期刊文献+
共找到85篇文章
< 1 2 5 >
每页显示 20 50 100
DAS-ELISA与RT-PCR检测马铃薯病毒结果比较与分析
1
作者 王凤姣 肖乐书 +3 位作者 杨丽君 陈光露 胡新喜 秦玉芝 《中国马铃薯》 2025年第4期305-311,共7页
马铃薯病毒病是制约马铃薯产业健康发展的重要因素之一,建立快速、准确的检测技术是病毒病防控的关键前提。比较分析双抗体夹心酶联免疫吸附测定(Double antibody sandwich-enzyme linked immunosorbent assay,DAS-ELISA)和反转录聚合... 马铃薯病毒病是制约马铃薯产业健康发展的重要因素之一,建立快速、准确的检测技术是病毒病防控的关键前提。比较分析双抗体夹心酶联免疫吸附测定(Double antibody sandwich-enzyme linked immunosorbent assay,DAS-ELISA)和反转录聚合酶链式反应(Reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)两种方法在检测不同来源马铃薯材料病毒含量差异与适用性,为实现马铃薯产业不同场景样品病毒病的高效快速检测提供依据。采用DAS-ELISA和RT-PCR分别对23份田间显症马铃薯样品和30份微茎尖离体培养材料进行不同病毒[马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)、马铃薯S病毒(Potato virus S,PVS)、马铃薯X病毒(Potato virus X,PVX)、马铃薯M病毒(Potato virus M,PVM)和马铃薯卷叶病毒(Potato leafroll virus,PLRV)]检测,对比分析结果表明,大田显症样品,DAS-ELISA与RT-PCR检测结果一致性高;隐症离体培养材料,两次DAS-ELISA检测结果重复性较差,与RT-PCR结果的一致性分别为59.33%和80.66%。本研究认为DAS-ELISA方法适用于田间病毒显症样品的高通量初步筛查与鉴定,RT-PCR适用于脱毒苗、基础种薯等病毒隐症关键材料的精准检测。 展开更多
关键词 马铃薯 病毒 das-elisa RT-PCR
在线阅读 下载PDF
侵染水鬼蕉和花朱顶红的番茄斑萎病毒属病毒的电镜和DAS-ELISA诊断 被引量:15
2
作者 方琦 董家红 +6 位作者 丁铭 尹跃艳 张丽珍 李婷婷 苏晓霞 李展 张仲凯 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期2005-2009,共5页
从昆明市郊区采集到呈同心圆褪绿环斑、褐色枯斑症状的水鬼蕉[Hymenocallis littoraris(Jacq.)Salisb.]和花朱顶红[Hippeastrum vittatum(L’Hér.)Herb.]植株,采用电子显微镜技术和DAS-ELISA进行检测,在水鬼蕉和花朱顶红病叶分离物... 从昆明市郊区采集到呈同心圆褪绿环斑、褐色枯斑症状的水鬼蕉[Hymenocallis littoraris(Jacq.)Salisb.]和花朱顶红[Hippeastrum vittatum(L’Hér.)Herb.]植株,采用电子显微镜技术和DAS-ELISA进行检测,在水鬼蕉和花朱顶红病叶分离物SGJ-KM和ZDH-KM的粗汁液和超薄切片中均观察到有类似番茄斑萎病毒属(Tospovirus)病毒粒体存在,该病毒粒子为球形,直径80~85nm;病叶汁液与Tospovirus中的西瓜银色斑驳病毒(Watermelon silver mottle virus,WSMoV)/花生芽坏死病毒(Groundnut bud necrosis virus,GBNV)的复合抗血清呈阳性反应。通过形态学及血清学方法检测表明,侵染水鬼蕉和花朱顶红的病毒分离物SGJ-KM和ZDH-KM为Tospovirus的病毒分离物。 展开更多
