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苏云金芽孢杆菌B-Pr-88菌株中cry2Ab4基因的表达和杀虫活性研究 被引量：18
1
作者 李长友 张杰 +3 位作者 宋福平 韩岚岚 李国勋 黄大昉 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期634-638,共5页
以我室自行分离的对鳞翅目夜蛾科害虫具有高毒力的Bt菌株B-Pr-88为材料,用PCR-RFLP方法从其质粒DNA文库中筛选到含cry2Ab基因的一个阳性克隆pZF858,序列测定发现,该片段含有cry2Ab全长基因,开放读码框为1902bps,编码由633个氨基酸组成的... 以我室自行分离的对鳞翅目夜蛾科害虫具有高毒力的Bt菌株B-Pr-88为材料,用PCR-RFLP方法从其质粒DNA文库中筛选到含cry2Ab基因的一个阳性克隆pZF858,序列测定发现,该片段含有cry2Ab全长基因,开放读码框为1902bps,编码由633个氨基酸组成的70.7kD蛋白,氨基酸同源性与已公布的cry2Ab基因同源性均为99.8%,经Bt基因国际命名委员会正式命名为cry2Ab4。根据cry2Ab4基因开放阅读框架(ORF)两端序列,设计合成一对特异引物L2ab5和L2ab3,PCR扩增获得cry2Ab4完整ORF,与大肠杆菌表达载体pET-21b连接,构建了重组表达质粒pET-2Ab4,质粒导入大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导后,SDS-PAGE电泳证实该基因表达了60kD的蛋白,生物测定表明,Cry2Ab4对棉铃虫和大豆食心虫具有高毒力,同时对小菜蛾和二化螟有一定的杀虫活性,而对亚洲玉米螟和甜菜夜蛾没有杀虫活性。 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 cry2Ab4基因 基因克隆 蛋白表达 杀虫活性
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苏云金芽孢杆菌沉默基因cry2Ab3在大肠杆菌中表达及杀虫活性研究 被引量：10
2
作者 陈中义 李长友 +2 位作者 刘加宝 张杰 黄大昉 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期561-566,共6页
对苏云金芽孢杆菌C0 0 2菌株cry2Ab基因阳性克隆pHT3 1 5 2Ab进行亚克隆和序列测定 ,在CenBank注册后经国际Bt杀虫蛋白基因委员会正式命名为cry2Ab3。序列分析表明该基因含有芽孢杆菌特异的RBS序列 ,但没有功能性启动子 ,为沉默基因。... 对苏云金芽孢杆菌C0 0 2菌株cry2Ab基因阳性克隆pHT3 1 5 2Ab进行亚克隆和序列测定 ,在CenBank注册后经国际Bt杀虫蛋白基因委员会正式命名为cry2Ab3。序列分析表明该基因含有芽孢杆菌特异的RBS序列 ,但没有功能性启动子 ,为沉默基因。根据大肠杆菌T7表达载体pET 2 1b克隆位点和cry2Ab3开放阅读框架 (ORF)两端序列 ,设计合成一对特异引物L2ab5和L2ab3 ,高保真PCR扩增获得cry2Ab3完整ORF ,经酶切、连接构建了重组表达质粒pET 2Ab3。表达质粒导入大肠杆菌BL2 1 (DE3 ) ,IPTG诱导后 ,SDS PAGE电泳证实了cry2Ab3的表达。生物测定显示诱导培养物对棉铃虫初孵幼虫和小菜蛾二龄幼虫具有杀虫活性 ,能明显抑制二化螟二龄幼虫生长 ,但对甜菜夜蛾和玉米螟没有明显活性。进一步提取Cry2Ab3蛋白 ,生测结果表明其对棉铃虫LC50 为 3 2 5 5 μg g。 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 沉默基因 cry2Ab3 大肠杆菌 表达 杀虫活性
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苏云金芽胞杆菌cry2Ad基因的克隆及其表达产物的活性分析 被引量：11
3
作者 张静涛 束长龙 +3 位作者 宋福平 刘楠 张杰 黄大昉 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期146-150,155,共6页
苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)SBT2是我国新分离出的一株野生菌株。扫描电镜显示该菌株产生双锥体形晶体。琼脂糖凝胶电泳发现其质粒图谱含有5个条带。聚丙烯酰胺凝胶电泳显示此菌株产生130kD晶体蛋白。利用PCR-RFLP法进... 苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)SBT2是我国新分离出的一株野生菌株。扫描电镜显示该菌株产生双锥体形晶体。琼脂糖凝胶电泳发现其质粒图谱含有5个条带。聚丙烯酰胺凝胶电泳显示此菌株产生130kD晶体蛋白。利用PCR-RFLP法进行杀虫基因类型鉴定,发现其含有cry1Aa、cry1Da、cry1Hb、cry1Jb、cry1Ka、cry1Ib、基因。Cry2Ad蛋白的活性至今未见研究报道,本研究克隆和测序了该基因。并对其进行了表达。生物活性测定结果表明其表达产物对舞毒蛾(Lymant-ria dispar)、棉铃虫(Helicoverpa armigera)、亚洲玉米螟(Ostrinia furnacalis)、小菜蛾(Plutella xylostella)有低活性;对大猿叶甲(Colaphellus bowringi)无活性。 展开更多
关键词 苏云金芽胞杆菌 cry2Ad基因 克隆 表达 生物活性
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水稻密码子优化的cry2A*基因在大肠杆菌中的表达及其表达产物的纯化 被引量：7
4
作者 秦伟 黄昆仑 +4 位作者 贺晓云 李欣 许文涛 林希瑾 罗云波 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2008年第7期267-271,共5页
通过PCR从克隆载体pUC18-3Z/Cry2A*上扩增水稻偏爱型密码子优化的抗虫基因cry2A*,经限制性内切酶NdeI和BamHI双酶切定向插入到原核表达载体pET-28a(+),成功构建了在表达蛋白的N端只带有6个组氨酸标签的融合蛋白表达载体pET-28a(+)/Cry2... 通过PCR从克隆载体pUC18-3Z/Cry2A*上扩增水稻偏爱型密码子优化的抗虫基因cry2A*,经限制性内切酶NdeI和BamHI双酶切定向插入到原核表达载体pET-28a(+),成功构建了在表达蛋白的N端只带有6个组氨酸标签的融合蛋白表达载体pET-28a(+)/Cry2A*,并转入大肠杆菌BL21(DE3)中。通过对其表达条件进行优化,发现在IPTG浓度为0.05mmol/L、诱导时间为3h、诱导温度为20℃的表达条件下目的蛋白大部分以可溶形式进行表达。采用Ni-NTA亲和柱纯化得到高纯度目的蛋白,薄层扫描分析蛋白纯度达到95%。 展开更多
关键词 抗虫基因 cry2A^＊ 转基因水稻 表达 纯化
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转Cry2A基因抗虫甘蔗植株的培育 被引量：8
5
作者 王文治 胡天娇 +8 位作者 杨本鹏 王俊刚 冯小艳 熊国如 冯翠莲 赵婷婷 沈林波 林拥军 张树珍 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期2893-2898,共6页
Bt基因具有广谱杀虫性,培育转基因抗虫品种为甘蔗病虫害防治提供了新思路。为了检验Cry2A基因对甘蔗螟虫的防治效果,本研究构建了由玉米Ubi启动子驱动的Cry2A基因高效植物表达载体Cry2A-3300,利用农杆菌介导技术,对甘蔗胚性愈伤组织材... Bt基因具有广谱杀虫性,培育转基因抗虫品种为甘蔗病虫害防治提供了新思路。为了检验Cry2A基因对甘蔗螟虫的防治效果,本研究构建了由玉米Ubi启动子驱动的Cry2A基因高效植物表达载体Cry2A-3300,利用农杆菌介导技术,对甘蔗胚性愈伤组织材料进行遗传转化,经过筛选培养及再生培养共得到46株抗性植株。对抗性植株进行PCR扩增检测,15株呈阳性;进一步利用RT-PCR,表明外源基因Cry2A在转录水平上得到有效表达。室内抗虫鉴定的结果表明Cry2A基因可有效抑制害虫的生长,这将有利于后期进行田间防治。 展开更多
关键词 甘蔗(Saccharum officinarum) cry2A基因 遗传转化 甘蔗螟虫
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昼夜节律蛋白Cry2作为结直肠癌预后和化疗敏感性预测因子的研究 被引量：5
