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蝴蝶兰不同部位CymMV和ORSV同步检测及含量比较研究 被引量:2
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作者 孙爱青 王丽花 +3 位作者 张艺萍 杨秀梅 苏艳 吴学尉 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期504-511,共8页
为探究建兰花叶病毒(cymbidium mosaic virus,CymMV)和齿兰环斑病毒(odontoglossum ringspot virus,ORSV)在蝴蝶兰不同部位的RNA质量及带毒量,以携带2种病毒的植株为试验材料,采用基于TaqMan探针双重实时荧光定量PCR法检测蝴蝶兰的蕊柱... 为探究建兰花叶病毒(cymbidium mosaic virus,CymMV)和齿兰环斑病毒(odontoglossum ringspot virus,ORSV)在蝴蝶兰不同部位的RNA质量及带毒量,以携带2种病毒的植株为试验材料,采用基于TaqMan探针双重实时荧光定量PCR法检测蝴蝶兰的蕊柱、唇瓣、萼片、花梗(韧皮部)、叶片、气生根和地下根7个部位,并采用基因芯片法对带毒量进行复检验证。结果表明,蝴蝶兰不同部位的RNA提取效果存在差异,蕊柱的浓度最高,其次是唇瓣和气生根,地下根的浓度最低。双重实时荧光定量PCR检测结果表明,CymMV和ORSV在唇瓣和气生根中载量最高,在蕊柱和花梗中载量最低,2种病毒在不同部位的病毒载量变化趋势一致。本研究为蝴蝶兰病毒监测样本采集的部位选择提供了一定的理论指导。 展开更多
关键词 蝴蝶兰 cymmv ORSV 检测带毒率 不同部位比较
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墨兰组织培养结合化学处理脱除建兰花叶病毒(CymMv)的研究 被引量:15
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作者 姜玲 张明涛 +1 位作者 陈泽雄 马国华 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期1056-1060,共5页
对墨兰原球茎顶端分生组织培养结合化学处理脱除建兰花叶病毒(CymMv)病原的效果进行了研究.取1~2 mm大小的墨兰原球茎顶端分生组织,经0,20和40 mg·L-1的三氮唑核苷浸泡15 min处理和继代培养,诱导再生植株.RT-PCR检测表明:从带病... 对墨兰原球茎顶端分生组织培养结合化学处理脱除建兰花叶病毒(CymMv)病原的效果进行了研究.取1~2 mm大小的墨兰原球茎顶端分生组织,经0,20和40 mg·L-1的三氮唑核苷浸泡15 min处理和继代培养,诱导再生植株.RT-PCR检测表明:从带病叶样提取的RNA经反向转录和PCR扩增反应,在琼脂糖凝胶电泳中检测到长为767 bp的CymMv病原特异扩增产物,而健康墨兰叶样中未检测到该扩增产物.单纯利用原球茎顶端分生组织培养获得的试管苗,脱毒率为72.9%;原球茎顶端分生组织经过20 mg·L-1的三氮唑核苷处理,可以获得100%的无病毒苗.虽然三氮唑核苷处理造成原球茎顶端分生组织细胞一定程度的伤害,但经过5~6个月的培养,分生组织能恢复生长,不定芽能有效地增殖,并获得了再生植株.当三氮唑核苷处理浓度为40 mg·L-1时,原球茎的顶端分生组织出现透明和褐变现象,细胞活力难以恢复. 展开更多
关键词 墨兰 建兰花叶病毒 三氮唑核苷 RT—PCR
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云南大理栽培春兰中ORSV和CymMV的分子检测及序列分析 被引量:4
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作者 陈健鑫 魏玉倩 +3 位作者 唐婕 竺永金 马焕成 伍建榕 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期655-662,共8页
2018—2019年,在云南大理部分地区开展了春兰(Cymbidium goeringii)病毒病害的调查和典型植株收集,通过逆转录—聚合酶链式反应(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)检测春兰中的病毒。70株春兰中均检测到齿兰环... 2018—2019年,在云南大理部分地区开展了春兰(Cymbidium goeringii)病毒病害的调查和典型植株收集,通过逆转录—聚合酶链式反应(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)检测春兰中的病毒。70株春兰中均检测到齿兰环斑病毒(odontoglossum ringspot virus,ORSV),未检出建兰花叶病毒(cymbidium mosaic virus,Cym MV),说明该地区潜在的病毒病害主要为ORSV。基于外壳蛋白(CoatProtein)的系统发育树分析表明,所有ORSV分离物位于一个分支。ORSV外壳蛋白属于烟草花叶病毒外壳蛋白家族,理论等电点为5.01,属于亲水性稳定蛋白质。本研究证实了ORSV已经开始感染大理地区栽培的春兰,建议尽快开展兰花病毒病的早期诊断、药剂筛选及防治工作。 展开更多
关键词 春兰 建兰花叶病毒 齿兰环斑病毒 分子检测 外壳蛋白基因 生物信息
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建兰花叶病毒(CymMV)和齿兰环斑病毒(ORSV)的脱除研究 被引量:3
