目的探究Cosmc或T-合酶基因敲除引起的异常O-糖基化修饰对结肠癌外泌体中微小RNA表达模式的影响,以揭示O-糖基化在结肠癌发展中的分子机制,并识别潜在的生物标志物,为结肠癌的早期诊断和治疗提供新策略。方法在人结肠癌细胞株HCT116中应...目的探究Cosmc或T-合酶基因敲除引起的异常O-糖基化修饰对结肠癌外泌体中微小RNA表达模式的影响,以揭示O-糖基化在结肠癌发展中的分子机制,并识别潜在的生物标志物,为结肠癌的早期诊断和治疗提供新策略。方法在人结肠癌细胞株HCT116中应用CRISPR/Cas-9基因编辑技术,分别靶向敲除Cosmc或T-合酶基因,以构建两种异常O-糖基化修饰的稳定转染细胞系。提取分离出肠癌细胞来源的外泌体,利用微小RNA(microRNAs,miRNAs)微阵列芯片,对比分析了其外泌体中miRNAs的表达差异。随后,在两组细胞来源的外泌体中筛选出表达量发生显著变化且变化趋势一致的miRNAs群体,采用传统荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术对这些miRNAs进行了独立验证。最后,通过癌症基因组图谱计划(The Cancer Genome Atlas Program,TCGA)数据库获取结直肠癌患者信息,利用R语言将表达上调的miRNA进行基因集富集分析(Gene Set Enrichment Analysis,GSEA),探索其显著相关的下游通路及表型。结果无论是Cosmc还是T-合酶基因缺失均会导致结肠癌细胞中O-糖基化修饰发生异常,Tn抗原暴露,进而使得结肠癌细胞来源的外泌体中hsa-miR-125b-1-3p表达量下调(P<0.05),而hsa-miR-218-5p表达量上调(P<0.05),且与肿瘤细胞上皮-间质转化过程密切相关(P<0.05)。结论由Cosmc或T-合酶基因缺失所介导的异常O-糖基化对结肠癌外泌体中相关miRNAs表达产生显著影响,进而可能影响结肠癌上皮-间质转化过程,从而促进肠癌远处转移。由此,基于肠癌外泌体的高稳定性及易检出性的天然优势,通过对其所携带miRNAs的表达量变化进行检测,可监测疾病进展和治疗效果,从而为结肠癌患者提供更为个性化的诊疗策略。展开更多
目的:基于核心1β1,3-半乳糖基转移酶(C1GALT1)及其伴侣蛋白Cosmc(C1GALT1/Cosmc通路)研究雷公藤多苷(TWM)对IgA肾病(IgAN)大鼠肠道菌群及免疫功能的影响。方法:构建IgAN大鼠模型,随机分为模型组(IgAN组)、地塞米松(Dex)组和TWM组,另设...目的:基于核心1β1,3-半乳糖基转移酶(C1GALT1)及其伴侣蛋白Cosmc(C1GALT1/Cosmc通路)研究雷公藤多苷(TWM)对IgA肾病(IgAN)大鼠肠道菌群及免疫功能的影响。方法:构建IgAN大鼠模型,随机分为模型组(IgAN组)、地塞米松(Dex)组和TWM组,另设正常饲养大鼠为正常对照(NC)组。采用全自动生化分析仪测定各组大鼠血清肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN)、24 h尿总蛋白量(UTP)及24 h尿红细胞数;ELISA法检测各组大鼠血清IgA1水平及血浆肿瘤坏死因子α(TNF-α)、B细胞活化因子(Baff)和白细胞介素17(IL-17)水平;蚕豆凝集素亲和ELISA法检测半乳糖缺乏IgA1(Gd-IgA1)水平;选择性细菌培养基培养肠道菌落;流式细胞术检测外周血单个核细胞(PBMC)中CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)占CD4+T细胞比例(简称Treg比例);Western blot法检测肠黏膜组织C1GALT1和Cosmc的蛋白表达。结果:与NC组比较,IgAN组大鼠24 h UTP和尿红细胞数,SCr和BUN水平,血清IgA1和Gd-IgA1水平,肠道肠杆菌、肠球菌和拟杆菌数量,以及血浆TNF-α、Baff和IL-17水平均显著增加(P<0.05),而双歧杆菌和乳酸杆菌数量、PBMC中Treg比例及肠黏膜组织中C1GALT1和Cosmc蛋白表达水平显著降低(P<0.05);与IgAN组比较,Dex组和TWM组大鼠24 h UTP和尿红细胞数,SCr和BUN水平,血清IgA1和Gd-IgA1水平,肠道肠杆菌、肠球菌和拟杆菌数量,以及血浆TNF-α、Baff和IL-17水平均显著降低(P<0.05),且TWM组低于Dex组(P<0.05),双歧杆菌和乳酸杆菌数量、PBMC中Treg比例及肠黏膜组织中C1GALT1和Cosmc蛋白表达水平显著增加(P<0.05),且TWM组高于Dex组(P<0.05)。结论:TWM可通过促进C1GALT1/Cosmc通路激活降低IgAN大鼠IgA异常糖基化水平,并减轻IgAN大鼠肠道菌群紊乱及免疫功能失调,从而发挥治疗效果。展开更多
