。为探讨丝胶蛋白对小鼠树突状细胞抗原提呈功能的影响,进一步阐明丝胶蛋白增强免疫反应的分子机制,通过体外实验研究丝胶... 抗原提呈在免疫反应中发挥重要作用,是激活特异免疫系统的唯一机制。丝胶蛋白已被证实具有提高天然性免疫的作用。为探讨丝胶蛋白对小鼠树突状细胞抗原提呈功能的影响,进一步阐明丝胶蛋白增强免疫反应的分子机制,通过体外实验研究丝胶蛋白对DC2.4细胞增殖、成熟度和表面分子表达的影响,以及通过体内实验研究丝胶蛋白对小鼠抗体水平的影响。流式细胞仪检测结果显示,丝胶蛋白能明显提高成熟DC2.4细胞表面分子MHCⅡ和CD86的表达水平。CCK8法检测发现丝胶蛋白能促进DC2.4细胞增殖,最佳丝胶蛋白浓度为1 mg/mL以内;且可显著促进DC2.4刺激的T淋巴细胞增殖。用模式抗原OVA免疫小鼠,ELISA法检测发现丝胶蛋白处理组小鼠血清中的IgG和IgG1抗体含量分别比PBS空白组高30%~40%。综上,丝胶蛋白可能通过促进DC2.4细胞成熟,增强DC2.4细胞的抗原呈递作用并进一步刺激T细胞增殖,促进特异性免疫应答。研究结果为丝胶蛋白的现代免疫学应用提供了参考。 展开更多

关键词 丝胶蛋白 dc2.4细胞 抗原提呈

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人参总皂苷对DC2.4细胞增殖、抗原吞噬和表面分子表达的影响 被引量：5

2

作者 殷胜骏 彭桂英 +3 位作者 顾立刚 周英武 韩涛 万巧凤 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期552-555,共4页

目的:观察人参总皂苷对树突状细胞系DC2.4细胞增殖、抗原吞噬和表面分子表达的影响。方法:体外培养DC2.4细胞,加入不同剂量人参总皂苷后,MTT法检测不同时点细胞增殖;流式细胞仪检测细胞表面分子CD40、CD86和MHCⅡ的表达,以及对卵清蛋白... 目的:观察人参总皂苷对树突状细胞系DC2.4细胞增殖、抗原吞噬和表面分子表达的影响。方法:体外培养DC2.4细胞,加入不同剂量人参总皂苷后,MTT法检测不同时点细胞增殖;流式细胞仪检测细胞表面分子CD40、CD86和MHCⅡ的表达,以及对卵清蛋白抗原的吞噬作用。结果:单纯加入脂多糖(LPS)经培养48h后DC2.4细胞增殖明显(P<0.05),人参总皂苷可明显抑制LPS诱导的DC2.4细胞增殖(P<0.05);此外,人参总皂苷可促进DC2.4细胞吞噬抗原的能力,并协同LPS上调CD40、CD86和MHCⅡ分子表达。结论:人参总皂苷可以维持DC2.4细胞数量的稳态,促进DC2.4细胞吞噬抗原,并与LPS协同促进DC2.4细胞成熟,并具有促进抗原提呈的作用。 展开更多

关键词 人参总皂苷 dc2.4细胞 细胞增殖 抗原吞噬 表面分子

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DC2.4表面分子与RelB基因表达的关系 被引量：4

3

作者 包杰 郑磊 +4 位作者 曾方银 杨红玲 裘宇容 李娟 王前 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期56-58,共3页

目的探讨DC2.4表面分子表达水平与RelB基因表达间的关系。方法用RPMI1640完全培养液培养DC2.4细胞系,光学显微镜观察培养细胞的形态特征;透射电镜观察DC2.4的细胞结构;流式细胞术分析DC2.4的表面标记(MHC-II、CD86和CD40);RT-PCR检测DC... 目的探讨DC2.4表面分子表达水平与RelB基因表达间的关系。方法用RPMI1640完全培养液培养DC2.4细胞系,光学显微镜观察培养细胞的形态特征;透射电镜观察DC2.4的细胞结构;流式细胞术分析DC2.4的表面标记(MHC-II、CD86和CD40);RT-PCR检测DC2.4的RelB表达水平。结果光镜观察DC2.4细胞表面有明显的树突状突起,形态极不规则;透射电镜显示DC2.4细胞内含许多质地均匀的脂滴,可见吞噬小泡样的结构。流式细胞术显示MHC-II类分子和CD40呈低水平表达,而CD86分子却呈高水平表达;RT-PCR结果显示RelB呈低水平表达,与骨髓源性DC中的未成熟状态DC的RelB表达水平接近。结论DC2.4具有强吞噬功能,其表面CD40分子和细胞内RelB基因均呈低水平表达,提示DC2.4是一种未成熟状态的细胞系。 展开更多