6
作者 周俊怿 方乐堃 +4 位作者 邓艳红 刘焕亮 王磊 汪建平 黄美近 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期1373-1377,共5页
目的:检测Cry2在结直肠癌组织中的表达,探讨Cry2在结直肠癌预后和辅助化疗敏感性预测中的作用。方法:收集16名规律接受包含5-氟尿嘧啶的新辅助化疗的结直肠癌切除术患者,使用实体肿瘤疗效评估标准评估化疗疗效,并根据疗效分为完全反应(C... 目的:检测Cry2在结直肠癌组织中的表达,探讨Cry2在结直肠癌预后和辅助化疗敏感性预测中的作用。方法:收集16名规律接受包含5-氟尿嘧啶的新辅助化疗的结直肠癌切除术患者,使用实体肿瘤疗效评估标准评估化疗疗效,并根据疗效分为完全反应(CR)/部分反应(PR)和病灶稳定(SD)/病灶进展(PD)组,免疫组化检测Cry2表达,评分后进行双侧2检验。收集307名在2001年至2005年间接受结直肠癌切除术患者的肿瘤组织,制作组织芯片,免疫组化检测Cry2表达,用log-rank法进行单因素分析,用Cox回归模型进行多因素分析,用Kaplan-Meier法绘制生存曲线。结果:CR/PR组Cry2表达较低,SD/PD组Cry2表达较高,差异显著(P<0.05)。307例中Cry2高表达者84人,平均生存83.46月,Cry2低表达者223人,平均生存100.10月,两组间差异显著(P<0.05)。Cry2低表达者预后较好。307例结直肠癌切除术患者Cry2表达高低风险比为1.70,其95%置信区间为1.09～2.66,差异显著(P<0.05),Cry2的表达是影响预后的独立因素。16例接受化疗的结直肠癌切除术患者Cry2表达高低风险比为2.88,其95%置信区间为1.03～8.06,差异显著(P<0.05),Cry2的表达是影响化疗预后的独立因素。结论:根据Cry2表达高低可预测结直肠癌新辅助化疗的疗效,也可预测结直肠癌患者的预后。 展开更多
关键词 昼夜节律 cry2蛋白 结直肠肿瘤 预后 新辅助化疗
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Cry2Ab及Cry1Ac杀虫蛋白对棉铃虫中肠蛋白酶活性的影响 被引量：8
7
作者 魏纪珍 梁革梅 +3 位作者 高希武 高珍 张万娜 郭予元 《应用昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期839-846,共8页
为明确Cry2Ab和Cry1Ac 2种Bt杀虫蛋白单用与混用对棉铃虫Helicoverpa armigera(Hübner)中肠主要蛋白酶活性的影响,本文测定了取食含不同Bt蛋白人工饲料后棉铃虫中肠总蛋白酶、类胰蛋白酶和类胰凝乳蛋白酶活性的差异。结果发现:Cry... 为明确Cry2Ab和Cry1Ac 2种Bt杀虫蛋白单用与混用对棉铃虫Helicoverpa armigera(Hübner)中肠主要蛋白酶活性的影响,本文测定了取食含不同Bt蛋白人工饲料后棉铃虫中肠总蛋白酶、类胰蛋白酶和类胰凝乳蛋白酶活性的差异。结果发现:Cry2Ab处理12 h后对棉铃虫中肠总蛋白酶影响不大;对类胰蛋白酶的影响最大,除最高浓度处理外,其他浓度处理后棉铃虫类胰蛋白酶的活性明显高于对照;但对类胰凝乳蛋白酶活性的影响呈倒"V"字型,只有6.67μg/g Cry2Ab处理后的棉铃虫酶活力显著高于对照,其他浓度处理与对照差异不显著或略低于对照;随着取食含Cry2Ab饲料时间的增加,棉铃虫中肠类胰蛋白酶和类胰凝乳蛋白酶的活性比对照显著增加;与对照相比,处理36 h后类胰蛋白酶活性最高可增加到6.43倍。Cry1Ac处理棉铃虫12 h后总蛋白酶、类胰蛋白酶和类胰凝乳蛋白酶活性都明显增加,而且与处理浓度呈正相关;但是24 h后,处理后棉铃虫的总蛋白酶和类胰凝乳蛋白酶活性明显降低,只有类胰蛋白酶活性仍高于对照,但活性增长倍数低于12 h时的处理。Cry2Ab和Cry1Ac 2种蛋白混用处理棉铃虫后,2种酶的酶活力基本低于Cry1Ac和Cry2Ab单用的酶活力之和;只有2种蛋白浓度均为2.22μg/g混用时,处理12 h后类胰蛋白酶和类胰凝乳蛋白酶的活性高于2种蛋白单用时酶活力之和,且都显著的高于对照。 展开更多
关键词 棉铃虫 CRY1AC cry2AB 总酶 类胰凝乳蛋白酶 类胰蛋白酶
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转cry1C~*及cry2A~*基因早粳稻Bt蛋白的时空表达和抗螟虫性 被引量：9