关键词 水鬼蕉 花朱顶红 粒子形态 番茄斑萎病毒属 das-elisa
原文传递
DAS-ELISA、RT-PCR和IC-RT-PCR检测葡萄卷叶病毒Ⅲ的比较研究 被引量:17
3
作者 陈建军 2刘崇怀 +2 位作者 古勤生 潘兴 曹孜义 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期173-177,共5页
在生长季节分3次对部分葡萄品种枝条上部、中部和下部叶片及韧皮部,进行双抗体夹心法(DAS-ELISA)、反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和免疫捕捉反转录聚合酶链式反应(IC-RT-PCR)3种方法检测卷叶病毒Ⅲ(GLRaV-3)的比较。结果表明:DAS-ELISA... 在生长季节分3次对部分葡萄品种枝条上部、中部和下部叶片及韧皮部,进行双抗体夹心法(DAS-ELISA)、反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和免疫捕捉反转录聚合酶链式反应(IC-RT-PCR)3种方法检测卷叶病毒Ⅲ(GLRaV-3)的比较。结果表明:DAS-ELISA的检出率明显低于RT-PCR和IC-RT-PCR方法。RT-PCR可以检测出RNA提取液为1:10-4的GLRaV-3病毒,但它受到了提取RNA难以及其它物质(如蛋白质、DNA等)干扰的影响,检测难度增加。从检测的灵敏度来看,RT-PCR和IC-RT-PCR比DAS-ELISA灵敏;并且,IC-RT-PCR比其它两种方法较快,整个过程仅需8h。 展开更多
关键词 das-elisa RT-PCR IC-RT-PCR 葡萄 卷叶病毒Ⅲ 比较研究 检测 检出率
在线阅读 下载PDF
应用改进的DAS-ELISA法快速检测马铃薯病毒 被引量:15
4
作者 宋吉轩 范士杰 +3 位作者 董颖苹 颜谦 张敏 张德宇 《贵州农业科学》 CAS 2006年第5期69-70,共2页
试验分别用改进DAS-ELISA法和常规DAS-ELISA法对马铃薯4种主要病毒PVX、PVY、PVS、PLRV进行检测,其检测结果完全一致,且灵敏度也基本相同。改进法比常规法操作简便、节省时间,表明改进DAS-ELISA法是一种直观、实用、快速、准确可靠的检... 试验分别用改进DAS-ELISA法和常规DAS-ELISA法对马铃薯4种主要病毒PVX、PVY、PVS、PLRV进行检测,其检测结果完全一致,且灵敏度也基本相同。改进法比常规法操作简便、节省时间,表明改进DAS-ELISA法是一种直观、实用、快速、准确可靠的检测方法,适合种薯生产中大量样品的多种主要马铃薯病毒的快速检测。 展开更多
关键词 马铃薯病毒 das-elisa 快速检测 改进
在线阅读 下载PDF
利用DAS-ELISA进行番茄花叶病毒的田间检测 被引量:13
5
作者 薛朝阳 周雪平 +3 位作者 青玲 李德葆 石银鹿 张琦 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第2期157-162,共6页
从制备的番茄花叶病毒(ToMV- S1) 抗血清中提纯IgG,并用过碘酸钠法进行辣根过氧化物酶(HRP) 标记,建立了检测ToMV 的DAS- ELISA 系统。利用此检测系统并结合生物学方法,对浙江及山西等地的田间病样进... 从制备的番茄花叶病毒(ToMV- S1) 抗血清中提纯IgG,并用过碘酸钠法进行辣根过氧化物酶(HRP) 标记,建立了检测ToMV 的DAS- ELISA 系统。利用此检测系统并结合生物学方法,对浙江及山西等地的田间病样进行测定,结果发现茄子、番茄等茄科作物中均有ToMV 的侵染,其中茄子中有50 % 左右的发生率,番茄中ToMV 发生率南北差异较大, 在浙江发生率仅为10 % 左右,而在山西有60 .7 % 的发生率,辣椒中未测到ToMV。这是在我国首次进行ToMV 展开更多
