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农杆菌介导抗虫基因GmCry1F转化玉米的研究 被引量:6
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作者 谢树章 雷开荣 +3 位作者 杨小艳 胡明瑜 林清 吴红 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2015年第3期962-966,共5页
培育转基因抗虫玉米是防治玉米螟虫的有效途径之一。本研究通过对来源于苏云金芽孢杆菌Cry1F野生型基因编码区密码子优化改造获得新型抗虫基因Gm Cry1F,使用农杆菌介导的玉米幼胚遗传转化法将目的基因转入玉米材料Hi-II,最后应用PCR法... 培育转基因抗虫玉米是防治玉米螟虫的有效途径之一。本研究通过对来源于苏云金芽孢杆菌Cry1F野生型基因编码区密码子优化改造获得新型抗虫基因Gm Cry1F,使用农杆菌介导的玉米幼胚遗传转化法将目的基因转入玉米材料Hi-II,最后应用PCR法与蛋白免疫学法对试验结果进行鉴定检测。结果表明:成功构建了植物表达载体CUB-ubi::Gm Cry1F-35s::bar,经光照培养分化获得到转化苗25株,其中有17株的PCR和试纸条检测均呈阳性,说明Gm Cry1F基因已经整合到玉米基因组中。这一研究结果为下一步开展转基因抗虫玉米育种工作提供了较好的研究材料,也为玉米抗虫基因工程育种研究提供参考。 展开更多
关键词 玉米 抗虫基因 GM cry1f 载体构建 遗传转化
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转cry1F基因玉米花粉对腰带长体茧蜂存活和繁殖的影响 被引量:7
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作者 白树雄 张洪刚 +1 位作者 葛星 王振营 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期82-85,共4页
腰带长体茧蜂(Macrocentrus cingulum)是亚洲玉米螟(Ostrinia furnacalis)幼虫的主要寄生蜂,对亚洲玉米螟种群具有重要的控制作用。玉米花粉可以作为腰带长体茧蜂的补充营养。本研究利用转cry1F基因抗虫玉米花粉作为补充食物饲喂腰带长... 腰带长体茧蜂(Macrocentrus cingulum)是亚洲玉米螟(Ostrinia furnacalis)幼虫的主要寄生蜂,对亚洲玉米螟种群具有重要的控制作用。玉米花粉可以作为腰带长体茧蜂的补充营养。本研究利用转cry1F基因抗虫玉米花粉作为补充食物饲喂腰带长体茧蜂寄生亚洲玉米螟幼虫,研究其对腰带长体茧蜂存活和繁殖的影响,为转基因抗虫玉米的环境安全评价提供科学依据。结果表明,饲喂转cry1F基因抗虫玉米花粉后腰带长体茧蜂的寄生率、茧块重量、每茧块茧数、羽化率与饲喂对照玉米花粉相比无显著差异;在蜂蜜水+Bt玉米花粉处理中虽然与对照玉米花粉处理相比雌蜂的寿命并没有显著差异,但雄蜂的寿命差异显著;在取食转cry1F基因抗虫玉米花粉的腰带长体茧蜂体内未检测到Bt蛋白成分。说明转cry1F基因抗虫玉米花粉对腰带长体茧蜂的存活和繁殖没有显著影响。 展开更多
关键词 cry1f基因玉米 花粉 腰带长体茧蜂 存活 繁殖
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亚洲玉米螟和黏虫幼虫取食Cry1F蛋白后的中肠组织病理变化 被引量:2
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作者 李国平 姬婷婕 +4 位作者 陈文波 赵晓辉 黄建荣 田彩红 封洪强 《中国生物防治学报》 CSCD 北大核心 2020年第2期288-293,共6页
为了明确Cry1F杀虫蛋白对亚洲玉米螟和黏虫两种重要玉米害虫的作用机制,本文通过透射电镜观察了亚洲玉米螟和黏虫4龄幼虫取食含Cry1F蛋白人工饲料后的中肠组织病理变化,并与其取食含Cry1Ab蛋白人工饲料后的组织病理变化进行了比较。亚... 为了明确Cry1F杀虫蛋白对亚洲玉米螟和黏虫两种重要玉米害虫的作用机制,本文通过透射电镜观察了亚洲玉米螟和黏虫4龄幼虫取食含Cry1F蛋白人工饲料后的中肠组织病理变化,并与其取食含Cry1Ab蛋白人工饲料后的组织病理变化进行了比较。亚洲玉米螟和黏虫4龄幼虫取食Cry1F蛋白48 h后中肠杯状细胞发生了明显的病变,主要表现为:细胞微绒毛肿胀、脱落;细胞核变形,质膜和核膜界限不清晰;染色质发生固缩、贴近核膜;线粒体拉伸变形数量减少,严重的发生空泡化;内质网肿胀与断裂、数量减少,与取食含Cry1Ab蛋白人工饲料相比,玉米螟和黏虫中肠组织发生的病变程度相似。本研究可为Cry1F作为转基因玉米重要的杀虫蛋白在未来亚洲玉米螟和黏虫防治中更好地发挥作用提供理论依据。 展开更多