8
作者 李荣田 王新宇 +2 位作者 田崇兵 周青 刘长华 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第12期1829-1836,共8页
早粳稻空育131为受体,以根瘤农杆菌介导遗传转化法创制了转ubi启动子调控下的cry1C*及cry2A*基因早粳稻空育131 (cry1C*)和空育131(cry2A*)。为了研究转基因水稻Bt蛋白的时空表达特性及抗螟虫性,将不同转化事件形成的转基因早粳稻品系... 早粳稻空育131为受体,以根瘤农杆菌介导遗传转化法创制了转ubi启动子调控下的cry1C*及cry2A*基因早粳稻空育131 (cry1C*)和空育131(cry2A*)。为了研究转基因水稻Bt蛋白的时空表达特性及抗螟虫性,将不同转化事件形成的转基因早粳稻品系种植于田间,利用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测转基因水稻不同生长发育阶段不同器官的、以及成熟期糙米的Bt蛋白量,采用室内离体茎秆法接虫鉴定转基因水稻的抗螟虫性。结果显示,转基因早粳稻不同抗虫基因Bt蛋白量不同, cry1C*基因总是低于cry2A*基因的蛋白质表达量;不同生长发育时期Bt蛋白量不同,叶片和茎鞘等器官的Bt蛋白量为分蘖期<抽穗期<灌浆期,幼穗或糙米等器官的Bt蛋白量为抽穗期幼穗>灌浆期幼穗>成熟期糙米;不同器官Bt蛋白量不同,高低次序在分蘖期为叶片、茎鞘,抽穗期为叶片、幼穗和茎鞘,灌浆及成熟期为叶片、茎鞘、幼穗和糙米;同一抗虫基因不同转基因品系间抽穗期叶片、茎鞘和幼穗等器官Bt蛋白量及抗螟虫性、糙米Bt蛋白量等性状存在差异,抽穗期各器官Bt蛋白量与抗螟虫性及成熟期糙米Bt蛋白量之间相关不显著,不论Bt蛋白量高或低的品系均表现为高抗螟虫。转基因早粳稻营养器官生长发育前期Bt蛋白量较低、后期较高,繁殖器官生长发育早期Bt蛋白量较高、晚期较低,营养器官通常比繁殖器官的Bt蛋白量高。在本研究范围内,不同基因及不同转化事件培育的转基因水稻Bt蛋白表达量高低不同,但所有的转基因早粳稻品系均表现高抗螟虫。 展开更多
关键词 cry1C^*基因 cry2A^*基因 转基因早粳稻 BT蛋白 时空表达 抗螟虫性
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cry2Aa9m抗虫基因植物表达载体构建及对大豆的遗传转化 被引量：6
9
作者 朱延明 郜庭 +4 位作者 张凤 柏锡 才华 纪巍 罗晓 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期1-6,共6页
cry2Aa9m基因编码的杀虫晶体蛋白(ICPs)对鳞翅目(Lepidoptera)和双翅目(Dipter)昆虫具有显著的毒杀作用,可防治大豆食心虫等害虫。试验构建了由豆荚特异性启动子Pmsg调控的cry2Aa9m基因的植物表达载体pCMB2A,以抗除草剂bar基因为筛选标... cry2Aa9m基因编码的杀虫晶体蛋白(ICPs)对鳞翅目(Lepidoptera)和双翅目(Dipter)昆虫具有显著的毒杀作用,可防治大豆食心虫等害虫。试验构建了由豆荚特异性启动子Pmsg调控的cry2Aa9m基因的植物表达载体pCMB2A,以抗除草剂bar基因为筛选标记,通过农杆菌介导法对绥农28大豆子叶节进行遗传转化,获得抗性株系8株。经PCR和RT-PCR检测结果证明,cry2Aa9m基因已经整合到大豆基因组中并得以表达。研究为抗大豆食心虫转基因育种产业化奠定基础。 展开更多
关键词 大豆 cry2Aa9m基因 农杆菌介导 转基因株系
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转Cry1Ac+Cry2Ab基因棉对棉蚜生命表参数及种群动态的影响 被引量：5
10
作者 雒珺瑜 崔金杰 +2 位作者 张帅 王春义 辛惠江 《应用昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期906-910,共5页
