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香鱼补体成分C9基因的克隆、序列分析及表达 被引量：5
1
作者 孔铖将 黄左安 +2 位作者 陈炯 史雨红 陆新江 《Zoological Research》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期151-157,共7页
补体成分C9是构成膜攻击复合体引起靶细胞溶解破坏的重要组成成分。该文测定了香鱼C9 （aC9）基因的cDNA全序列, 序列全长2 125个核苷酸, 编码一个由592个氨基酸组成、相对分子质量为6.56×104的前体蛋白, N端22个氨基酸为信号肽序... 补体成分C9是构成膜攻击复合体引起靶细胞溶解破坏的重要组成成分。该文测定了香鱼C9 （aC9）基因的cDNA全序列, 序列全长2 125个核苷酸, 编码一个由592个氨基酸组成、相对分子质量为6.56×104的前体蛋白, N端22个氨基酸为信号肽序列。序列分析表明, aC9与虹鳟C9的氨基酸同源性最高, 达56.8%, 与其它鱼类C9的同源性介于40.9%~53.8%之间。aC9在健康香鱼肝、脾、肠、鳃和肌肉有表达, 其中在肝内的表达量最高。实时荧光定量PCR的结果显示, 鳗利斯顿氏菌侵染4 h后, 肝中aC9 mRNA表达量显著上调, 并随着时间的推移在16 h时达到峰值。Western blotting分析的结果显示, 鳗利斯顿氏菌侵染后香鱼血清中的aC9蛋白随着时间的推移呈显著上调。以上结果表明, 香鱼肝组织C9基因表达变化与鳗利斯顿氏菌的侵染密切相关, 展开更多
关键词 补体成分c9 香鱼 鳗利斯顿氏菌 实时荧光定量PCR WESTERN BLOTTING
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微量免疫法制备小鼠抗人补体C9抗血清 被引量：2
2
作者 黎万玲 周镜然 +1 位作者 王更银 白云 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期306-307,共2页
目的　建立一种简便有效的免疫方法 ,制备抗人补体C9抗血清。方法　将鉴定好纯度的免疫原稀释至恰当浓度 ,以硝酸纤维素膜吸附抗原 ,将之埋入小鼠背部皮下 ,并再次免疫 1～ 2次。间接ELISA法鉴定抗血清效价 ,免疫印迹实验鉴定抗血清的... 目的　建立一种简便有效的免疫方法 ,制备抗人补体C9抗血清。方法　将鉴定好纯度的免疫原稀释至恰当浓度 ,以硝酸纤维素膜吸附抗原 ,将之埋入小鼠背部皮下 ,并再次免疫 1～ 2次。间接ELISA法鉴定抗血清效价 ,免疫印迹实验鉴定抗血清的免疫反应特异性。结果　间接酶联免疫吸附实验滴定抗血清的效价约为 1× 10 -5,抗血清对正常人血清成分进行的免疫杂交实验得到特异性的C9蛋白条带。结论　以硝酸纤维素膜吸附抗原的微量免疫方案获得特异性和效价均佳的免疫效果。 展开更多
关键词 硝酸纤维素膜 免疫学 免疫印进法 微量免疫法 抗人补体c9抗血清
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补体C9缺陷对LPS诱导的小鼠早期肝脏炎症和损伤的保护作用及机制 被引量：1
3
作者 吴艳红 付晓燕 +5 位作者 于洋 吴沛恩 许虎 房佩佩 魏涛 梁淑娟 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第20期2433-2439,共7页
目的:探讨补体C9基因缺陷对LPS诱导的小鼠早期肝脏炎症反应和损伤的作用及机制。方法:8~10周龄B6.WT和B6.C9^(-/-)小鼠均随机分为LPS组(n=5)和对照组(n=3),实验重复3次。LPS组腹腔注射LPS(0111:B4)5 mg/kg,对照组注射等体积生理盐水,处... 目的:探讨补体C9基因缺陷对LPS诱导的小鼠早期肝脏炎症反应和损伤的作用及机制。方法:8~10周龄B6.WT和B6.C9^(-/-)小鼠均随机分为LPS组(n=5)和对照组(n=3),实验重复3次。LPS组腹腔注射LPS(0111:B4)5 mg/kg,对照组注射等体积生理盐水,处理12 h。酶法检测血清ALT、AST水平,HE染色观察肝脏病理学和炎症细胞浸润情况。ELISA检测血清和肝脏组织抽提物中IL-1β、IL-8、TNF-α水平以及血清中可溶型MAC(sMAC)水平。IF观察肝脏组织中巨噬细胞、中性粒细胞浸润及MAC沉积。qRT-PCR检测肝脏组织IL-1β、IL-8、TNF-αmRNA水平。FACS检测肝脏单个核细胞中巨噬细胞及中性粒细胞比例。结果:LPS刺激后,B6.C9^(-/-)小鼠血清中ALT、AST水平显著低于B6.WT小鼠(P<0.001),HE染色显示其肝脏组织中的病理损伤和炎症反应也明显轻于B6.WT小鼠。B6.C9^(-/-)小鼠血清中IL-1β(P<0.01)、IL-8(P<0.0001)、TNF-α(P<0.0001)水平均显著低于B6.WT小鼠。B6.C9^(-/-)小鼠肝脏中MAC沉积(P<0.01)及血清sMAC水平(P<0.05)低于B6.WT小鼠,肝脏组织抽提物中IL-1β(P<0.01)、IL-8(P<0.05)水平显著低于B6.WT小鼠,TNF-α水平无显著性差异。肝脏组织中IL-1β(P<0.05)mRNA水平低于B6.WT小鼠,而IL-8、TNF-αmRNA水平无显著差异。同时,肝脏单个核细胞中巨噬细胞及中性粒细胞比例也显著低于B6.WT小鼠(P<0.01)。结论:补体C9缺陷通过下调MAC沉积抑制巨噬细胞和中性粒细胞浸润对LPS诱导的早期肝脏炎症反应和损伤起保护作用。 展开更多