关键词 dc2.4 RELB 基因表达

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青藤碱抑制体外培养DC2.4树突状细胞的生物学活性并减少炎症因子分泌 被引量：7

4

作者 王竹 王冰冰 +3 位作者 官菊梅 张欣悦 王忆梅 高永翔 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第5期660-663,共4页

目的观察青藤碱对DC2.4树突状细胞的生物学活性的影响。方法培养DC2.4细胞,根据MTT方法确定药物最佳给药浓度及给药时间,分为正常组、脂多糖(LPS)模型对照组、40μg/m L青藤碱高浓度组、20μg/m L青藤碱组、10μg/m L青藤碱组、25 ng/m ... 目的观察青藤碱对DC2.4树突状细胞的生物学活性的影响。方法培养DC2.4细胞,根据MTT方法确定药物最佳给药浓度及给药时间,分为正常组、脂多糖(LPS)模型对照组、40μg/m L青藤碱高浓度组、20μg/m L青藤碱组、10μg/m L青藤碱组、25 ng/m L甲氨蝶呤阳性对照组。5μg/m L LPS刺激DC2.4细胞24 h,给予不同浓度的青藤碱,刺激24、48、72 h,收集细胞上清液,ELISA检测细胞上清液中的γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、IL-10、IL-12、CD80的含量。结果不同浓度青藤碱处理各组与甲氨蝶呤处理组均可降低TNF-α、CD80、IFN-γ、IL-6、IL-12的含量,而各处理组的IL-10含量均有所增加,且20μg/m L终浓度青藤碱作用后的TNF-α、CD80、IFN-γ、IL-6、IL-10、IL-12的含量相比于其他浓度青藤碱更接近正常组的含量。结论 20μg/m L青藤碱可抑制DC2.4细胞的生物学活性,减少DC的炎症因子分泌。 展开更多

关键词 青藤碱 dc2.4 类风湿性关节炎

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人参皂苷对DC2.4吞噬抗原和表达CD40分子的影响 被引量：4

5

作者 殷胜骏 彭桂英 +3 位作者 顾立刚 韩涛 周英武 万巧凤 《中华中医药学刊》 CAS 2012年第7期1487-1489,共3页

目的:观察人参皂苷Rg1、Rb1及其联合使用对树突状细胞系DC2.4吞噬抗原和表面分子表达的影响。方法:体外培养DC2.4细胞,分别加入不同剂量人参皂苷Rg1、Rb1及Rg1+Rb1孵育24h后,分别加入异硫氰酸荧光素标记的卵白蛋白(FITC-OVA),流式细胞... 目的:观察人参皂苷Rg1、Rb1及其联合使用对树突状细胞系DC2.4吞噬抗原和表面分子表达的影响。方法:体外培养DC2.4细胞,分别加入不同剂量人参皂苷Rg1、Rb1及Rg1+Rb1孵育24h后,分别加入异硫氰酸荧光素标记的卵白蛋白(FITC-OVA),流式细胞仪检测DC2.4细胞吞噬卵白蛋白抗原的情况;体外培养DC2.4细胞,分别加入LPS和不同剂量人参皂苷孵育24h,流式细胞仪检测细胞表面分子CD40的表达。结果:人参皂苷Rg1、Rb1、Rg1+Rb1在一定浓度可促进DC2.4细胞抗原吞噬的能力;三者均抑制CD40的表达。结论:人参皂苷Rg1、Rb1可通过影响DCs的抗原吞噬功能来发挥免疫调节作用;Rg1、Rb1联合使用与单独应用比较无明显差异。 展开更多

关键词 人参皂苷 dc2.4细胞 抗原吞噬 表面分子

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细菌脂多糖诱导小鼠DC2.4细胞TLR7蛋白的表达 被引量：3

6

作者 杨恒丽 姬新颖 +5 位作者 王平忠 潘蕾 连建奇 郝春秋 王伟 贾战生 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期438-440,共3页

目的:探讨细菌脂多糖(LPS)对小鼠树突状细胞(DC)系DC2.4TLR7蛋白表达的诱导作用。方法:用RPMI1640完全培养液培养DC2.4细胞,光学显微镜观察LPS刺激前后的细胞形态特征,RT-PCR和Western blot分别测定TLR7 mRNA和蛋白表达。结果:LPS刺激前... 目的:探讨细菌脂多糖(LPS)对小鼠树突状细胞(DC)系DC2.4TLR7蛋白表达的诱导作用。方法:用RPMI1640完全培养液培养DC2.4细胞,光学显微镜观察LPS刺激前后的细胞形态特征,RT-PCR和Western blot分别测定TLR7 mRNA和蛋白表达。结果:LPS刺激前后,细胞中均有TLR7 mRNA转录。LPS刺激前,细胞较小而透亮,树突较少,无TLR7蛋白表达;LPS刺激后,细胞体积增大,树突增粗增多,刺激后12h、24h、48h,TLR7蛋白均有表达,且在3个时间点的表达量基本一致。结论:LPS可诱导DC2.4中TLR7蛋白的表达。 展开更多