关键词 番茄花叶病毒 das-elisa 田间检测
在线阅读 下载PDF
DAS-ELISA和PAS-ELISA检测GFLV的技术研究 被引量:9
6
作者 陈建军 李培睿 +2 位作者 杨向英 曹香林 刘崇怀 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2004年第11期48-51,共4页
以中国农科院郑州果树研究所国家葡萄资源圃的葡萄品种为试材 ,对葡萄扇叶病毒(GFLV)进行了酶联免疫吸附测定 (ELISA)的检测技术研究。从操作步骤、灵敏度、检测时期以及检测部位等对双抗体夹心酶联免疫吸附测定法 (DAS -ELISA)和A蛋白... 以中国农科院郑州果树研究所国家葡萄资源圃的葡萄品种为试材 ,对葡萄扇叶病毒(GFLV)进行了酶联免疫吸附测定 (ELISA)的检测技术研究。从操作步骤、灵敏度、检测时期以及检测部位等对双抗体夹心酶联免疫吸附测定法 (DAS -ELISA)和A蛋白夹心酶联免疫吸附测定法 (PAS -ELISA) 2种不同的检测方法进行了比较试验。发现 ,虽然DAS -ELISA在操作上较PAS -ELISA更为简便 ,但就结果而言 ,PAS -ELISA比DAS -ELISA的OD值高 ,更易进行结果的判断 ;且在病毒含量相对较低的情况下 ,PAS -ELISA显示出了较高的灵敏度。 展开更多
关键词 das-elisa PAS-ELISA 检测技术 GFLV 灵敏度 葡萄 病毒种类
在线阅读 下载PDF
重组CP多克隆抗体在马铃薯卷叶病毒DAS-ELISA检测中的应用 被引量:12
7
作者 李楠楠 左玉玲 +4 位作者 隋炯明 盖树鹏 樊连梅 李广存 郭宝太 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2011年第6期85-88,共4页
先经过饱和硫酸铵沉淀分离,再用Protein G亲和层析柱纯化,从马铃薯卷叶病毒(PLRV)重组CP作抗原制备的抗血清中获得了高纯度多克隆抗体(IgG),并用戊二醛法一步法进行碱性磷酸酶的标记获得了酶标抗体(IgG-AP)。将纯化的抗体与酶标抗体用... 先经过饱和硫酸铵沉淀分离,再用Protein G亲和层析柱纯化,从马铃薯卷叶病毒(PLRV)重组CP作抗原制备的抗血清中获得了高纯度多克隆抗体(IgG),并用戊二醛法一步法进行碱性磷酸酶的标记获得了酶标抗体(IgG-AP)。将纯化的抗体与酶标抗体用于感染PLRV病叶的检测,DAS-ELISA反应呈阳性,结果表明,用重组CP制备的多克隆抗体可成功地用于PLRV的DAS-ELISA检测。本研究为PLRV重组CP多克隆抗体的大量制备及ELISA检测奠定了基础。 展开更多
关键词 马铃薯卷叶病毒 重组CP 多克隆抗体 酶标抗体 das-elisa
在线阅读 下载PDF
两种NC膜条上马铃薯A病毒DAS-ELISA检测研究 被引量:5
8
作者 田世民 施丽飞 +5 位作者 周朋 邹明强 薛强 李锦丰 齐小花 王楠 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期712-714,共3页
基于双抗体夹心ELISA反应原理,在两种不同加工成形的硝酸纤维素膜条(NC strip)上进行了马铃薯A病毒(PVA)的检测研究,并以酶标板ELISA做参比。结果表明,在NC条-2(NC strip-2)上的检测灵敏度与酶标板ELISA相当,而反应试剂的用量仅为酶标板... 基于双抗体夹心ELISA反应原理,在两种不同加工成形的硝酸纤维素膜条(NC strip)上进行了马铃薯A病毒(PVA)的检测研究,并以酶标板ELISA做参比。结果表明,在NC条-2(NC strip-2)上的检测灵敏度与酶标板ELISA相当,而反应试剂的用量仅为酶标板ELISA的百分之一;NC条-1(NC strip-1)由于加样点间易发生交叉污染而不适合进行ELISA检测。应用NC条-2可稳定进行PVA的ELISA检测,为进一步开展微流体斑点免疫检测研究奠定了基础。 展开更多