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作者 靖晶 李军 +3 位作者 刘凤军 徐君 姜红卫 李青 《中国农学通报》 2021年第28期115-120,共6页
本研究的主要目的是通过茎尖培养的技术手段来探索蝴蝶兰病毒的脱除问题,为建立工厂化无毒苗培养体系提供技术支撑。长期的工厂化生产,使蝴蝶兰经常感染各种病毒,导致叶片产生枯斑、褪绿、坏死等现象,使花朵畸形变色。其中建兰花叶病毒(... 本研究的主要目的是通过茎尖培养的技术手段来探索蝴蝶兰病毒的脱除问题,为建立工厂化无毒苗培养体系提供技术支撑。长期的工厂化生产,使蝴蝶兰经常感染各种病毒,导致叶片产生枯斑、褪绿、坏死等现象,使花朵畸形变色。其中建兰花叶病毒(CymMV)和齿兰环斑病毒(ORSV)是最常见的2种病毒。实验取已检测出含有CymMV和ORSV病毒的蝴蝶兰植株花梗,进行诱导丛生芽的培养,对丛生芽进行继代增殖形成组培苗用于脱毒处理。切取组培苗的茎尖顶端分生组织进行培养,茎尖长度在1~6 mm之间,随着茎尖长度的增加,成活率上升,脱毒率明显降低。取2~3 mm组培苗茎尖,经0、10、20、30、40 mg/L的三氮唑核苷浸泡15 min处理和在含有相应浓度的三氮唑核苷培养基中培养30天后,继代培养形成再生植株。实验采用ELISA法对脱毒前的蝴蝶兰植株以及脱毒后的再生植株进行2种病毒检测,通过显色反应判断是否含有病毒病原。实验结果表明,蝴蝶兰脱毒苗的成活率随着三氮唑核苷浓度的增加而降低,当其浓度达到40 mg/L时,茎尖顶端分生组织出现严重的透明和褐变现象,未获得再生植株。而试管再生苗的脱毒率则随着三氮唑核苷浓度的升高而增加。在添加30 mg/L的三氮唑核苷进行化学抑制病毒的处理后,可以比单纯使用茎尖培养的方式脱毒率提高22.3%。 展开更多
关键词 蝴蝶兰 建兰花叶病毒 齿兰环斑病毒 化学处理 茎尖培养
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文心兰2种主要病毒的快速检测及其组培脱毒方法 被引量:6
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作者 刘福秀 王安石 +1 位作者 韩玉春 林明光 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2014年第1期147-151,共5页
利用感染了建兰花叶病毒和齿兰环斑病毒的文心兰叶片,建立同步检测文心兰2种病毒的双重RT-PCR方法,该方法可一次性扩增出2种病毒的DNA条带,最低可检测到相当于1μg的带毒叶片。同时采用花梗组织培养脱毒并结合培养基添加病毒A的脱毒方法... 利用感染了建兰花叶病毒和齿兰环斑病毒的文心兰叶片,建立同步检测文心兰2种病毒的双重RT-PCR方法,该方法可一次性扩增出2种病毒的DNA条带,最低可检测到相当于1μg的带毒叶片。同时采用花梗组织培养脱毒并结合培养基添加病毒A的脱毒方法,对感染2种病毒的文心兰进行外植体脱毒试验,获得文心兰组培苗脱毒方法。用建立的双重RT-PCR检测脱毒效果,脱毒率为75.3%。 展开更多
关键词 建兰花叶病毒(cymmv) 齿兰环斑病毒(ORSV) RT-PCR 文心兰 脱毒
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实时荧光RT-PCR方法检测齿兰环斑病毒与建兰花叶病毒 被引量:9
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作者 闻伟刚 谭钟 崔俊霞 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期101-104,共4页
齿兰环斑病毒(Odontoglossum ringspot virus,ORSV)与建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,CymMV)是严重危害兰科植物的2种主要病毒。本研究根据病毒不同分离株外壳蛋白基因的保守序列,分别设计了ORSV与CymMV各自的特异性引物与荧光探... 齿兰环斑病毒(Odontoglossum ringspot virus,ORSV)与建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,CymMV)是严重危害兰科植物的2种主要病毒。本研究根据病毒不同分离株外壳蛋白基因的保守序列,分别设计了ORSV与CymMV各自的特异性引物与荧光探针,建立了基于TaqMan探针的实时荧光RT-PCR检测方法。该方法与酶联免疫检测方法相比,灵敏度提高104倍,具有快速、灵敏和高特异性的优点,适合对ORSV和CymMV的快速检测。应用该方法,从来自台湾的蝴蝶兰样品中检出齿兰环斑病毒。 展开更多
关键词 齿兰环斑病毒 建兰花叶病毒 实时荧光RT-PCR 检测
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建兰花叶病毒TGB1和TGB2基因的原核表达 被引量:2
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作者 邓衍福 陈芝娟 +3 位作者 程晓非 章鹏程 胡凤 施农农 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2012年第6期1045-1049,共5页