关键词 脂多糖 dc2.4细胞 TLR7

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小鼠Foxp3基因慢病毒载体构建及其在DC2.4细胞的表达 被引量：3

7

作者 宫玉波 黄一飞 +5 位作者 黎燕 韩根成 刘勇 王大江 杜改萍 余继锋 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期721-724,共4页

目的:构建小鼠Foxp3基因的慢病毒载体,体外感染树突状细胞DC2.4,制备Foxp3+DC细胞,为进一步研究其免疫调节作用奠定基础。方法:将小鼠Foxp3基因克隆到慢病毒pGC-FU载体,通过PCR和测序鉴定获得连接正确的克隆。将鉴定后的重组表达质粒pGC... 目的:构建小鼠Foxp3基因的慢病毒载体,体外感染树突状细胞DC2.4,制备Foxp3+DC细胞,为进一步研究其免疫调节作用奠定基础。方法:将小鼠Foxp3基因克隆到慢病毒pGC-FU载体,通过PCR和测序鉴定获得连接正确的克隆。将鉴定后的重组表达质粒pGC-FU-Foxp3与pHelper1.0质粒和pHelper2.0质粒共转染293T细胞,制备携带Foxp3基因的慢病毒Lentivirus-Foxp3。Lentivirus-Foxp3感染体外培养的DC细胞,流式细胞术(FCM)检测感染后的DC细胞Foxp3表达。结果:构建的慢病毒载体pGC-FU-Foxp3经PCR鉴定和测序正确,包装慢病毒Lentivirus-Foxp3滴度为2×108TU/mL。慢病毒Lentivirus-Foxp3感染DC2.4细胞后Foxp3表达明显增加。结论:成功构建了小鼠Foxp3基因的慢病毒表达载体,慢病毒Lentivirus-Foxp3能有效感染DC细胞。 展开更多

关键词 FOXP3 慢病毒 dc2.4

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TLR8在小鼠DC2.4细胞中的表达及其作用 被引量：2

8

作者 朱广丽 顾绍庆 +3 位作者 张芸 王胜军 许化溪 邵启祥 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期853-856,共4页

目的探讨应用CL075和Poly(dT)后,TLR8及其相关细胞因子IL-12、IL-10在小鼠DC2.4细胞中的表达情况。方法常规培养DC2.4细胞,光学显微镜观察未刺激组、Poly(dT)刺激组、CL075和Poly(dT)共同刺激组细胞的形态变化;Real-timePCR测定TLR8、IL... 目的探讨应用CL075和Poly(dT)后,TLR8及其相关细胞因子IL-12、IL-10在小鼠DC2.4细胞中的表达情况。方法常规培养DC2.4细胞,光学显微镜观察未刺激组、Poly(dT)刺激组、CL075和Poly(dT)共同刺激组细胞的形态变化;Real-timePCR测定TLR8、IL-12、IL-10的mRNA表达;ELISA测定IL-12、IL-10的蛋白表达;Western blot测定TLR8的蛋白表达。结果未刺激及Poly(dT)刺激组细胞较幼稚,树突较短且少。CL075和Poly(dT)刺激组细胞活化,树突增多且伸长;Poly(dT)刺激组DC2.4细胞中TLR8、IL-12、IL-10的mRNA及蛋白表达量与阴性对照组相比均无统计学意义。CL075和Poly(dT)刺激组DC2.4细胞中TLR8、IL-12的mRNA及蛋白表达量较阴性对照组明显升高(P<0.05或P<0.01),而IL-10的mRNA及蛋白表达量则明显低于阴性对照组(P<0.01或P<0.05)。结论应用CL075和Poly(dT)后,TLR8、IL-12在小鼠DC2.4细胞中的表达水平明显升高,而IL-10的表达水平则明显降低。 展开更多

关键词 TLR8 dc2.4细胞 CL075 Poly(dT)

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林可霉素对树突状细胞系DC2.4免疫功能影响的初步研究 被引量：2

9

作者 张慧 焦志军 +4 位作者 毛朝明 蒋茜 仝佳 王胜军 许化溪 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第7期763-766,共4页