关键词 马铃薯A病毒 das-elisa NC条
在线阅读 下载PDF
马铃薯病毒检测中DAS-ELISA的改进及注意问题 被引量:8
9
作者 李广存 王秀丽 +4 位作者 杨元军 李戍彤 毕玉平 Luis F.Salazar 王毅 《中国马铃薯》 2001年第5期305-306,共2页
分别采用改进的DAS ELISA和常规DAS ELlSA法同时对主要马铃薯病毒 (PVX、PVY、PVS、PVM和PLRV)进行检测 ,其检测结果完全一致 ,且其灵敏度也基本相同。局部改进的DAS ELISA方法简便、快速 ,成本更低 。
关键词 马铃薯 病毒 das-elisa 改进 注意问题
在线阅读 下载PDF
DAS-ELISA法快速检测食品中副溶血弧菌TDH毒素 被引量:3
10
作者 窦勇 胡佩红 顾鹏程 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期2169-2175,共7页
建立副溶血弧菌TDH毒素DAS-ELISA快速检测法,并运用于食品样品实际检测。以TDH+副溶血弧菌菌体及其TDH毒素制备免疫原,分别免疫新西兰大白兔和BALB/c小鼠,制备兔抗副溶血性弧菌多克隆抗体和鼠抗TDH毒素多克隆抗体,以鼠抗TDH毒素多克隆... 建立副溶血弧菌TDH毒素DAS-ELISA快速检测法,并运用于食品样品实际检测。以TDH+副溶血弧菌菌体及其TDH毒素制备免疫原,分别免疫新西兰大白兔和BALB/c小鼠,制备兔抗副溶血性弧菌多克隆抗体和鼠抗TDH毒素多克隆抗体,以鼠抗TDH毒素多克隆抗体为捕获抗体,兔抗副溶血弧菌多克隆抗体为检测抗体,建立DAS-ELISA检测法。采用间接ELISA法测定抗体效价,采用棋盘滴定法选择最佳的抗原抗体反应条件,并确定DAS-ELISA各反应条件。结果表明:鼠抗TDH多克隆抗体、兔抗副溶血弧菌多克隆抗体与TDH毒素抗原的最佳工作浓度依次为1:8 000、1:4 000和12μg/m L,酶标二抗最佳工作浓度为1:1 000,检测总时间为5 h,该法具有很强的特异性,对食品中TDH毒素的检测低限为60μg/g。与国标检测方法相比,具有检测时间短,准确度高的优点,将会得到广泛运用。 展开更多
关键词 副溶血弧菌 TDH毒素 多克隆抗体 效价 das-elisa
原文传递
利用DAS-ELISA检测侵染观赏百合黄瓜花叶病毒的研究 被引量:5
11
作者 梁巧兰 魏列新 徐秉良 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 2006年第1期61-64,共4页
从制备的黄瓜花叶病毒———观赏百合分离物(CMV-Li)抗血清中提纯了IgG,并用过碘酸钠法进行辣根过氧化物酶(HRP)标记,建立了检测CMV-Li的DAS-ELISA(double antibody sandwich-enzyme-linked immumnosor-bent assay)系统,利用此检测系统... 从制备的黄瓜花叶病毒———观赏百合分离物(CMV-Li)抗血清中提纯了IgG,并用过碘酸钠法进行辣根过氧化物酶(HRP)标记,建立了检测CMV-Li的DAS-ELISA(double antibody sandwich-enzyme-linked immumnosor-bent assay)系统,利用此检测系统并结合生物学方法,对临洮切花百合田间病样和百合不同部位带毒量进行了检测,结果发现CMV-Li的侵染率为23.81%,叶片的带毒量明显高于花和鳞茎. 展开更多
关键词 黄瓜花叶病毒 观赏百合 das-elisa 检测
在线阅读 下载PDF
DAS-ELISA检测香石竹环斑病毒 被引量:2
12