为研究新型转Cry1Ac+Cry2Ab基因棉对棉蚜Aphis gossypii Glover生命表参数及种群动态的影响。2010—2011年以常规棉中棉所49为对照,对新型转Cry1Ac+Cry2Ab基因棉在室内进行了生物测定和田间进行了系统的调查。结果表明,和常规棉相比,转C... 为研究新型转Cry1Ac+Cry2Ab基因棉对棉蚜Aphis gossypii Glover生命表参数及种群动态的影响。2010—2011年以常规棉中棉所49为对照,对新型转Cry1Ac+Cry2Ab基因棉在室内进行了生物测定和田间进行了系统的调查。结果表明,和常规棉相比,转Cry1Ac+Cry2Ab基因棉花上棉蚜的净增值率降低81.69%,差异达显著水平;内禀增长率和周限增长率分别降低65.00%和13.01%,但差异不显著;平均世代周期和种群加倍时间分别增加5.54%和154.19%,后者差异达显著水平。和常规棉相比,2010年转Cry1Ac+Cry2Ab基因棉花百株苗蚜、伏蚜和秋蚜的数量分别降低10.79%、37.18%和17.49%,差异均未达显著水平;2011年转Cry1Ac+Cry2Ab基因棉花百株苗蚜的数量增加2.03%,伏蚜和秋蚜的数量分别降低37.41%和64.03%,差异均未达显著水平。 展开更多
关键词 转Cry1Ac+cry2Ab基因棉花 棉蚜 生命表 种群动态
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转cry1Ac＋cry2Ab基因棉对棉田节肢动物群落的影响 被引量：13
11
作者 雒珺瑜 崔金杰 +1 位作者 张帅 陆雪君 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期90-92,111,共4页
以Bt棉和常规棉为对照,研究了转cry1Ac+cry2Ab棉对棉田节肢动物群落的影响。研究结果表明,转cry1Ac+cry2Ab棉田、转cry1Ac棉田和常规棉田节肢动物群落、害虫亚群落和天敌亚群落的结构与组成无明显差异;转cry1Ac+cry2Ab棉田刺吸类害虫、... 以Bt棉和常规棉为对照,研究了转cry1Ac+cry2Ab棉对棉田节肢动物群落的影响。研究结果表明,转cry1Ac+cry2Ab棉田、转cry1Ac棉田和常规棉田节肢动物群落、害虫亚群落和天敌亚群落的结构与组成无明显差异;转cry1Ac+cry2Ab棉田刺吸类害虫、蛀食类害虫和食叶类害的数量均低于转cry1Ac棉田和常规棉田;转cry1Ac+cry2Ab棉田蜘蛛类、瓢虫类和捕食类天敌的数量均低于转cry1Ac棉田和常规棉田;转cry1Ac+cry2Ab棉田节肢动物群落、害虫亚群落和天敌亚群落的多样性指数与转cry1Ac棉田和常规棉田相比均无明显差异,说明转cry1Ac+cry2Ab棉田节肢动物群落、害虫亚群落和天敌亚群落的稳定性和转cry1Ac棉和常规棉相比均无明显差异。 展开更多
关键词 转cry1Ac+cry2Ab基因棉花 节肢动物群落 生物多样性
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转Cry1Ac+Cry2Ab抗虫棉对3种害虫的存活、生长发育及中肠相关酶活性的影响 被引量：6
12
作者 雒珺瑜 崔金杰 +2 位作者 张帅 辛惠江 王春义 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2013年第1期68-72,共5页
以转Cry1Ac基因棉花和常规非转基因棉花为对照,系统研究了转Cry1Ac+Cry2Ab基因棉花对棉铃虫、斜纹夜蛾、甜菜夜蛾的存活、生长发育及中肠酶活性的影响。研究结果表明,与常规棉对照相比,转Cry1Ac+Cry2Ab基因棉花和转Cry1Ac基因棉花叶片对... 以转Cry1Ac基因棉花和常规非转基因棉花为对照,系统研究了转Cry1Ac+Cry2Ab基因棉花对棉铃虫、斜纹夜蛾、甜菜夜蛾的存活、生长发育及中肠酶活性的影响。研究结果表明,与常规棉对照相比,转Cry1Ac+Cry2Ab基因棉花和转Cry1Ac基因棉花叶片对3种害虫的慢性毒性差异较大,对每种害虫的抗性程度也有一定的差异;饲喂转Cry1Ac+Cry2Ab基因棉花和转Cry1Ac基因棉花叶片的3种害虫幼虫生长发育进度明显缓慢、体重明显减轻,相关酶活性也有不同程度的变化,但每种酶的变化有一定的差异。 展开更多
关键词 转Cry1Ac+cry2Ab棉花 抗虫性 生长发育 酶活性
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光照节律改变对大鼠视网膜中Cry2表达的影响 被引量：5
13
作者 徐金华 林琳 +1 位作者 王育良 柏玉洁 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期994-998,共5页