关键词 亚洲玉米螟 黏虫 cry1f CRY1AB 中肠组织 病理变化
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转Bt cry1F基因抗虫玉米对亚洲玉米螟幼虫存活率的影响 被引量:3
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作者 崔蕾 丛斌 +2 位作者 钱海涛 李冰 孙海燕 《湖北农业科学》 北大核心 2009年第5期1139-1141,共3页
以不同用量的转Bt crylF基因抗虫玉米饲养亚洲玉米螟幼虫,研究人工饲料中转基因玉米对其存活率的影响。结果表明,随着人工饲料中转基因玉米用量的增加,亚洲玉米螟幼虫的存活率逐渐下降,在用量为100%处理时幼虫存活数仅3~5头,存活率仅15... 以不同用量的转Bt crylF基因抗虫玉米饲养亚洲玉米螟幼虫,研究人工饲料中转基因玉米对其存活率的影响。结果表明,随着人工饲料中转基因玉米用量的增加,亚洲玉米螟幼虫的存活率逐渐下降,在用量为100%处理时幼虫存活数仅3~5头,存活率仅15%~20%;在对照玉米处理中,4个处理的幼虫存活数均较高,为16~19头,存活率均在69%以上。转基因玉米处理的幼虫存活数与对照玉米处理相比,两者差异显著。 展开更多
关键词 亚洲玉米螟 转BT基因玉米 cry1f毒蛋白 存活率
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抗Cry1F毒素单链抗体的筛选及初步应用 被引量:1
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作者 徐重新 张存政 +6 位作者 何鑫 张留娟 张霄 仲建锋 刘媛 谢雅晶 刘贤金 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2015年第5期1166-1172,共7页
对扩增的Tomlinson I噬菌体抗体库进行3轮特异性富集,挑取单菌落,采用ELISA、PCR及测序比对分析鉴定阳性噬菌体单链抗体(sc Fv);以宿主替换的方式将阳性噬菌体sc Fv基因导入Escherichia coli HB2151中进行可溶性表达,sc Fv过柱纯化后,... 对扩增的Tomlinson I噬菌体抗体库进行3轮特异性富集,挑取单菌落,采用ELISA、PCR及测序比对分析鉴定阳性噬菌体单链抗体(sc Fv);以宿主替换的方式将阳性噬菌体sc Fv基因导入Escherichia coli HB2151中进行可溶性表达,sc Fv过柱纯化后,建立针对Cry1 F毒素的IC-ELISA检测方法。以Cry1 B、Cry1 C、Cry1 Ab、Cry1 Ac作为竞争抑制物,分析sc Fv的特异性,以Cry1 F毒素在玉米中的添加回收试验评价检测方法的实用性。结果显示,从第3轮富集库中筛选到了11株具有Cry1F毒素结合活性的噬菌体sc Fv菌株,经PCR鉴定都含有目的条带,对其中2株(H1、G9)进行测序,证实为人源化的sc Fv。选取G9号阳性噬菌体sc Fv进行可溶性表达,纯化后收集到的sc Fv浓度为256μg/ml。建立的IC-ELISA检测方法检测灵敏度(IC10)为5.99 ng/ml,抑制中浓度(IC50)为0.410μg/ml,线性检测范围(IC20~IC80)为0.107~0.713μg/ml。sc Fv(G9)对Cry1B、Cry1C具有一定结合活性,交叉反应率分别达到了20.92%和15.59%,但不识别Cry1Ab和Cry1Ac,交叉反应率均低于0.1%。添加回收试验结果表明,基于sc Fv(G9)建立的IC-ELISA检测方法稳定性和重复性都比较好。 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 cry1f毒素 单链抗体 酶联免疫分析
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Bt(Cry1F)毒素多克隆抗体制备及其检测应用 被引量:1
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作者 徐重新 程诚 +5 位作者 张霄 刘媛 仲建锋 胡晓丹 张存政 刘贤金 《农产品质量与安全》 2016年第4期47-51,共5页