目的:探讨林可霉素(lin)对树突状细胞(DCs)系DC2.4免疫功能的影响。方法:设立3个组:DC2.4细胞组,DC2.4细胞+LPS组及DC2.4细胞+LPS+lin组(LPS及lin均为500 ng/mL)。在倒置显微镜下观察各实验组中DC2.4细胞的形态学变化。同时采用流式细... 目的:探讨林可霉素(lin)对树突状细胞(DCs)系DC2.4免疫功能的影响。方法:设立3个组:DC2.4细胞组,DC2.4细胞+LPS组及DC2.4细胞+LPS+lin组(LPS及lin均为500 ng/mL)。在倒置显微镜下观察各实验组中DC2.4细胞的形态学变化。同时采用流式细胞仪分析DC2.4细胞表面标志MHC-Ⅱ类分子、CD86和CD80的表达。采用同种异体混合淋巴细胞反应(MLR)检测各实验组中DC2.4细胞刺激同种异体T淋巴细胞增殖的能力。用ELISA试剂盒检测干扰素-γ(IFN-γ)水平的变化。结果:倒置显微镜下显示,DC2.4细胞组为未成熟DCs形态,DC2.4细胞+LPS组及DC2.4细胞+LPS+lin两组均为成熟DCs的形态。流式细胞术分析证实,500 ng/mL LPS可以促进DC2.4细胞表面MHC-Ⅱ类分子、CD86和CD80的表达,并增强其刺激T细胞增殖及IFN-γ的分泌。但500 ng/mL lin联合500 ng/mL LPS能够部分抑制DC2.4细胞免疫调节作用。结论:Lin可以部分抑制成熟DC2.4细胞的免疫调节功能。 展开更多

关键词 dc2.4细胞 林可霉素 免疫调节

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地塞米松对小鼠DC2.4细胞表型及功能的影响 被引量：1

10

作者 宫玉波 黄一飞 +6 位作者 黎燕 韩根成 李育蓉 王大江 杜改萍 余继锋 宋静 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期759-763,共5页

目的研究地塞米松(dexamethasone,Dex)对DC2.4细胞表型及功能的影响。方法取生长状态良好的DC2.4细胞,随机分为4组,A组为对照组;B、C、D组分别为50、100、200μg/L地塞米松组,每组DC2.4细胞培养6d。用流式细胞术测定DC表面CD80,CD86,Gal... 目的研究地塞米松(dexamethasone,Dex)对DC2.4细胞表型及功能的影响。方法取生长状态良好的DC2.4细胞,随机分为4组,A组为对照组;B、C、D组分别为50、100、200μg/L地塞米松组,每组DC2.4细胞培养6d。用流式细胞术测定DC表面CD80,CD86,Galectin-9及PD-L1的表达,ELISA方法检测其培养上清IL-12的浓度,用混合淋巴细胞培养法检测其对同种异体T细胞的刺激能力。结果与对照组相比,经不同剂量地塞米松修饰的DC2.4细胞其表面CD80,CD86,Galectin-9及PD-L1的表达无明显改变,但地塞米松用药组显著减少IL-12的分泌及抑制刺激同种异体T细胞增殖的能力。结论 DC2.4细胞是一细胞表型稳定的细胞系;地塞米松没有明显改变其细胞表型,但抑制其细胞因子的分泌,降低其刺激同种异体反应T细胞增殖的能力。 展开更多

关键词 dc2.4 半乳糖凝集素-9 程序化死亡因子配体1 地塞米松 免疫耐受

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小鼠骨髓源性树突状细胞和DC2.4中RelB基因表达水平的比较研究 被引量：1

11

作者 郑磊 包杰 +3 位作者 王前 顾春瑜 裘宇容 李娟 《热带医学杂志》 CAS 2006年第7期745-748,772,共5页

目的比较研究体外分离培养的小鼠骨髓来源的树突状细胞(bonemarrow-deriveddendriticcells,BM-DC)和DC2.4中核转录因子RelB基因的表达水平。方法无菌从C57BL/6小鼠股骨和胫骨中取出骨髓细胞,利用rmGM-CSF和rmIL-4联合诱导体系扩增骨髓... 目的比较研究体外分离培养的小鼠骨髓来源的树突状细胞(bonemarrow-deriveddendriticcells,BM-DC)和DC2.4中核转录因子RelB基因的表达水平。方法无菌从C57BL/6小鼠股骨和胫骨中取出骨髓细胞,利用rmGM-CSF和rmIL-4联合诱导体系扩增骨髓前体细胞的方法产生未成熟的BM-DC,未成熟的BM-DC在培养结束前18h经LPS刺激获得成熟的BM-DC;DC2.4细胞系用含10%胎牛血清的RPMI1640完全培养液于37℃,5%CO2条件孵箱中培养。用流式细胞术分析它们的表型,用RT-PCR和免疫荧光染色法检测成熟的BM-DC、未成熟的BM-DC和DC2.4,RelBmRNA和其蛋白的表达。结果流式细胞术分析显示MHC-Ⅱ类分子和共刺激分子CD40在未成熟的BM-DC和DC2.4中均呈低水平表达,在成熟的BM-DC中则呈高水平表达;共刺激分子CD86在成熟的BM-DC和DC2.4中均呈高水平表达,而在未成熟的BM-DC中呈低水平表达。RT-PCR和免疫荧光染色法检测结果均显示,RelB基因在未成熟的BM-DC和DC2.4中均呈低水平表达;而在成熟的BM-DC中呈高水平表达,成熟的BM-DC与未成熟BM-DC及DC2.4均存在显著差异(P<0.01)。结论RelB基因的表达与小鼠BM-DC的成熟状态密切相关。RelB基因在DC2.4中呈低水平表达,提示DC2.4是一种不成熟的DC细胞系。DC2.4具有的未成熟DC的特点可能与RelB基因的低水平表达有一定关系。抑制骨髓DC中RelB基因的表达,有可能诱导产生具有耐受原性的未成熟的DC。 展开更多