作者 陶庭典 易建平 沈禹飞 《植物检疫》 北大核心 2001年第4期216-217,共2页
使用碱性磷酸酶标记的抗体进行DAS -ELISA试验 ,检测香石竹环斑病毒的灵敏度可达 4ng/ml的提纯病毒或 1 0 -4 倍稀释的克利夫兰烟的病汁液。在检测人工接种的Di anthusspp .的 5个品种时 ,有 2个品种在接种 7天后还没有表现症状 ,但DAS ... 使用碱性磷酸酶标记的抗体进行DAS -ELISA试验 ,检测香石竹环斑病毒的灵敏度可达 4ng/ml的提纯病毒或 1 0 -4 倍稀释的克利夫兰烟的病汁液。在检测人工接种的Di anthusspp .的 5个品种时 ,有 2个品种在接种 7天后还没有表现症状 ,但DAS -ELISA检测为阳性反应。 展开更多
关键词 香石竹环斑病毒 das-elisa 检测 种苗
在线阅读 下载PDF
DAS-ELISA对试验性水牛枯氏住肉孢子虫病循环抗原的诊断 被引量:2
13
作者 肖兵南 张长弓 +1 位作者 胡述光 龚振芳 《中国兽医科技》 CSCD 1991年第12期32-34,共3页
家畜住肉孢子虫病的生前诊断,目前所见报道多为检测血清中抗体。但由于住肉孢子虫病多呈慢性经过,血清抗体反应常呈阳性,这就使急性住肉孢子虫病易与慢性住肉孢子虫感染并发的其它急性病相混淆。此外,血清中抗体出现较晚,也给急性住肉... 家畜住肉孢子虫病的生前诊断,目前所见报道多为检测血清中抗体。但由于住肉孢子虫病多呈慢性经过,血清抗体反应常呈阳性,这就使急性住肉孢子虫病易与慢性住肉孢子虫感染并发的其它急性病相混淆。此外,血清中抗体出现较晚,也给急性住肉孢子虫病的早期诊断带来困难。O’Donoghue等(1983)用ELISA诊断试验性猪与鼠住肉孢子虫病血清中抗原,较好地解决了这一问题。本文旨在研究用酶联双抗夹心法(DAS-ELISA)检测试验性水牛枯氏住肉孢子虫病血清中抗原,以便为急性水牛住肉孢子虫病的生前诊断找到行之有效的方法。 展开更多
关键词 水牛 孢子虫 das-elisa 诊断
在线阅读 下载PDF
烟草环斑病毒抗体及DAS-ELISA试剂盒的研制 被引量:3
14
作者 李桂芬 魏梅生 +1 位作者 马洁 张永江 《检验检疫学刊》 2015年第4期1-4,共4页
将纯化的烟草环斑病毒免疫家兔获得多克隆抗体;免疫BALB/c小鼠,用杂交瘤细胞技术获得1株分泌烟草环斑病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株并制备腹水抗体。以戊二醛为交联剂,采用两步法将烟草环斑病毒单克隆抗体用碱性磷酸酯酶标记,研制了烟... 将纯化的烟草环斑病毒免疫家兔获得多克隆抗体;免疫BALB/c小鼠,用杂交瘤细胞技术获得1株分泌烟草环斑病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株并制备腹水抗体。以戊二醛为交联剂,采用两步法将烟草环斑病毒单克隆抗体用碱性磷酸酯酶标记,研制了烟草环斑病毒DAS-ELISA试剂盒。 展开更多
关键词 烟草环斑病毒 多克隆抗体 单克隆抗体 das-elisa试剂盒
在线阅读 下载PDF
香蕉分化芽BBTVDAS-ELISA检测方法的建立和应用
15
作者 周朋 余乃通 +5 位作者 章绍延 王健华 胡加谊 王祥 梁洁 刘志昕 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期117-120,共4页