通过免疫新西兰大白兔,制备并纯化Bt(Cry1F)毒素多克隆抗体,建立针对Cry1F毒素检测的免疫学分析方法,用于室内分析毒素在农产品和土壤中的残留情况。采用皮下注射法,经4次级联免疫,获得免疫血清效价为1:2500000,经柱纯化后,... 通过免疫新西兰大白兔,制备并纯化Bt(Cry1F)毒素多克隆抗体,建立针对Cry1F毒素检测的免疫学分析方法,用于室内分析毒素在农产品和土壤中的残留情况。采用皮下注射法,经4次级联免疫,获得免疫血清效价为1:2500000,经柱纯化后,测得抗体浓度为4.70 mg/mL;并以其建立的针对Cry1F毒素的间接非竞争时间分辨荧光免疫分析方法(TRFIA),测得线性检测范围在0.04~2000 ng/mL,最低检测灵敏度为0.03 ng/mL,对5种供试毒素类似物(Cry1Ab、 Cry1Ac、 Cry1B、Cry1C、 Cry2A)均具一定交叉识别能力。分别以稻米和黄土为基质,进行添加回收试验,测得批内、批间的稳定性和重复性均达到室内仪器检测要求。 展开更多
关键词 BT毒素 cry1f毒素 多克隆抗体 时间分辨荧光免疫分析
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转Bt cry1F基因抗虫玉米对米蛾生长发育的影响 被引量:3
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作者 姜松男 丛斌 +2 位作者 马晓慧 张柱亭 吴尊曌 《湖北农业科学》 北大核心 2011年第3期509-511,共3页
采用转Bt cry1F基因的32A91、32W09和X1132X 3个玉米品种及其对应的3种非转基因玉米为试材,分别饲养米蛾幼虫,比较转基因和非转基因玉米对米蛾生长发育的影响。结果表明,转cry1F基因玉米对米蛾幼虫存活率的影响均表现为显著降低;转基因... 采用转Bt cry1F基因的32A91、32W09和X1132X 3个玉米品种及其对应的3种非转基因玉米为试材,分别饲养米蛾幼虫,比较转基因和非转基因玉米对米蛾生长发育的影响。结果表明,转cry1F基因玉米对米蛾幼虫存活率的影响均表现为显著降低;转基因玉米32W09饲养的米蛾成虫羽化率显著低于非转基因玉米XY420饲养的米蛾成虫羽化率。 展开更多
关键词 转基因玉米 cry1f毒蛋白 米蛾
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利用表面等离子共振传感器检测苏云金芽孢杆菌cry1F蛋白 被引量:1
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作者 曾倡 张鹏 黄新 《生物技术通讯》 CAS 2012年第6期851-853,共3页
目的:建立检测苏云金芽孢杆菌(Bt)cry1F蛋白的表面等离子共振(SPR)传感器方法。方法:采用SPR检测技术,利用生物分子相互作用分析原理,在金表面修饰特异性单克隆抗体,对cry1F蛋白的检测进行研究。结果:该方法可以较好地检测到cry1F蛋白,... 目的:建立检测苏云金芽孢杆菌(Bt)cry1F蛋白的表面等离子共振(SPR)传感器方法。方法:采用SPR检测技术,利用生物分子相互作用分析原理,在金表面修饰特异性单克隆抗体,对cry1F蛋白的检测进行研究。结果:该方法可以较好地检测到cry1F蛋白,最低检测限可达10 ng/mL,并且具有很好的特异性。结论:SPR检测方法的重复性较好,灵敏度高,目前可用于cry1F蛋白的定性检测,为cry1F蛋白及其他Bt蛋白的检测提供了新方法,在检测转Bt基因植物方面具有广阔的应用前景。 展开更多
关键词 表面等离子共振传感器 cry1f蛋白 苏云金芽孢杆菌 检测
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Genome editing of the SfABCC2 gene confers resistance to Cry1F toxin from Bacillus thuringiensis in Spodoptera frugiperda 被引量:10
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作者 JIN Ming-hui TAO Jia-hui +4 位作者 LI Qp CHENG Ying SUN Xiao-xu WU Kong-ming XIAO Yu-tao 《Journal of Integrative Agriculture》 SCIE CAS CSCD 2021年第3期815-820,共6页
