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转基因大豆DBN8205转化体特异性定量PCR方法的研发和验证
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作者 吴琼 谢香庭 +2 位作者 王磊 牟勇 李进伟 《中国农业科学》 北大核心 2026年第1期29-40,共12页
【目的】转基因大豆DBN8205转化体已获批转基因生物安全证书(生产应用),转育品种即将产业化应用,建立DBN8205转化体特异性定性定量检测方法,为转基因生物安全监管和定量标识制度的实施提供依据。【方法】根据DBN8205转化体的分子特征序... 【目的】转基因大豆DBN8205转化体已获批转基因生物安全证书(生产应用),转育品种即将产业化应用,建立DBN8205转化体特异性定性定量检测方法,为转基因生物安全监管和定量标识制度的实施提供依据。【方法】根据DBN8205转化体的分子特征序列,设计转化体特异性引物和探针。通过比较多个引物探针组合的扩增曲线及Ct值,筛选出最佳引物探针组合。分别在实时荧光定量PCR和微滴数字PCR平台上考察DBN8205转化体特异性PCR方法的特异性、检测限、定量限、动力学范围和定量准确性等技术参数。制定标准方法联合验证方案,邀请多家实验室对实时荧光定量PCR方法进行联合验证,对联合验证数据进行统计分析,考察方法的重复性和重现性。【结果】筛选出最佳引物探针组合DBN8205-QF/QR/QP,扩增产物长120 bp,仅特异性识别DBN8205转化体成分,具有良好的扩增特异性。在实时荧光定量PCR平台上,检测限为10 copies,定量限为40 copies,标准曲线的各项技术参数符合标准要求,在40—8.2×10^(4)copies动力学范围内,模板拷贝数和Ct值间具有良好的线性关系,能够对含量低至0.1%的样品进行准确定量。8家实验室联合验证结果表明,DBN8205转化体特异性实时荧光定量PCR方法具有良好的重复性和重现性。在微滴数字PCR平台上,检测限和定量限与实时荧光定量PCR方法相同,分别为10和40 copies,动力学范围为40—8.0×10^(4)copies,能够对低至0.1%的样品进行准确定量,定量结果比qPCR具有更高的精密度。t检验表明,实时荧光定量PCR和二重微滴数字PCR的定量结果具有良好的一致性。【结论】建立的DBN8205转化体特异性定量PCR方法能够对DBN8205转化体进行身份鉴定,可在实时荧光定量PCR和微滴数字PCR平台上对产品中的DBN8205转化体成分进行精准定量分析。 展开更多
关键词 转基因大豆 dbn8205转化体 实时荧光定量PCR 二重微滴数字PCR 定量
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