为了解海南海口香蕉分化芽携带香蕉束顶病毒(Banana bunchy top virus,BBTV)的情况,本研究建立了双抗夹心酶联免疫反应(DAS-ELISA)检测法,对来自海南地区组培厂的香蕉分化芽进行检测。检测结果表明,6个品种1 852个香蕉分化芽平均带毒率... 为了解海南海口香蕉分化芽携带香蕉束顶病毒(Banana bunchy top virus,BBTV)的情况,本研究建立了双抗夹心酶联免疫反应(DAS-ELISA)检测法,对来自海南地区组培厂的香蕉分化芽进行检测。检测结果表明,6个品种1 852个香蕉分化芽平均带毒率为2.1%,其中‘皇帝蕉’为1.98%,‘粤科1号’为2.07%,‘广粉蕉’为1.98%,‘大蕉’为6.25%,‘218’为1.89%,‘巴西蕉’为2.25%。为了进一步验证ELISA结果的可靠性,随机选取12个阳性样品提取总DNA进行PCR鉴定。鉴定结果显示,12个样品中11个检测出有BBTV,表明DAS-ELISA方法的准确率较高,与分子检测结果基本一致,可以胜任日常香蕉组培苗BBTV的检测。 展开更多
关键词 香蕉束顶病毒 das-elisa 病毒检测
在线阅读 下载PDF
马铃薯A病毒重组CP多克隆抗体的制备及其在DAS-ELISA检测中的应用 被引量:5
16
作者 宋志成 费新敏 +4 位作者 杨煜 乔利仙 王晶珊 李广存 郭宝太 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2017年第1期41-46,共6页
利用重组CP作抗原制备出马铃薯A病毒的多克隆抗体,并将其用于DAS-ELISA检测。以p ET22b(+)为起始载体,构建了PVA-CP基因的原核表达载体p ET22b-ACP,重组菌BL21(p ET22b-ACP)经IPTG诱导表达出了分子量为30 k Da的特异性重组CP。利用高纯... 利用重组CP作抗原制备出马铃薯A病毒的多克隆抗体,并将其用于DAS-ELISA检测。以p ET22b(+)为起始载体,构建了PVA-CP基因的原核表达载体p ET22b-ACP,重组菌BL21(p ET22b-ACP)经IPTG诱导表达出了分子量为30 k Da的特异性重组CP。利用高纯度重组CP为抗原免疫家兔,制备出了效价为1∶512 k的抗血清。以PVA重组CP为抗原,用间接ELISA与直接ELISA分别测定重组CP纯化抗体(Ig G)及其碱性磷酸酶标记物(Ig G-AP)的活性,用DAS-ELISA测定2种抗体的活性,目测及OD值测定结果表明3种ELISA测定反应都呈阳性。以PVA病毒阳性标准物为抗原,在上述3种ELISA测定中也呈阳性反应,重组CP多克隆抗体及其酶标抗体与PVA有较强的反应信号。利用重组CP制备的多克隆抗体及其酶标抗体达到了马铃薯A病毒DAS-ELISA检测的要求。 展开更多
关键词 马铃薯A病毒 重组CP 多克隆抗体 酶标记抗体 das-elisa检测
在线阅读 下载PDF
副溶血弧菌耐热直接溶血素DAS-ELISA检测方法的建立 被引量:2
17
作者 白雪欣 胡宸艺 +6 位作者 金志颖 万伟 李月 王菁 李岩伟 高姗 王景林 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期666-672,共7页
目的建立副溶血弧菌耐热直接溶血素的双抗体夹心ELISA(double antibody sandwich ELISA,DAS-ELISA)检测方法。方法本研究通过PCR技术扩增副溶血弧菌耐热直接溶血素基因序列,并将其克隆至pET-28a载体后进行原核表达,对表达蛋白进行纯化... 目的建立副溶血弧菌耐热直接溶血素的双抗体夹心ELISA(double antibody sandwich ELISA,DAS-ELISA)检测方法。方法本研究通过PCR技术扩增副溶血弧菌耐热直接溶血素基因序列,并将其克隆至pET-28a载体后进行原核表达,对表达蛋白进行纯化和鉴定,随后用高纯度的重组蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,得到抗体后利用分子互作测定抗体的亲和力,并利用该抗体建立检测副溶血弧菌耐热直接溶血素的DAS-ELISA方法。通过棋盘法对该方法的反应条件进行优化,建立标准曲线,并对建立的DAS-ELISA方法进行性能评价及初步应用。