关键词 小鼠 骨髓源性树突状细胞 dc2.4 RELB 基因表达

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Foxp3,Galectin-9,PD-L1在小鼠DC2.4细胞的表达 被引量：1

12

作者 宫玉波 黄一飞 +6 位作者 韩根成 李育蓉 李新颖 王大江 杜改萍 余继锋 宋静 《军医进修学院学报》 CAS 2011年第1期75-77,共3页

目的观察CD80,CD86,Foxp3,Galectin-9,PD-L1在小鼠DC细胞的表达,了解小鼠DC2.4细胞系的免疫学特性。方法用含10%胎牛血清的RPMI-1640培养液培养小鼠DC2.4细胞,光学显微镜观察细胞形态;流式细胞术检测CD80,CD86,Foxp3,Galectin-9,PD-L1在... 目的观察CD80,CD86,Foxp3,Galectin-9,PD-L1在小鼠DC细胞的表达,了解小鼠DC2.4细胞系的免疫学特性。方法用含10%胎牛血清的RPMI-1640培养液培养小鼠DC2.4细胞,光学显微镜观察细胞形态;流式细胞术检测CD80,CD86,Foxp3,Galectin-9,PD-L1在DC2.4细胞表达。结果光学显微镜示小鼠DC2.4细胞贴壁生长,呈树突、梭形及不规则形;流式细胞术检测DC2.4细胞CD80表达为91.04%±4.90%,CD86表达为98.54%±1.96%,Foxp3无或微表达,Galectin-9表达为14.33%±2.94%,PD-L1表达为98.80%±0.63%。结论小鼠DC2.4细胞是一个高表达CD80,CD86及PD-L1,低表达Galectin-9,无或微表达Foxp3的细胞系。 展开更多

关键词 dc2.4 FOXP3 半乳糖凝集素-9 程序化死亡因子配体1

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卡介菌多糖核酸对小鼠DC2.4细胞的影响 被引量：6

13

作者 郭亚南 文海泉 宁云山 《皮肤性病诊疗学杂志》 2010年第2期107-109,共3页

目的:研究卡介菌多糖核酸(BCG-PSN)对小鼠DC2.4细胞的影响。方法:用5μg/mL(BCG-PSN5组)、20μg/mL(BCG-PSN20组)、50μg/mL(BCG-PSN50组)BCG-PSN刺激小鼠DC2.4细胞,用倒置显微镜观察细胞生长状态,流式细胞仪检测主要组织相容性复合物(M... 目的:研究卡介菌多糖核酸(BCG-PSN)对小鼠DC2.4细胞的影响。方法:用5μg/mL(BCG-PSN5组)、20μg/mL(BCG-PSN20组)、50μg/mL(BCG-PSN50组)BCG-PSN刺激小鼠DC2.4细胞,用倒置显微镜观察细胞生长状态,流式细胞仪检测主要组织相容性复合物(MHC-Ⅱ)类分子及协同刺激分子CD83、CD86的表达水平,用ELISA方法检测上清液中IL-12的含量。结果:BCG-PSN20组、BCG-PSN50组的CD83、CD86、MHC-Ⅱ分子表达水平高于空白对照组(P<0.05),IL-12的浓度亦高于空白对照组;BCG-PSN5组与空白对照组差异无统计学意义(P>0.05)。结论:BCG-PSN可能通过促进DC2.4细胞成熟和分泌IL-12调节Th1/Th2平衡,发挥治疗AD的作用。 展开更多

关键词 dc2.4细胞 共刺激分子 卡介菌多糖核酸

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小鼠CCR7基因重组腺病毒的构建及其在DC2.4的表达

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作者 应林燕 符州 +3 位作者 罗健 陈艳 王莉佳 李欣 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期925-929,共5页