背景Cry2存在于哺乳动物视网膜上，是生物钟振荡器环路中重要的调控因子。目的探讨光照节律改变对大鼠视网膜中Cry2表达的影响。方法将清洁级健康无眼疾SD大鼠30只按随机数字表法分成2个组，正常对照组大鼠在自然昼夜光线照明下喂养，... 背景Cry2存在于哺乳动物视网膜上，是生物钟振荡器环路中重要的调控因子。目的探讨光照节律改变对大鼠视网膜中Cry2表达的影响。方法将清洁级健康无眼疾SD大鼠30只按随机数字表法分成2个组，正常对照组大鼠在自然昼夜光线照明下喂养，实验组大鼠饲养在光照控制室内，大鼠活动平面光照度为（533±16）lx，设定每日光照明（6：00～24：00）、暗（24：00～6：00）循环交替时间为18h／6h，持续时间为3个月。于实验后3个月时在光学显微镜及透射电子显微镜下观察大鼠视网膜组织结构和超微结构的改变，采用免疫组织化学法检测各组大鼠视网膜中Cry2蛋白的表达，采用实时荧光定量PER法检测Cry2mRNA在视网膜组织中的表达变化。结果光学显微镜下可见，正常对照组大鼠喂养3个月时视网膜各层结构清晰，排列整齐，而实验组大鼠视网膜萎缩变薄，排列紊乱。透射电子显微镜下观察表明，正常对照组大鼠光感受器细胞外节膜盘结构清晰，内节线粒体嵴连续，外核层细胞核形态规则，但实验组大鼠光感受器内外节结构紊乱，外节膜盘间隙增大，出现溶解、空泡变，光感受器内节线粒体空泡变，视网膜外核层细胞核染色质浓集，部分出现核碎裂、边集，核膜皱缩、内陷。免疫组织化学检测显示，2个组大鼠Cry2蛋白均在视网膜节细胞及内核层部分细胞的细胞质和核膜阳性表达，实验组大鼠Cry2蛋白表达评分为（0．833±O．197）分，明显低于正常对照组的（1．700±0．245）分，差异有统计学意义（P=0．009）。实时荧光定量PCR定量检测结果显示，正常对照组大鼠视网膜中Cry2mRNA表达量为0．962±0．125，实验组为0．615±0．100，差异有统计学意义（P=0．006）。结论533lx的光照强度长期节律性照射可导致大鼠视网膜组织结构损伤，其机制可能与视网膜中Cry2的表达下调有关，调整Cry2的表达是否是临床上稳定生物节律的一个重要环节值得探讨。 展开更多
关键词 视网膜光损伤 cry2 生物节律
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苏云金芽孢杆菌cry2 Aa操纵元蛋白对杀虫蛋白晶体形成作用的研究 被引量：4
14
作者 姚江 张杰 +5 位作者 陈中义 李长友 黄大旸 宋福平 刘旭光 檀建新 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期115-118,共4页
利用重叠PCR的方法 ,通过两次PCR扩增 ,分别获得cry2Aa1 0操纵元的orf1、orf1 +orf2与cry2Ab5基因的融合片段。融合片段经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切与pHT31 5连接 ,分别构建了基因融合片段的原核表达载体pFU(orf1 +2Ab)和pFU(orf1 +orf2 +2A... 利用重叠PCR的方法 ,通过两次PCR扩增 ,分别获得cry2Aa1 0操纵元的orf1、orf1 +orf2与cry2Ab5基因的融合片段。融合片段经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切与pHT31 5连接 ,分别构建了基因融合片段的原核表达载体pFU(orf1 +2Ab)和pFU(orf1 +orf2 +2Ab) ,电转化Bt无晶体突变株 4Q7后 ,扫描电镜下可观察到典型的方形晶体 ,通过SDS PAGE可检测到 6 0kD大小的蛋白表达带。结果表明 ,cry2Ab5可在cry2Aa1 0的启动子帮助下有效转录和表达 。 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 cry2Aa操纵元 杀虫蛋白晶体 晶体形成
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Cry2Aa2和PamPAP双价表达载体的构建及其对辣椒的遗传转化 被引量：3
15
作者 高玉尧 陈长明 +2 位作者 陈国菊 曹必好 雷建军 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期1285-1292,共8页
