类无精症缺失基因(Deleted in Azoospermia Like Gene,DAZL)在雄性动物睾丸发育和精子发生过程中起着重要的调控作用。为探索DAZL在小尾寒羊睾丸发育和精子发生中的作用,本研究克隆了小尾寒羊DAZL基因CDS区全长序列,通过生物信息学软件...类无精症缺失基因(Deleted in Azoospermia Like Gene,DAZL)在雄性动物睾丸发育和精子发生过程中起着重要的调控作用。为探索DAZL在小尾寒羊睾丸发育和精子发生中的作用,本研究克隆了小尾寒羊DAZL基因CDS区全长序列,通过生物信息学软件分析其分子特征并构建系统发育进化树,同时采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及蛋白免疫印迹(Western-Blot)方法,检测DAZL基因和蛋白在小尾寒羊2月龄(性成熟前)、6月龄(性成熟)和12月龄(性成熟后)睾丸中的表达水平。结果表明:小尾寒羊DAZL基因的CDS区序列长度为888bp,共编码295个氨基酸,理论等电点(PI)为8.90,是不稳定的亲水性蛋白,二级结构和三级结构均以无规则卷曲构成,无β折叠,无信号肽,无跨膜结构域。小尾寒羊DAZL基因CDS区序列与山羊的同源性最高,达99%;DAZL基因和蛋白在小尾寒羊2月龄、6月龄和12月龄睾丸中均有表达,表达量随月龄增加呈下降趋势;2月龄、6月龄和12月龄差异极显著,而6月龄与12月龄的基因表达差异不显著,蛋白表达差异显著。综上,DAZL在小尾寒羊睾丸发育不同时期表达存在差异,说明其对睾丸发育和精子发生具有调控作用,但具体调控机制还有待于进一步研究。本研究结果将为深入研究DAZL在小尾寒羊睾丸发育和精子发生过程中的调控机制提供科学依据和理论参考。展开更多
目的建立液相芯片检测DAZL基因单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)的方法,并探讨该基因SNP与男性不育的相关性。方法实验分为由无精症和严重少精症组成的病例组与健康自愿者组成的对照组,基于Luminex技术平台,应用等...目的建立液相芯片检测DAZL基因单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)的方法,并探讨该基因SNP与男性不育的相关性。方法实验分为由无精症和严重少精症组成的病例组与健康自愿者组成的对照组,基于Luminex技术平台,应用等位基因特异性延伸反应(allele specific pri mer extension,ASPE),研究DAZL基因SNP260A→G和SNP386A→G的突变情况。结果196例病例中SNP260A→G和SNP386A→G突变分别为6例(3.06%)和4例(2.04%),40例对照组中只有1例(2.5%)SNP260A→G突变,没有发现SNP386A→G突变。所有突变均为突变纯合体,且没有发现同时存在两个突变的标本。两个位点的突变频率在病例组和对照组间差异均无统计学意义(P>0.05)。结论成功建立并应用液相芯片检测单核苷酸多态性的方法;DAZL基因SNP260A→G和SNP386A→G突变与成都地区男性不育没有明显相关性。展开更多
目的:探讨DAZL基因(deleted in azoospermia like)单核苷酸多态性(SNP)与弱精子症伴畸形精子症男性不育的关系。方法:收集弱畸精子症不育患者(病例组,n=173)和精液正常男性(对照组,n=175)精液样本,进行精液常规及精子形态学分析并提取...目的:探讨DAZL基因(deleted in azoospermia like)单核苷酸多态性(SNP)与弱精子症伴畸形精子症男性不育的关系。方法:收集弱畸精子症不育患者(病例组,n=173)和精液正常男性(对照组,n=175)精液样本,进行精液常规及精子形态学分析并提取精子基因组DNA,应用Sequenom MassARRAY SNP分型技术对DAZL基因A260G和A386G多态性位点进行基因分型,比较病例组与对照组基因型的分布差异。结果:在病例组与对照组中,DAZL基因A260G、A386G这两个位点均表现为野生基因型,无突变基因型。结论:DAZL基因A260G和A386G两个多态性位点与汉族男性精子活力低下及精子形态异常所致不育可能不存在相关,不足以视为男性不育的易感基因。展开更多