建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,CymMV)是严重危害兰科植物的主要病毒之一。本研究根据NCBI登录序列号(AB197937)的CymMV-TGB1,-TGB2基因分别设计特异性引物,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法从感染CymMV蝴蝶兰病叶中扩增TGB... 建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,CymMV)是严重危害兰科植物的主要病毒之一。本研究根据NCBI登录序列号(AB197937)的CymMV-TGB1,-TGB2基因分别设计特异性引物,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法从感染CymMV蝴蝶兰病叶中扩增TGB1,TGB2基因,并将目的基因插入pGEX-4T3中,构建相应的原核表达载体。将表达载体转入大肠杆菌BL21,经IPTG诱导后成功表达出目的蛋白;SDS-PAGE及Western blot检测证实目的蛋白分别是融合GST的CymMV TGB1和TGB2蛋白。两个蛋白的表达为下一步抗体制备以深入开展CymMV TGB1和TGB2功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 蝴蝶兰 建兰花叶病毒 原核表达 WESTERN BLOT
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3种热带兰感染2种病毒的症状探讨 被引量:9
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作者 曾燕君 王健华 +3 位作者 余志金 梁定裁 刘志昕 莫饶 《热带农业科学》 2011年第3期20-23,共4页
建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,CymMV)和齿兰环斑病毒(Odontoglossum ringspot virus,ORSV)是危害海南兰花最普遍的2种病毒。CymMV侵染蝴蝶兰后引发黄化斑、坏疽凹陷斑、畸形生长等多种症状;侵染石斛兰引发花叶、黄化斑、全叶黄... 建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,CymMV)和齿兰环斑病毒(Odontoglossum ringspot virus,ORSV)是危害海南兰花最普遍的2种病毒。CymMV侵染蝴蝶兰后引发黄化斑、坏疽凹陷斑、畸形生长等多种症状;侵染石斛兰引发花叶、黄化斑、全叶黄化或红化、契形坏死、疱状突出等症状;侵染文心兰引发花叶、黄化、坏死、畸形生长等症状。ORSV的症状种类则相对简单,蝴蝶兰上引发环斑、系统性黄化、凹陷坏死、疱状突出等症状;文心兰上主要表现花叶;石斛兰上未检测到ORSV。 展开更多
关键词 蝴蝶兰 石斛兰 文心兰 建兰花叶病毒 齿兰环斑病毒 症状
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建兰花叶病毒广东分离物的全基因组序列分析 被引量:3
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作者 魏永路 任锐 +4 位作者 高洁 刘伟平 谢琦 朱根发 杨凤玺 《广东农业科学》 CAS 2022年第2期109-117,共9页
【目的】建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,CymMV)是最主要的兰花病毒病原之一,其广泛传播对兰花产业发展造成严重威胁。探究CymMV遗传信息和进化,为广东省兰花病毒病的监测预警和兰花抗病毒病基因工程提供重要科学依据。【方法】... 【目的】建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,CymMV)是最主要的兰花病毒病原之一,其广泛传播对兰花产业发展造成严重威胁。探究CymMV遗传信息和进化,为广东省兰花病毒病的监测预警和兰花抗病毒病基因工程提供重要科学依据。【方法】对采自广州地区的墨兰疑似病毒病叶片进行CymMV的RT-PCR及DA-SELISA检测鉴定,利用相关分子生物学软件对CymMV分离物进行基因组序列组装、注释、系统进化及选择压力分析。【结果】首次在广东省发现2个CymMV分离物GZV013和ZC-29,基因组全长均为6227 nt,编码5个功能蛋白;GZV013与台湾分离物M2的核苷酸序列一致性为97.03%;ZC29与南京分离物NJ-1的核苷酸序列一致性为97.11%;CymMV各分离物的全基因组序列一致性为86.85%~98.31%,且多样性种群的分化与寄主种类和地理隔离关系密切;CymMV基因组每个区域均受到负选择的影响,并符合中性进化模型;编码RdRp、TGB1和TGB2的基因在基因组中变异率最高。【结论】GZV013与台湾分离物M2的亲缘关系最近,ZC29与南京分离物NJ-1的亲缘关系最近,同属于一个分支。 展开更多
关键词 兰科植物 病毒检测 建兰花叶病毒(cymmv) 序列分析 选择压力
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兰花病毒检测与脱毒技术研究进展 被引量:3
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作者 黎文敏 薛铭 +3 位作者 谢利 郭和蓉 张志胜 曾瑞珍 《安徽农业科学》 CAS 2022年第3期8-11,18,共5页