为了获得既抗虫又抗病毒病,又对人体和环境安全的转基因辣椒(Capsicum annuum L.)材料,将启动子CaMV35S、终止子Nos-ter及缺失无毒型商陆抗病毒蛋白基因PamPAP一起插入到植物表达载体pCAMBIA1301-Cry2Aa2-PMI的多克隆位点上,构建双价表... 为了获得既抗虫又抗病毒病,又对人体和环境安全的转基因辣椒(Capsicum annuum L.)材料,将启动子CaMV35S、终止子Nos-ter及缺失无毒型商陆抗病毒蛋白基因PamPAP一起插入到植物表达载体pCAMBIA1301-Cry2Aa2-PMI的多克隆位点上,构建双价表达载体,采用农杆菌介导法将其转入辣椒中,并用PMI/甘露糖筛选体系对转化植株筛选。经PCR扩增和Southern杂交检测,结果表明Cry2Aa2和PamPAP已经整合到辣椒基因组中。进一步经RT-PCR分析,证实Cry2Aa2和PamPAP在T0代转基因辣椒植株中共表达。经抗虫性、抗病毒病表型鉴定:T0代转基因辣椒植株对黄瓜花叶病毒(CMV)和斜纹夜蛾幼虫的抗性均显著高于非转基因植株。 展开更多
关键词 辣椒 PMI/甘露糖筛选体系 cry2Aa2 PamPAP 遗传转化 抗病毒 抗虫害
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隐花色素CRY2基因片段克隆及RNAi植物表达载体的构建 被引量：5
16
作者 周波 孙梅 +1 位作者 阎淑滑 李玉花 《分子植物育种》 CAS CSCD 2008年第6期1182-1186,共5页
隐花色素是植物向光反应的主要的光受体,介导蓝光/近紫外光调控的反应。在拟南芥中CRY2调节去黄化反应并控制开化时间。我们根据在GenBank中已经发表的拟南芥(NM_100320)、中国大白菜(AY176689)、油菜(AJ889779)CRY2基因的cDNA保守序列... 隐花色素是植物向光反应的主要的光受体,介导蓝光/近紫外光调控的反应。在拟南芥中CRY2调节去黄化反应并控制开化时间。我们根据在GenBank中已经发表的拟南芥(NM_100320)、中国大白菜(AY176689)、油菜(AJ889779)CRY2基因的cDNA保守序列设计并合成同源引物。通过RT-PCR方法从"津田"芜菁(Brassica rapa L.subsp.rapa"Tsuda")总RNA中扩增出CRY2基因的cDNA部分片段,采用gateway技术中的BP反应将其克隆到pDONR221中。测序表明,该片段与拟南芥具有87%的同源性,与油菜和中国大白菜的同源性达97%以上。采用gateway技术中的LR反应,以植物表达载体pH7GWIWG2(I)为基础,构建了由组成型启动子35S调控的CRY2基因的ihpRNAi植物表达载体。 展开更多
关键词 隐花色素cry2基因 RNAI 植物表达载体
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利用农杆菌介导法获得转cry2A抗虫基因水稻的研究 被引量：11
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作者 吴振映 柳絮 +2 位作者 王文英 姚方印 刘开启 《山东农业科学》 2011年第5期1-3,7,共4页
稻纵卷叶螟等鳞翅目害虫对cry2A*编码的Bt毒性蛋白有明显的排斥效应,从而可达到抗虫的效果。本研究利用农杆菌介导法,将载有cry2A*基因的pC-2A质粒转入受体水稻品种镇稻88基因组内,获得转基因植株。由于cry2A*与抗Basta基因紧密连锁,通... 稻纵卷叶螟等鳞翅目害虫对cry2A*编码的Bt毒性蛋白有明显的排斥效应,从而可达到抗虫的效果。本研究利用农杆菌介导法,将载有cry2A*基因的pC-2A质粒转入受体水稻品种镇稻88基因组内,获得转基因植株。由于cry2A*与抗Basta基因紧密连锁,通过Basta抗性筛选,进而得到转cry2A*基因阳性株。PCR和AGE分析结果表明,外源基因cry2A*已成功整合到镇稻88基因组内。田间试验结果显示转基因阳性植株有明显的抗虫效果。 展开更多
关键词 农杆菌介导法 cry2A＊基因 水稻 抗虫性
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拟南芥蓝光受体CRY2的功能及其介导的光形态建成 被引量：2