关键词 补体c9 LPS 内毒素休克 肝脏损伤 MAC(C5b-9)
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补体C9分子原核表达与多克隆抗体的制备 被引量：1
4
作者 邓亦宁 张云科 吴文学 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2019年第2期49-53,共5页
通过大肠杆菌表达系统表达补体C9重组蛋白,并制备其多克隆抗体,用于检测沉积菌体表面的补体C9分子;方法:通过PCR以兔肝细胞cDNA文库为模板扩增获得补体C9部分基因,并将其克隆至原核表达载体pEASY.-Blunt E1,经测序鉴定成功获得重组质粒p... 通过大肠杆菌表达系统表达补体C9重组蛋白,并制备其多克隆抗体,用于检测沉积菌体表面的补体C9分子;方法:通过PCR以兔肝细胞cDNA文库为模板扩增获得补体C9部分基因,并将其克隆至原核表达载体pEASY.-Blunt E1,经测序鉴定成功获得重组质粒pBlunt-C9。将其转化至大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)中,经IPTG诱导,Ni-NTA亲和层析柱纯化后,获得重组蛋白。将纯化的重组蛋白免疫BALB/c雌鼠,制备抗C9的鼠源多克隆抗体。结果显示,ELISA测得鼠抗C9多克隆抗体效价为1∶12800,Western Blotting表明,制备的多克隆抗体可以特异性识别沉积在金黄色葡萄球菌和链球菌表面的C9分子,为进一步研究补体的生物学功能以及巩膜复合体(MAC)抗细菌感染机制奠定了基础。 展开更多
关键词 补体 MAC 补体c9分子 多克隆抗体
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狼疮性肾炎患者血清补体C9、凝溶胶蛋白与肾功能及疾病转归的关系 被引量：3
5
作者 张福 韩碧翠 刘贞妮 《国际检验医学杂志》 CAS 2024年第9期1106-1109,1115,共5页
目的分析狼疮性肾炎患者血清补体C9、凝溶胶蛋白(GSN)与肾功能及疾病转归的关系。方法选择2020年7月至2022年4月该院收治的101例狼疮性肾炎患者作为研究对象,根据入院时肾小球滤过率(eGFR)分为肾功能正常组[eGFR≥90 mL/(min·1.73 ... 目的分析狼疮性肾炎患者血清补体C9、凝溶胶蛋白(GSN)与肾功能及疾病转归的关系。方法选择2020年7月至2022年4月该院收治的101例狼疮性肾炎患者作为研究对象,根据入院时肾小球滤过率(eGFR)分为肾功能正常组[eGFR≥90 mL/(min·1.73 m^(2)),n=57]和肾功能不全组[eGFR<90 mL/(min·1.73 m^(2)),n=44]。所有患者入院后24 h内检测血清补体C9、GSN,并进行组间比较。采用Pearson相关法分析血清补体C9、GSN与狼疮性肾炎患者肾功能的关系。随访后根据疾病转归情况分为恶化组(n=35)和好转组(n=66)。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估血清补体C9、GSN对狼疮性肾炎患者疾病转归的预测价值,多因素Logistic回归分析探讨狼疮性肾炎患者疾病转归的相关因素。结果肾功能正常组患者血清补体C9低于肾功能不全组,血清GSN水平高于肾功能不全组,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析发现,血清补体C9与狼疮性肾炎患者的肾功能呈显著负相关(r=-0.554,P<0.001),血清GSN与狼疮性肾炎患者的肾功能呈显著正相关(r=0.448,P<0.001)。恶化组血清补体C9水平高于好转组,GSN水平低于好转组,差异有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线分析显示,血清补体C9预测狼疮性肾炎疾病转归的曲线下面积(AUC)为0.826(95%CI:0.776~0.876);血清GSN预测狼疮性肾炎疾病转归的AUC为0.830(95%CI:0.780~0.880);二者联合检测预测狼疮性肾炎疾病转归的AUC为0.905(95%CI:0.855~0.955)。多因素Logistic回归分析发现,血清补体C9(OR=3.480,95%CI:1.983~6.108)、GSN(OR=4.225,95%CI:2.050~8.708)及eGFR(OR=3.762,95%CI:2.069~6.840)、24 h尿蛋白(OR=1.939,95%CI:1.442~2.642)均为影响狼疮性肾炎疾病转归的危险因素(P<0.05)。结论血清补体C9、GSN水平变化与狼疮性肾炎肾功能、疾病转归密切相关,且均可作为评估狼疮性肾炎患者疾病转归的有效指标,二者联合检测具有更好的预测价值。 展开更多