兰花病毒病是制约兰花产业发展的重要因素,其中由建兰花叶病毒(cymbidium mosaic virus,CymMV)和齿兰环斑病毒(odontolossum ring spot virus,ORSV)引起的病毒病在全球范围内影响广泛且危害严重。目前兰花病毒病尚无特效药可以防治,加... 兰花病毒病是制约兰花产业发展的重要因素,其中由建兰花叶病毒(cymbidium mosaic virus,CymMV)和齿兰环斑病毒(odontolossum ring spot virus,ORSV)引起的病毒病在全球范围内影响广泛且危害严重。目前兰花病毒病尚无特效药可以防治,加强检疫、及时销毁染病植株以及采用无病毒种苗是病毒病防治的有效措施。因此,对引起兰花病毒病的主要病毒、病毒检测方法和脱毒技术研究进展进行综述,以期为兰花脱毒技术的深入研究和脱毒苗工厂化生产提供参考。 展开更多
关键词 兰花 cymmv ORSV 检测方法 脱毒技术
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Complete Genome Sequence Analysis of Guangdong Isolates of Cymbidium Mosaic Virus
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作者 Yonglu WEI Rui REN +4 位作者 Jie GAO Weiping LIU Qi XIE Genfa ZHU Fengxi YANG 《Plant Diseases and Pests》 CAS 2022年第3期15-20,共6页
[Objectives]The paper was to explore the genetic information and evolution of CymMV,and to provide an important scientific basis for monitoring and early warning of orchid virus disease and anti-virus genetic engineer... [Objectives]The paper was to explore the genetic information and evolution of CymMV,and to provide an important scientific basis for monitoring and early warning of orchid virus disease and anti-virus genetic engineering of orchid in Guangdong Province.[Methods]RT-PCR and DASELISA were used to detect and identify CymMV from leaves with suspected virus disease of Cymbidium sinense collected from Guangzhou area.The genome sequence assembly,annotation,phylogeny and selection pressure analysis of CymMV isolates were performed with related molecular biology software.[Results]Two CymMV isolates(GZV013 and ZC29)were found in Guangdong Province for the first time in this study.The genome of both GZV013 and ZC29 were 6227 nt in length,encoding 5 functional proteins.The similarity analysis of the full sequence showed that the nucleotide sequence identity of GZV013 and Taiwan isolate M2 was 97.03% and that of ZC29 and Nanjing isolate NJ-1 was 97.11%.The complete genome sequence identity among CymMV isolates ranged from 86.85% to 98.31%,and the differentiation of diverse populations was closely related to host species and geographical isolation.Each region of CymMV genome was affected by negative selection and conformed to the neutral evolution model.The genes encoding RdRp,TGB1 and TGB2 had the highest mutation rates in the genome.[Conclusions]GZV013 was most closely related to Taiwan isolate M2,and ZC29 was most closely related to Nanjing isolate NJ-1,belonging to the same branch of a family. 展开更多
关键词 ORCHID Virus detection Cymbidium mosaic virus(cymmv) Sequence analysis Selection pressure