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作者 张继红 邓克勤 +4 位作者 汪启明 向丰 郭新红 唐冬英 刘选明 《生命科学研究》 CAS CSCD 2010年第1期85-89,共5页
植物具备一套复杂的由两种蓝光受体和多种信号转导下游组分组成的蓝光感应系统,通过感受光照强度、光的方向和光周期,调节自身对蓝光的应答.蓝光反应的有效波长是蓝光和近紫外光(320～400nm),故蓝光受体也叫蓝光/近紫外光受体.CRY2(Cryp... 植物具备一套复杂的由两种蓝光受体和多种信号转导下游组分组成的蓝光感应系统,通过感受光照强度、光的方向和光周期,调节自身对蓝光的应答.蓝光反应的有效波长是蓝光和近紫外光(320～400nm),故蓝光受体也叫蓝光/近紫外光受体.CRY2(Cryptochromes,CRY)是一个核蛋白,在转录水平受蓝光的调节,它的作用是增加拟南芥对蓝光的敏感性.植物蓝光调节的反应主要有向光性、抑制幼茎伸长、叶绿体迁移、刺激气孔张开和调节基因表达等.对植物蓝光反应突变体分子生物学研究进展进行了综述,对蓝光受体及信号转导下游组分在植物发育中的作用及蓝光诱发植物作出反应的分子机制进行了探讨. 展开更多
关键词 蓝光受体 cry2 拟南芥
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转Cry1Ac+Cry2ab基因棉花对小地老虎生长发育的影响 被引量：5
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作者 雒珺瑜 崔金杰 +1 位作者 王春义 辛惠江 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2014年第2期179-183,共5页
测定了转Cry1Ac+Cry2ab基因棉花对小地老虎的致死作用及生长发育的影响。结果表明,与常规棉对照相比,转Cry1Ac+Cry2ab基因棉花对小地老虎幼虫具有一定程度的控制作用,但不理想;转Cry1Ac+Cry2ab基因棉花对小地老虎幼虫的生长发育有较大... 测定了转Cry1Ac+Cry2ab基因棉花对小地老虎的致死作用及生长发育的影响。结果表明,与常规棉对照相比,转Cry1Ac+Cry2ab基因棉花对小地老虎幼虫具有一定程度的控制作用,但不理想;转Cry1Ac+Cry2ab基因棉花对小地老虎幼虫的生长发育有较大的影响,表现为使各虫态发育历期延长,化蛹时间和羽化时间延长,幼虫虫体质量和蛹质量减轻,化蛹率和羽化率明显降低。 展开更多
关键词 转Cry1Ac+cry2ab基因棉花 小地老虎 生长发育
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取食Cry2Ab蛋白后棉铃虫幼虫中肠组织的病理变化 被引量：3
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作者 高珍 梁革梅 +1 位作者 魏纪珍 张丽丽 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期934-944,共11页
为了明确Cry2Ab杀虫蛋白的作用机制,利用透射电镜观察了棉铃虫Helicoverpa armigera(Hübner)3龄末幼虫取食含Cry2Ab蛋白(8μg/g)饲料后中肠的组织病理变化,并与分别取食含Cry1Ac蛋白(0.97μg/g)饲料和正常饲料的棉铃虫进行了比较... 为了明确Cry2Ab杀虫蛋白的作用机制,利用透射电镜观察了棉铃虫Helicoverpa armigera(Hübner)3龄末幼虫取食含Cry2Ab蛋白(8μg/g)饲料后中肠的组织病理变化,并与分别取食含Cry1Ac蛋白(0.97μg/g)饲料和正常饲料的棉铃虫进行了比较。结果表明:棉铃虫取食Cry2Ab蛋白后中肠细胞及其细胞器均发生了明显的病变,主要表现为:中肠杯状细胞的杯腔肿胀或拉长,部分柱状细胞被杯状细胞挤压出来,微绒毛脱落,细胞核皱缩,质膜和核膜不清晰,染色质凝聚,线粒体拉伸变形,内质网肿胀断裂;并且随着取食时间的延长病变越来越明显。与取食Cry1Ac蛋白的棉铃虫相比,Cry2Ab引起棉铃虫中肠组织发生病变的速度较慢。本研究可为Cry2Ab作为转基因棉花的重要杀虫蛋白在将来更好地发挥作用提供理论依据。 展开更多
关键词 棉铃虫 杀虫蛋白 cry2AB CRY1AC 中肠组织 病理变化
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