关键词 狼疮性肾炎 补体c9 凝溶胶蛋白 肾功能 疾病转归
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补体C9在不同病理类型肾脏疾病患者肾小球及尿液中的表达情况 被引量：2
6
作者 宁小元 陈孟珂 徐家云 《军事医学》 CAS 2021年第10期753-756,共4页
目的探讨补体C9在不同病理类型肾脏疾病患者肾小球及尿液中的表达情况。方法分别收集微小病变肾病(MCD)、膜性肾病(MN)、IgA肾病(IgAN)各10例患者的肾穿刺活检标本及尿液标本。采用免疫荧光技术检测不同病理类型肾脏疾病患者肾小球中补... 目的探讨补体C9在不同病理类型肾脏疾病患者肾小球及尿液中的表达情况。方法分别收集微小病变肾病(MCD)、膜性肾病(MN)、IgA肾病(IgAN)各10例患者的肾穿刺活检标本及尿液标本。采用免疫荧光技术检测不同病理类型肾脏疾病患者肾小球中补体C9的表达情况。分别通过Western印迹及ELISA技术检测不同病理类型肾脏疾病患者尿液中补体C9的水平。结果免疫荧光结果显示,MCD、MN、IgAN患者肾小球中补体C9的表达依次增多(P<0.05)。Western印迹及ELISA结果均表明,MCD、MN、IgAN患者尿液中补体C9水平依次增高(P<0.05)。结论MCD、MN、IgAN患者肾小球及尿液中补体C9同步依次增高,提示补体C9可能为不同病理类型肾脏疾病的诊断提供帮助。 展开更多
关键词 补体c9 微小病变肾病 膜性肾病 IgA肾病 肾小球 尿液
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血清gelsolin和补体C9检测水平与肺结核病灶侵及胸膜的相关性分析 被引量：4
7
作者 刘长利 南琴 +1 位作者 石海平 南芳 《国际呼吸杂志》 2019年第19期1481-1485,共5页
目的探讨血清gelsolin和补体C9检测水平与肺结核病灶侵及胸膜的相关性.方法选取2017年1月至2018年12月陕西省结核病防治院收治初治继发性肺结核患者100例,分为未侵及胸膜组(n=37)和侵及胸膜组(n=63).采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清g... 目的探讨血清gelsolin和补体C9检测水平与肺结核病灶侵及胸膜的相关性.方法选取2017年1月至2018年12月陕西省结核病防治院收治初治继发性肺结核患者100例,分为未侵及胸膜组(n=37)和侵及胸膜组(n=63).采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清gelsolin水平,免疫透射比浊法检测血清补体C9水平.采用Logistic多元逐步回归分析筛选结核病灶侵及胸膜的影响因素,ROC曲线分析血清gelsolin和补体C9诊断结核病灶侵及胸膜的效能.结果侵及胸膜组白蛋白、γ干扰素释放试验水平低于未侵及胸膜组(t=12.274、10.917,P值均<0.05);侵及胸膜组痰菌检查阳性率和gelsolin、补体C9水平高于未侵及胸膜组(χ^2=5.420、t=61.230、21.195,P值均<0.05).血清gelsolin、补体C9水平与侵及胸膜面积、IGRA、痰菌检查呈正相关(r=0.851、0.492、0.695、0.641、0.430、0.510,P值均<0.05).血清gelsolin、补体C9和痰菌检查阳性为结核病灶侵及胸膜的危险因素(OR=3.315、1.706、1.408,P值均<0.05).血清gelsolin、补体C9和痰菌检查阳性诊断结核病灶侵及胸膜的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.88、0.74和0.89,有一定的诊断价值.3组AUC进行比较,痰菌检查的最大,gelsolin次之,补体C9最小,但痰菌检查和gelsolin的AUC差异无统计学意义,痰菌检查诊断的敏感度和特异度均最高,分别为76.64%和95.65%.结论侵及胸膜的肺结核患者血清中gelsolin和补体C9水平升高,与肺结核病灶侵及胸膜呈相关性,可作为肺结核病灶侵及胸膜的辅助诊断指标. 展开更多
关键词 结核 肺 GELSOLIN 补体c9 相关性
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