结果本实验制备的多克隆抗体亲和力可达1×10^(-8),使用该高亲和力抗体建立的DAS-ELISA方法灵敏度为78 ng/mL,定量范围为78~312 ng/mL;与创伤弧菌溶细胞毒素(Vibrio vulnificus hemolysin,VVH)、产气荚膜梭菌α毒素(Clostridium perfringensαtoxin,CPA)以及产气荚膜梭菌ε毒素(epsilon toxin,ETX)均无交叉反应;利用扇贝、花蛤和魁蚶制备海鲜模拟样本,在上述3种模拟样本内添加重组蛋白构建标准曲线,评价本方法复杂基质中检出能力时发现灵敏度均并未发生改变;同时在上述3种模拟样本中添加菌液上清评价本方法检测天然毒素能力,检出率为100%。结论成功构建了一种用于副溶血弧菌耐热直接溶血素检测的DAS-ELISA方法,该方法特异性强、灵敏度高,适用于复杂基质检测,有望开发成副溶血弧菌耐热直接溶血素快速诊断试剂盒,具有良好的应用前景。 展开更多
关键词 耐热直接溶血素 多克隆抗体 das-elisa
在线阅读 下载PDF
应用DAS-ELISA法同时检测多种马铃薯病毒 被引量:28
18
作者 白艳菊 李学湛 +3 位作者 吕典秋 何云霞 张儒喜 朱财 《中国马铃薯》 2000年第3期143-144,共2页
报道了使用多价血清同时检测多种马铃薯病毒的快速DAS ELISA法。实验分别用快速DAS ELISA法和常规DAS ELISA法检测PVX、PVY、PVS、PVM、PLRV5种主要马铃薯病毒进行比较 ,二者阳性率和灵敏度基本相同 ,但快速法比常规法操作简便、节省时... 报道了使用多价血清同时检测多种马铃薯病毒的快速DAS ELISA法。实验分别用快速DAS ELISA法和常规DAS ELISA法检测PVX、PVY、PVS、PVM、PLRV5种主要马铃薯病毒进行比较 ,二者阳性率和灵敏度基本相同 ,但快速法比常规法操作简便、节省时间、节省材料 ,且快速法重复性好 ,结果可靠 ,表明快速DAS ELISA法是一种直观、实用、快速、准确可靠的检测方法 ,适合种薯生产中大量样品的多种主要马铃薯病毒的快速检测。 展开更多
关键词 das-elisa 马铃薯 病毒检测
在线阅读 下载PDF
DHAV-33D蛋白单克隆抗体制备及其DAS-ELISA检测方法的建立 被引量:1
19
作者 冯旭东 伍琳楠 +7 位作者 陈天泽 赵梦茹 刘言言 周学慧 杨晓伟 郁蕾 张立武 赵光伟 《中国兽医学报》 CSCD 北大核心 2024年第12期2556-2563,2578,共9页
为实现鸭甲型肝炎病毒3型(DHAV-3)的快速检测,本试验首先对DHAV-3的非结构蛋白3D进行原核表达,纯化后免疫BALB/c小鼠,四免后取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)融合制备单克隆抗体,进而利用单克隆抗体建立双抗夹心ELISA(DAS-ELISA)检测方... 为实现鸭甲型肝炎病毒3型(DHAV-3)的快速检测,本试验首先对DHAV-3的非结构蛋白3D进行原核表达,纯化后免疫BALB/c小鼠,四免后取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)融合制备单克隆抗体,进而利用单克隆抗体建立双抗夹心ELISA(DAS-ELISA)检测方法,评估其灵敏性、特异性和重复性,最后将所建方法应用于临床样本的检测,并与RT-PCR方法进行符合性验证。