目的构建含有小鼠趋化因子受体-7（CCR7）基因的重组腺病毒（AdCCR7）,观察其体外感染DC2.4细胞效率。方法将小鼠CCR7基因克隆到穿梭质粒pAdTrack-CMV,在BJ5l83菌内和骨架质粒pAdeasy-1同源重组,筛选阳性克隆;经线性化后转染HEK293细胞... 目的构建含有小鼠趋化因子受体-7（CCR7）基因的重组腺病毒（AdCCR7）,观察其体外感染DC2.4细胞效率。方法将小鼠CCR7基因克隆到穿梭质粒pAdTrack-CMV,在BJ5l83菌内和骨架质粒pAdeasy-1同源重组,筛选阳性克隆;经线性化后转染HEK293细胞,获得含小鼠CCR7基因的重组腺病毒AdCCR7;TCID50方法检测病毒滴度,PCR法鉴定病毒DNA。带绿色荧光蛋白腺病毒（AdGFP）和AdCCR7分别感染DC2.4（GFP-DC2.4和CCR7-DC2.4）,同时设未处理DC2.4为空白对照。流式细胞术（FCM）检测各组细胞表面分子CD11c,MHCⅡ,CD86及CCR7表达,趋化实验检测CCR7的功能。结果获得滴度约为l.4×1010pfu/ml重组腺病毒AdCCR7。AdCCR7感染DC2.4后,CCR7-DC2.4组与另外两组细胞比较CD11c、MHCⅡ及CD86的表达均无明显差异,但CCR7表达升高;其对趋化因子CCL19的趋化率可达44.7%~60.0%,明显高于其它两组。结论成功构建含小鼠CCR7基因的重组腺病毒AdCCR7,该病毒可感染细胞株DC2.4,增加细胞表面CCR7表达以及细胞对CCL19的趋化性,为进一步体内实验研究携带CCR7基因的未成熟DCs功能提供了工作基础。 展开更多

关键词 CCR7 dc2.4 腺病毒

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Hlx修饰的树突状细胞系(DC2.4/mHlx)的建立

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作者 何志强 王胜军 +6 位作者 薛渊 石燕 柳迎照 仝佳 陈建国 邵启祥 许化溪 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期285-287,290,共4页

目的:建立稳定、高表达鼠转录因子Hlx的树突状细胞系DC2.4/mHlx。方法:参照GenBank中mHlx基因序列,设计mHlxCDS全长引物;以PGEM-T/mHlx质粒为模板,通过PCR获得目的基因,再克隆到PIRES2-EGFP真核表达载体,经PCR、酶切鉴定后进行序列测定... 目的:建立稳定、高表达鼠转录因子Hlx的树突状细胞系DC2.4/mHlx。方法:参照GenBank中mHlx基因序列,设计mHlxCDS全长引物;以PGEM-T/mHlx质粒为模板,通过PCR获得目的基因,再克隆到PIRES2-EGFP真核表达载体,经PCR、酶切鉴定后进行序列测定,用脂质体转染DC2.4;应用G418筛选出耐药克隆,有限稀释法进行单克隆。通过观察EGFP的表达选定单克隆细胞株,再用流式细胞术分析、Real-time PCR和Western blot进行鉴定。结果:构建了PIRES2-mHlx-EGFP真核表达载体,并成功建立mHlx修饰和EGFP修饰的细胞系(DC2.4/mHlx和DC2.4/EGFP)。结论:成功建立稳定高表达mHlx的树突状细胞系DC2.4/mHlx,为深入探讨mHlx功能构建了平台,为Hlx修饰后的树突状细胞作为工具细胞的应用奠定了基础。 展开更多

关键词 mHlx dc2.4 EGFP

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枸杞多糖对DC2.4细胞增殖、抗原吞噬及成熟的影响 被引量：7

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作者 张炜 万巧凤 +2 位作者 马锐 黄菱 王丽 《宁夏医科大学学报》 2020年第10期979-982,共4页

目的研究枸杞多糖(lycium barbarum polysaccharides,LBP)对未成熟树突状细胞DC2.4增殖、吞噬抗原及成熟的影响,为进一步阐释LBP抗炎、免疫调节作用的细胞分子机制提供基础。方法(1)采用CCK-8法测定高、中、低浓度LBP(分别对应LBP终浓度... 目的研究枸杞多糖(lycium barbarum polysaccharides,LBP)对未成熟树突状细胞DC2.4增殖、吞噬抗原及成熟的影响,为进一步阐释LBP抗炎、免疫调节作用的细胞分子机制提供基础。方法(1)采用CCK-8法测定高、中、低浓度LBP(分别对应LBP终浓度为200μg·mL^-1、100μg·mL^-1和20μg·mL^-1)对DC2.4细胞增殖的影响;(2)采用流式细胞仪检测高、中、低浓度LBP对DC2.4细胞吞噬卵清蛋白(ovalbumin,OVA)的影响;(3)采用流式细胞仪检测LBP、脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)及LBP+LPS对DC2.4细胞成熟标志分子CD86表达的影响。结果(1)高、中浓度LBP在12 h、24 h及48 h对DC2.4细胞的增殖均无明显促进作用,低浓度LBP在24 h及48 h均能促进DC2.4细胞增殖(P均<0.05)。(2)高、中、低浓度LBP均可促进DC2.4细胞吞噬抗原,以100μg·mL^-1 LBP效果最佳。(3)LPS组和LBP组CD86的表达增加(P<0.01),而LPS+LBP组CD86表达低于LPS组(P<0.05)。结论LBP具有维持DC2.4细胞数量稳态的特性,可促进DC2.4细胞吞噬抗原,并具有适度抑制刺激树突状细胞成熟的作用。 展开更多