为克隆鸡Daz(lDeleted in azoospermia-like,Dazl)基因CDS序列,通过构建eGFP标记的DAZL真核表达载体,实现该基因产物的亚细胞定位以探究其生物信息学功能。提取1日龄鸡睾丸总RNA,通过巢式PCR方法扩增出Dazl基因的CDS,构建真核表达载体pE...为克隆鸡Daz(lDeleted in azoospermia-like,Dazl)基因CDS序列,通过构建eGFP标记的DAZL真核表达载体,实现该基因产物的亚细胞定位以探究其生物信息学功能。提取1日龄鸡睾丸总RNA,通过巢式PCR方法扩增出Dazl基因的CDS,构建真核表达载体pEGFP-C1-DAZL。采用LipofectaminTMLTX介导重组表达载体pEGFP-C1-DAZL转染CEF细胞,48h后于荧光倒置显微镜下观察其表达定位,同时利用RT-PCR和Western-blot进一步鉴定eGFP-Dazl和蛋白水平的表达情况。结果表明:克隆出Dazl基因的完整CDS,长度870bp,共编码289个氨基酸,与公布的鸡Dazl基因(GenBank登陆号:NM_204218)CDS区同源性达99%,编码氨基酸完全一致。酶切鉴定和序列分析均表明真核表达载体pEGFP-C1-DAZL构建成功。转染48h后,RT-PCR和Western-blot分别检测到949bp特异条带和59.7ku的融合蛋白。荧光显微镜观察显示,融合蛋白(eGFP-Dazl)主要分布于细胞核。展开更多
文摘类无精症缺失基因(Deleted in Azoospermia Like Gene,DAZL)在雄性动物睾丸发育和精子发生过程中起着重要的调控作用。为探索DAZL在小尾寒羊睾丸发育和精子发生中的作用,本研究克隆了小尾寒羊DAZL基因CDS区全长序列,通过生物信息学软件分析其分子特征并构建系统发育进化树,同时采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及蛋白免疫印迹(Western-Blot)方法,检测DAZL基因和蛋白在小尾寒羊2月龄(性成熟前)、6月龄(性成熟)和12月龄(性成熟后)睾丸中的表达水平。结果表明:小尾寒羊DAZL基因的CDS区序列长度为888bp,共编码295个氨基酸,理论等电点(PI)为8.90,是不稳定的亲水性蛋白,二级结构和三级结构均以无规则卷曲构成,无β折叠,无信号肽,无跨膜结构域。小尾寒羊DAZL基因CDS区序列与山羊的同源性最高,达99%;DAZL基因和蛋白在小尾寒羊2月龄、6月龄和12月龄睾丸中均有表达,表达量随月龄增加呈下降趋势;2月龄、6月龄和12月龄差异极显著,而6月龄与12月龄的基因表达差异不显著,蛋白表达差异显著。综上,DAZL在小尾寒羊睾丸发育不同时期表达存在差异,说明其对睾丸发育和精子发生具有调控作用,但具体调控机制还有待于进一步研究。本研究结果将为深入研究DAZL在小尾寒羊睾丸发育和精子发生过程中的调控机制提供科学依据和理论参考。
文摘目的建立液相芯片检测DAZL基因单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)的方法,并探讨该基因SNP与男性不育的相关性。方法实验分为由无精症和严重少精症组成的病例组与健康自愿者组成的对照组,基于Luminex技术平台,应用等位基因特异性延伸反应(allele specific pri mer extension,ASPE),研究DAZL基因SNP260A→G和SNP386A→G的突变情况。结果196例病例中SNP260A→G和SNP386A→G突变分别为6例(3.06%)和4例(2.04%),40例对照组中只有1例(2.5%)SNP260A→G突变,没有发现SNP386A→G突变。所有突变均为突变纯合体,且没有发现同时存在两个突变的标本。两个位点的突变频率在病例组和对照组间差异均无统计学意义(P>0.05)。结论成功建立并应用液相芯片检测单核苷酸多态性的方法;DAZL基因SNP260A→G和SNP386A→G突变与成都地区男性不育没有明显相关性。
文摘为克隆鸡Daz(lDeleted in azoospermia-like,Dazl)基因CDS序列,通过构建eGFP标记的DAZL真核表达载体,实现该基因产物的亚细胞定位以探究其生物信息学功能。提取1日龄鸡睾丸总RNA,通过巢式PCR方法扩增出Dazl基因的CDS,构建真核表达载体pEGFP-C1-DAZL。采用LipofectaminTMLTX介导重组表达载体pEGFP-C1-DAZL转染CEF细胞,48h后于荧光倒置显微镜下观察其表达定位,同时利用RT-PCR和Western-blot进一步鉴定eGFP-Dazl和蛋白水平的表达情况。结果表明:克隆出Dazl基因的完整CDS,长度870bp,共编码289个氨基酸,与公布的鸡Dazl基因(GenBank登陆号:NM_204218)CDS区同源性达99%,编码氨基酸完全一致。酶切鉴定和序列分析均表明真核表达载体pEGFP-C1-DAZL构建成功。转染48h后,RT-PCR和Western-blot分别检测到949bp特异条带和59.7ku的融合蛋白。荧光显微镜观察显示,融合蛋白(eGFP-Dazl)主要分布于细胞核。