结果显示:DHAV-33D蛋白在BL21(DE3)中高效表达,经Western blot验证,纯化后的蛋白其特异性良好;细胞融合后经3次亚克隆,成功筛选到6株杂交瘤细胞,分别命名为1A3、1B6、1C7、1D9、2A1和3A9,抗体亚型鉴定结果显示1A3为IgG2b,1B6为IgG2a,3A9为IgG3,1C7、1D9和2A1均为IgG1;经筛选,将1B6和1A3两株亲和性高的单抗分别作为捕获抗体与检测抗体,建立DAS-ELISA检测方法,优化反应条件后确定捕获抗体1B6最佳包被质量浓度为1×10^(-3) g/L,检测抗体1A3的最佳稀释度为1∶1000,阴阳临界值(cut-off)为0.256;灵敏性试验显示该方法对3D蛋白的最低检测限度为4.0×10^(-4) g/L;重复性试验显示,该方法批内、批间变异系数(Cv)均小于9%,重复性好;特异性试验显示,该方法对鸭腺病毒(DAdV)、番鸭细小病毒(MDPV)、鸭圆环病毒(DuCV)、鸭瘟病毒(DPV)、鸭呼肠孤病毒(DRV)、鸭疫里默氏杆菌(RA)病原无特异性反应,但与鸭甲型肝炎病毒1型(DHAV-1)具有交叉反应,可以同时检测出DHAV-3与DHAV-1病原;应用该试验建立的DASELISA方法与RT-PCR检测方法同时对186份临床样本进行检测,DAS-ELISA方法可同时识别DHAV-1和DHAV-3,且与RT-PCR检测方法的符合率为98.9%。结果表明,本试验建立的DAS-ELISA方法重复性好、灵敏性高,可用于DHAV-1与DHAV-3的诊断,为我国鸭甲型肝炎的流行病学调查及防控提供了技术支撑。 展开更多
关键词 DHAV-3 单克隆抗体 das-elisa 3D蛋白 检测方法
原文传递
猪流行性腹泻病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立
20
作者 曹文艳 江佳欣 +5 位作者 袁子钦 王亚楠 王自良 王磊 李春艳 李任峰 《中国兽医杂志》 北大核心 2025年第11期64-69,共6页
猪流行性腹泻病毒(PEDV)是导致仔猪腹泻的主要病原之一,给养猪业造成了严重危害。本试验以PEDV N蛋白单克隆抗体(mAb)为捕获抗体,兔抗PEDV多克隆抗体(pAb)为检测抗体,建立双抗体夹心酶联免疫吸附测定(DAS-ELISA)检测方法并确定其最佳反... 猪流行性腹泻病毒(PEDV)是导致仔猪腹泻的主要病原之一,给养猪业造成了严重危害。本试验以PEDV N蛋白单克隆抗体(mAb)为捕获抗体,兔抗PEDV多克隆抗体(pAb)为检测抗体,建立双抗体夹心酶联免疫吸附测定(DAS-ELISA)检测方法并确定其最佳反应条件,随后对该方法的特异性、敏感性和重复性进行评价,并通过对96份临床样本的检测,评价该方法与逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法的符合率。结果显示,本试验建立的PEDV DAS-ELISA检测方法的最佳反应条件为:0.478 mg/L mAb于4℃包被12 h,3%牛血清白蛋白37℃封闭60 min,待检病毒37℃孵育20 min,3.75 mg/L兔抗PEDV pAb 37℃孵育45 min,1∶5 000倍稀释的辣根过氧化酶(HRP)标记羊抗兔免疫球蛋白G(IgG)37℃孵育30 min;该方法对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)和猪圆环病毒(PCV)均无交叉反应,具有较好的特异性;最低检测限为1.65×10^(2) TCID50/mL(4.7×10^(-4)mg/mL),具有较高的敏感性;批内和批间变异系数分别为3.3%~5.9%和3.0%~6.2%,具有良好的重复性;采用DAS-ELISA和RT-PCR分别对临床样本检测,阳性符合率为91.67%(22/24),阴性符合率为98.61%(71/72),总符合率为96.88%(93/96)。结果表明,本试验建立的DAS-ELISA方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,适用于PEDV的临床快速检测。 展开更多
关键词 猪流行性腹泻病毒(PEDV) 单克隆抗体(mAb) 多克隆抗体(pAb) 双抗体夹心酶联免疫吸附试验(das-elisa)
在线阅读 下载PDF
上一页 1 2 5 下一页 到第
使用帮助 返回顶部