关键词 枸杞多糖 dc2.4 脂多糖 CD86 流式细胞术

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弓形虫感染导致DC2.4细胞外泌体特征差异的研究 被引量：1

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作者 李东亮 杨淑君 彭鸿娟 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期727-732,共6页

目的分析小鼠树突状细胞(DC2.4)感染弓形虫后所分泌的外泌体及其富集的小RNA与piRNA的变化,为外泌体在弓形虫-宿主互作中的作用提供必要的信息。方法DC2.4细胞分为2组(未感染组与感染组),用含无外泌体血清的培养基培养。待细胞长满,感... 目的分析小鼠树突状细胞(DC2.4)感染弓形虫后所分泌的外泌体及其富集的小RNA与piRNA的变化,为外泌体在弓形虫-宿主互作中的作用提供必要的信息。方法DC2.4细胞分为2组(未感染组与感染组),用含无外泌体血清的培养基培养。待细胞长满,感染组用弓形虫RH株速殖子感染28 h,未感染组则培养28 h。收集两组细胞的培养上请,采用超速离心法分别提取外泌体,通过透射电镜检测外泌体形态,并用纳米颗粒追踪仪检测外泌体的粒径大小以及颗粒密度。对外泌体进行小RNA高通量测序分析,用生物信息学方法分析感染组与对照组差异显著的piRNA,对并其靶基因及功能进行预测。结果对弓形虫感染与未感染的DC2.4细胞分泌的外泌体进行形态学鉴定以及粒径大小和密度的比较,发现弓形虫感染会导致DC2.4分泌的外泌体密度增加;而通过外泌体小RNA测序,发现弓形虫感染会导致外泌体中miRNA及piRNA数目增加,其中感染后显著升高的piRNA包括piR-mmu-159、piR-mmu-1526、piR-mmu-9082、piR-mmu-17405、和piR-mmu-25576。对上述piRNA靶基因的预测和KEGG分析,显示这些靶基因显著富集到MAPK、Ras、cAMP、actin细胞骨架调节、粘着斑形成、轴突导向等信号通路上。结论弓形虫感染导致DC2.4细胞分泌的外泌体粒径尺寸峰值增大和密度增加,miRNA及piRNA数目增加,提示外泌体在弓形虫-宿主细胞互作中起着重要作用。 展开更多

关键词 弓形虫 dc2.4细胞 外泌体 小RNA

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伯氏疟原虫T细胞免疫调节蛋白的表达及其对DC2.4的作用 被引量：1

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作者 周霞 崔爱 +1 位作者 王琳 罗恩杰 《中国热带医学》 CAS 2020年第3期205-211,共7页

目的应用原核载体表达PbTIP胞外重组蛋白片段(rPbTIP)并在体外刺激树突状细胞DC2.4,研究在体外PbTIP片段蛋白对DC2.4细胞是否有一定的免疫调节功能。方法用实验室保存的含有pET32a(+)-rPbTIP载体的E.coil BL-21菌株表达并纯化rPbTIP蛋白... 目的应用原核载体表达PbTIP胞外重组蛋白片段(rPbTIP)并在体外刺激树突状细胞DC2.4,研究在体外PbTIP片段蛋白对DC2.4细胞是否有一定的免疫调节功能。方法用实验室保存的含有pET32a(+)-rPbTIP载体的E.coil BL-21菌株表达并纯化rPbTIP蛋白;然后在体外培养的DC2.4细胞中加入不同浓度的rPbTIP蛋白刺激,应用细胞增殖实验检测rPbTIP对DC2.4细胞是否有促进增殖的作用;对rPbTIP刺激后的DC2.4细胞进行RT-PCR检测,分析DC2.4细胞表面分子MyD88、NF-κB、TLR9、TLR4的mRNA含量变化;rPbTIP刺激DC2.4后,应用ELISA法检测细胞培养上清中TNF-α、IL-10、TGF-β和IFN-γ细胞因子水平。结果成功表达出rPbTIP蛋白,纯化后蛋白浓度为1 mg/mL;1 ng/mL的rPbTIP对DC2.4细胞有一定促进增殖作用,并且细胞培养上清中TNF-α水平明显升高,有统计学意义(P<0.05),其他细胞因子水平变化无统计学意义(P>0.05);100 ng/L的rPbTIP对DC2.4细胞可能有一定抑制作用,并且可以上调DC2.4表面MyD88、NF-κB、TLR9 mRNA含量。结论在体外,rPbTIP蛋白对DC2.4细胞的免疫功能具有一定的调节作用,不同浓度rPbTIP蛋白的作用可能不同,需要进一步研究。 展开更多