ATP-binding cassette transporter C2(ABCC2)is known to be a receptor for Bacillus thuringiensis(Bt)toxins in several lepidopteran insects.Mutations in the ABCC2 gene have been genetically linked to field-evolved resist... ATP-binding cassette transporter C2(ABCC2)is known to be a receptor for Bacillus thuringiensis(Bt)toxins in several lepidopteran insects.Mutations in the ABCC2 gene have been genetically linked to field-evolved resistance to the Cry1 F toxin from Bt in Spodoptera frugiperda.Here we generated a SfABCC2 knockout strain of S.frugiperda using the CRISPR/Cas9 system to provide further functional evidence of the role of this gene in susceptibility and resistance to Cry1 F.Results from bioassays showed that the SfABCC2 knockout S.frugiperda strain displayed 118-fold resistance to Cry1 F compared with the parental DH19 strain,but no resistance to Vip3 A toxin from Bt.These results provide the first reverse genetic evidence for SfABCC2 as a functional receptor for Cry1 F. 展开更多
关键词 Spodoptera frugiperda ABCC2 CRISPR/Cas9 Bt receptor cry1f
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安徽省不同地理种群草地贪夜蛾对Bt蛋白的敏感性
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作者 徐婷婷 王月琴 +4 位作者 胡飞 毕思佳 胡本进 王振营 徐丽娜 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期1521-1527,共7页
为明确安徽省不同生态区草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda田间种群对不同转Bt玉米的敏感性,于2020—2021年采用饲料药膜法比较不同地理种群对Bt蛋白Cry1Ab和Cry1F的敏感性。结果显示,2020年,Cry1F蛋白对草地贪夜蛾各地理种群的活性普遍... 为明确安徽省不同生态区草地贪夜蛾Spodoptera frugiperda田间种群对不同转Bt玉米的敏感性,于2020—2021年采用饲料药膜法比较不同地理种群对Bt蛋白Cry1Ab和Cry1F的敏感性。结果显示,2020年,Cry1F蛋白对草地贪夜蛾各地理种群的活性普遍好于Cry1Ab蛋白,Cry1Ab蛋白对无为、埇桥、太和及长丰种群的LC_(50)分别为537.60、484.84、474.18和93.37 ng/cm^(2),而Cry1F蛋白对这4个种群的LC_(50)分别为274.74、48.52、44.44和10.64 ng/cm^(2),均低于Cry1Ab蛋白;Cry1F蛋白仅对宿松种群的LC_(50)(61.81 ng/cm^(2))略高于Cry1Ab蛋白(LC_(50)为54.97 ng/cm^(2))。2021年,Cry1Ab蛋白对无为、太和及长丰种群的LC_(50)分别为235.62、107.76和26.33 ng/cm^(2),与2020年相比分别下降了56.17%、77.27%和71.80%;而Cry1F蛋白对这3个种群的LC_(50)分别为236.84、76.88和24.85 ng/cm^(2),与2020年相比,Cry1F蛋白对无为种群的LC_(50)下降了13.79%;而对太和及长丰种群的LC_(50)分别上升了73.00%和133.55%。表明Cry1Ab和Cry1F蛋白对草地贪夜蛾各地理种群均具有一定活性,可用于草地贪夜蛾的防治。 展开更多
关键词 草地贪夜蛾 敏感性 Cry1Ab蛋白 cry1f蛋白 转Bt玉米 田间种群
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