目的制备2型猪链球菌(Streptococcus suis 2)酪氨酸激酶Cps2C重组蛋白及其抗血清,为进一步研究Cps2C的作用奠定基础。方法采用在线工具对cps2C基因进行生物信息学分析。设计cps2C基因引物,以05ZYH33菌株基因组DNA为模板PCR扩增cps2C基因...目的制备2型猪链球菌(Streptococcus suis 2)酪氨酸激酶Cps2C重组蛋白及其抗血清,为进一步研究Cps2C的作用奠定基础。方法采用在线工具对cps2C基因进行生物信息学分析。设计cps2C基因引物,以05ZYH33菌株基因组DNA为模板PCR扩增cps2C基因,构建pET32a:cps2C重组质粒;重组质粒转入感受态E.coli BL21后,IPTG诱导表达Cps2C重组蛋白,经Ni2+亲和层析纯化后用His单克隆抗体进行鉴定。用纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,获得多克隆抗血清,采用间接ELISA法测定抗体效价。结果成功构建pET32a:cps2C表达质粒,获得阳性E.coli BL21Cps2C重组蛋白表达菌株,SDS-PAGE显示纯化的目的蛋白条带单一,相对分子质量为43×103,与预期一致;Western blot检测Cps2C重组蛋白可以与His单克隆抗体、感染05ZYH33全菌的猪恢复期血清反应。制备的多克隆抗血清效价为1∶819 200,且能与重组蛋白反应。结论原核表达了具有抗原性的Cps2C重组蛋白,制备的鼠源多抗血清能识别Cps2C蛋白,为研究Cps2C蛋白在2型猪链球菌中的作用奠定了基础。展开更多