关键词 树突状细胞dc2.4 伯氏疟原虫 T细胞免疫调节蛋白 TOLL样受体 细胞因子

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內脂素对小鼠DC2.4细胞成熟及功能的影响

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作者 侯宁宁 王昌安 孙晓东 《中国动脉硬化杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期795-798,共4页

目的评价内脂素对小鼠树突状细胞(DC)系DC2.4细胞的活化作用,探讨内脂素在动脉粥样硬化发病机制中的作用机理。方法将DC2.4细胞分4组:正常对照组、脂多糖组(LPS,1 mg/L)、低剂量内脂素组(100μg/L)、高剂量内脂素组(200μg/L)。流式细... 目的评价内脂素对小鼠树突状细胞(DC)系DC2.4细胞的活化作用,探讨内脂素在动脉粥样硬化发病机制中的作用机理。方法将DC2.4细胞分4组:正常对照组、脂多糖组(LPS,1 mg/L)、低剂量内脂素组(100μg/L)、高剂量内脂素组(200μg/L)。流式细胞仪检测各组DC2.4细胞表面MHC-II类分子、CD86和CD80的表达,酶联免疫法检测各组细胞培养上清液肿瘤坏死因子α(TNF-α)与白细胞介素12(IL-12)水平的变化,通过混合淋巴细胞反应检测内脂素对同种异体T淋巴细胞的刺激能力。结果与对照组比较,低剂量内脂素组、高剂量内脂素组、脂多糖组细胞突触增多增粗,细胞体积增大,呈现成熟DC2.4细胞形态。细胞表面MHC-Ⅱ类分子、CD80和CD86分子表达水平增高,上清液的TNF-α、IL-12水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,刺激细胞∶效应细胞的比例为1∶10和1∶25时,低剂量内脂素组、高剂量内脂素组和LPS组刺激指数明显升高(P均<0.05)。结论内脂素可能通过激活T淋巴细胞,启动免疫炎症反应,参与并促进动脉粥样硬化发生及发展。 展开更多

关键词 内脂素 树突状细胞 动脉粥样硬化

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新型水凝胶的制备及其发挥免疫化疗协同作用的研究

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作者 闫文文 张彦龙 +3 位作者 曹明慧 刘政翰 雷虹 贾向前 《药学学报》 北大核心 2025年第2期479-487,共9页

近年来癌症的治疗方法和手段越来越多样化,单一的治疗方法往往疗效有限,而免疫联合化疗的协同作用可以更有效抑制肿瘤生长。基于此,作者构建了一种负载化疗药和肿瘤疫苗的海藻酸钠(sodium alginate,SA)水凝胶复合体系(命名为SA-DOX-NA)... 近年来癌症的治疗方法和手段越来越多样化,单一的治疗方法往往疗效有限,而免疫联合化疗的协同作用可以更有效抑制肿瘤生长。基于此,作者构建了一种负载化疗药和肿瘤疫苗的海藻酸钠(sodium alginate,SA)水凝胶复合体系(命名为SA-DOX-NA),以期实现化疗药物和肿瘤疫苗的联合使用。首先,以鸡卵清蛋白(ovalbumin,OVA)为模型抗原,选择丙烯酰胺、甲基丙烯酸二甲氨乙酯单体,通过原位聚合法构建了一种酸性条件下可降解的肿瘤疫苗(命名为NA),然后以海藻酸钠为基质制备了一种共负载化疗药多柔比星(doxorubicin,DOX)和NA的水凝胶复合体系SA-DOX-NA。电镜结果显示,SA-DOX-NA具有良好的原位成胶能力,内部连通性良好,形成的三维立体网状结构能实现DOX与NA的共负载及药物缓慢释放。抗肿瘤及其免疫调节结果显示,SA-DOX-NA既能有效抑制肿瘤细胞的生长,又可以实现无外加佐剂的情况下高效促进DC2.4树突状细胞的增殖及活化。综上所述,SA-DOX-NA发挥了化疗及免疫治疗肿瘤的双重功效,在肿瘤局部治疗中具有良好的应用前景。 展开更多

关键词 水凝胶复合体系 肿瘤疫苗 dc2.4树突状细胞 肿瘤细胞 免疫联合化疗

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