文摘目的探究Cosmc或T-合酶基因敲除引起的异常O-糖基化修饰对结肠癌外泌体中微小RNA表达模式的影响,以揭示O-糖基化在结肠癌发展中的分子机制,并识别潜在的生物标志物,为结肠癌的早期诊断和治疗提供新策略。方法在人结肠癌细胞株HCT116中应用CRISPR/Cas-9基因编辑技术,分别靶向敲除Cosmc或T-合酶基因,以构建两种异常O-糖基化修饰的稳定转染细胞系。提取分离出肠癌细胞来源的外泌体,利用微小RNA(microRNAs,miRNAs)微阵列芯片,对比分析了其外泌体中miRNAs的表达差异。随后,在两组细胞来源的外泌体中筛选出表达量发生显著变化且变化趋势一致的miRNAs群体,采用传统荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术对这些miRNAs进行了独立验证。最后,通过癌症基因组图谱计划(The Cancer Genome Atlas Program,TCGA)数据库获取结直肠癌患者信息,利用R语言将表达上调的miRNA进行基因集富集分析(Gene Set Enrichment Analysis,GSEA),探索其显著相关的下游通路及表型。结果无论是Cosmc还是T-合酶基因缺失均会导致结肠癌细胞中O-糖基化修饰发生异常,Tn抗原暴露,进而使得结肠癌细胞来源的外泌体中hsa-miR-125b-1-3p表达量下调(P<0.05),而hsa-miR-218-5p表达量上调(P<0.05),且与肿瘤细胞上皮-间质转化过程密切相关(P<0.05)。结论由Cosmc或T-合酶基因缺失所介导的异常O-糖基化对结肠癌外泌体中相关miRNAs表达产生显著影响,进而可能影响结肠癌上皮-间质转化过程,从而促进肠癌远处转移。由此,基于肠癌外泌体的高稳定性及易检出性的天然优势,通过对其所携带miRNAs的表达量变化进行检测,可监测疾病进展和治疗效果,从而为结肠癌患者提供更为个性化的诊疗策略。
文摘目的:基于核心1β1,3-半乳糖基转移酶(C1GALT1)及其伴侣蛋白Cosmc(C1GALT1/Cosmc通路)研究雷公藤多苷(TWM)对IgA肾病(IgAN)大鼠肠道菌群及免疫功能的影响。方法:构建IgAN大鼠模型,随机分为模型组(IgAN组)、地塞米松(Dex)组和TWM组,另设正常饲养大鼠为正常对照(NC)组。采用全自动生化分析仪测定各组大鼠血清肌酐(SCr)、血尿素氮(BUN)、24 h尿总蛋白量(UTP)及24 h尿红细胞数;ELISA法检测各组大鼠血清IgA1水平及血浆肿瘤坏死因子α(TNF-α)、B细胞活化因子(Baff)和白细胞介素17(IL-17)水平;蚕豆凝集素亲和ELISA法检测半乳糖缺乏IgA1(Gd-IgA1)水平;选择性细菌培养基培养肠道菌落;流式细胞术检测外周血单个核细胞(PBMC)中CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)占CD4+T细胞比例(简称Treg比例);Western blot法检测肠黏膜组织C1GALT1和Cosmc的蛋白表达。结果:与NC组比较,IgAN组大鼠24 h UTP和尿红细胞数,SCr和BUN水平,血清IgA1和Gd-IgA1水平,肠道肠杆菌、肠球菌和拟杆菌数量,以及血浆TNF-α、Baff和IL-17水平均显著增加(P<0.05),而双歧杆菌和乳酸杆菌数量、PBMC中Treg比例及肠黏膜组织中C1GALT1和Cosmc蛋白表达水平显著降低(P<0.05);与IgAN组比较,Dex组和TWM组大鼠24 h UTP和尿红细胞数,SCr和BUN水平,血清IgA1和Gd-IgA1水平,肠道肠杆菌、肠球菌和拟杆菌数量,以及血浆TNF-α、Baff和IL-17水平均显著降低(P<0.05),且TWM组低于Dex组(P<0.05),双歧杆菌和乳酸杆菌数量、PBMC中Treg比例及肠黏膜组织中C1GALT1和Cosmc蛋白表达水平显著增加(P<0.05),且TWM组高于Dex组(P<0.05)。结论:TWM可通过促进C1GALT1/Cosmc通路激活降低IgAN大鼠IgA异常糖基化水平,并减轻IgAN大鼠肠道菌群紊乱及免疫功能失调,从而发挥治疗效果。