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TaqMan探针双重实时荧光定量PCR法同步检测兰花中的建兰花叶病毒和齿兰环斑病毒 被引量:6
12
作者 孙爱青 王丽花 +3 位作者 张艺萍 杨秀梅 许凤 苏艳 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期219-227,239,共10页
为建立一种同步定量检测建兰花叶病毒(cymbidium mosaic virus,CymMV)和齿兰环斑病毒(odontoglossum ringspot virus,ORSV)的高效检测方法,本研究根据CymMV和ORSV CP基因高度保守区分别设计引物和探针并筛选,获得156 bp和148 bp的靶标... 为建立一种同步定量检测建兰花叶病毒(cymbidium mosaic virus,CymMV)和齿兰环斑病毒(odontoglossum ringspot virus,ORSV)的高效检测方法,本研究根据CymMV和ORSV CP基因高度保守区分别设计引物和探针并筛选,获得156 bp和148 bp的靶标序列及对应的最优特异性引物探针组合,建立了基于TaqMan探针的双重实时荧光定量PCR方法。该方法最低检出限为1拷贝或6.2×10^(-3)fg,最低稳定检出限为10拷贝或6.2×10^(-2)fg,是RT-PCR的10~100倍;构建的标准曲线线性关系良好,扩增效率分别为97.7%和100.2%,相关系数R2分别为1.000和0.999;对其他5种常见病毒均无扩增曲线,检测特异性强;批组内与批组间重复性试验Ct值变异系数≤0.60%,重复性和稳定性好。利用该方法和基因芯片法分别对4个种属的66个兰花样品进行方法验证,该方法相较于基因芯片法检出率提高了53.85%(CymMV)和162.5%(ORSV)。综上所述,本方法可同时高通量检测CymMV和ORSV 2种病毒靶基因,结果可靠,应用前景广阔,可为开展病毒精准鉴定、科学防控以及从源头遏制病毒传播提供技术支撑。 展开更多
关键词 建兰花叶病毒 齿兰环斑病毒 TAQMAN探针 RT-QPCR 兰花
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建兰花叶病毒及齿兰环斑病毒的检测方法(综述) 被引量:6
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作者 刘沛然 王四清 《热带作物学报》 CSCD 2009年第1期99-103,共5页
介绍目前已广泛应用于建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,CymMV)和齿兰环斑病毒(Odontoglossumringspot virus,ORSV)检测的电镜技术、血清学方法和分子生物学方法,以及以这3种方法为基础建立起的酶联免疫吸附反应法(enzyme linked im... 介绍目前已广泛应用于建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,CymMV)和齿兰环斑病毒(Odontoglossumringspot virus,ORSV)检测的电镜技术、血清学方法和分子生物学方法,以及以这3种方法为基础建立起的酶联免疫吸附反应法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)、免疫胶体金技术、免疫毛细区带电泳法(Immuno-capillaryzone electrophoresis,I-CZE)、反转录聚合酶链式反应法(Reverse transcription-polymerase chain reaction RT-PCR)、免疫捕捉PCR技术(IC-RT-PCR)、TaqMan实时RT-PCR技术。同时介绍石英晶体微天平生物传感器(Quartz Crystal Microbalance biosensor,QCM biosensor)应用检测技术、液相色谱-质谱分析和激光解吸-离子质谱分析法(LC-and MALDI-mass spectrometry)2种新检测技术。并简述了各种检测方法的优缺点及应用范围。 展开更多
关键词 建兰花叶病毒 齿兰环斑病毒 检测 植物病毒
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建兰花叶病毒TGBp1自身互作研究
14
作者 宋若楠 饶雪琴 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第3期478-482,共5页
建兰花叶病毒(cymbidium mosaic virus,CymMV)是危害兰花生产的重要病毒之一。CymMV属于马铃薯X病毒属(Potexvirus),基因组为正单链RNA,包含5个开放阅读框(open reading frames,ORFs);ORF 1编码依赖RNA的RNA聚合酶(RNA-dependent RNA po... 建兰花叶病毒(cymbidium mosaic virus,CymMV)是危害兰花生产的重要病毒之一。CymMV属于马铃薯X病毒属(Potexvirus),基因组为正单链RNA,包含5个开放阅读框(open reading frames,ORFs);ORF 1编码依赖RNA的RNA聚合酶(RNA-dependent RNA polymerase,RdRp)。 展开更多
关键词 建兰花叶病毒 马铃薯X病毒 依赖RNA的RNA聚合酶
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