目的探讨补体C5a及受体(C5aR)对人肾间质成纤维细胞(human renal interstitial fibroblasts,hRIFs)增殖及纤维化相关因子表达的影响。方法原代培养hRIFs细胞,对细胞进行鉴定后,检测C5aR表达情况;同用C5a和C5aR拮抗剂分别对hRIFs处理后...目的探讨补体C5a及受体(C5aR)对人肾间质成纤维细胞(human renal interstitial fibroblasts,hRIFs)增殖及纤维化相关因子表达的影响。方法原代培养hRIFs细胞,对细胞进行鉴定后,检测C5aR表达情况;同用C5a和C5aR拮抗剂分别对hRIFs处理后检测细胞增殖、细胞外基质蛋白(fibronectin,Collagen-I)以及转化生长因子-β1(TGF-β1)的蛋白表达情况。结果hRIFs细胞vimentin蛋白表达阳性,desmin蛋白表达阴性,C5aR表达于hRIFs细胞表面。MTS实验结果显示:与对照组相比,C5a纯品(浓度分别为10,15,20nmol/L)刺激后第2h,8h的A值差异无统计学意义(P>0.05),刺激后第24h的A值(0.217±0.037 vs 0.613±0.016,0.793±0.041,0.887±0.039)显著升高,差异有统计学意义(t=4.891,4.211,8.408,均P<0.05)。与C5a纯品组相比,C5a纯品+C5aR拮抗剂组的A值明显降低(0.887±0.039 vs 0.424±0.016),差异有统计学意义(t=8.657,P<0.05)。Western-Blot结果显示,与对照组相比,补体C5a(20nmol/L)刺激后第24h,fibronectin(26091±128 vs 15400±105),Collagen-I(31229±129 vs 24823±136)以及TGF-β1(27855±161 vs 20326±152)蛋白表达水平都有明显增加,差异具有统计学意义(t=4.891,5.820,2.311,均P<0.05)。与C5a纯品组相比,C5a纯品+C5aR拮抗剂组fibronectin(22188±132 vs 26091±128),Collagen-I(27181±113 vs 31229±129)以及TGF-β1(25013±139 vs 27855±161)蛋白表达水平显著降低,差异具有统计学意义(t=2.349,1.618,3.774,均P<0.05)。结论补体C5a-C5aR相互作用可导致hRIFs细胞增殖、促纤因子TGF-β1表达升高及细胞外基质蛋白生成增加,对肾间质纤维化具有重要意义。展开更多
目的探讨补体C5a/C5aR通路在结肠癌发病中对纤维介素蛋白-2凝血酶原酶(fibrinogen-like protein 2,FGL2)的调节机制,明确补体系统在结肠癌发病中的功能和作用。方法收集2013年12月至2015年7月第三军医大学西南医院普外科、新桥医院消化...目的探讨补体C5a/C5aR通路在结肠癌发病中对纤维介素蛋白-2凝血酶原酶(fibrinogen-like protein 2,FGL2)的调节机制,明确补体系统在结肠癌发病中的功能和作用。方法收集2013年12月至2015年7月第三军医大学西南医院普外科、新桥医院消化科15例经病理活检确诊的住院临床结肠癌患者癌及癌旁组织。采用免疫组织化学方法检测结肠癌患者癌及癌旁组织中补体活化片段C5b-9、活化C3及C5aR的表达,佐证补体系统在结肠癌中的活化状态;进一步通过体内外实验(Western blot)验证结肠癌患者癌及癌旁组织MAPK信号通路中P38的磷酸化水平及FGL2的沉积,明确结肠癌发病中补体C5a/C5aR通路与二者的调节关系。结果免疫组织化学及Western blot实验证实结肠癌患者癌组织C5b-9、活化C3及C5aR的表达明显高于癌旁组织,FGL2的沉积亦显著高于癌旁组织;体外结果提示C5a能促进巨噬细胞系Raw264.7MAPK通路中P38的磷酸化水平(P=0.0013)及FGL2的产生能力(P=0.0071),加入C5aR阻断剂之后,二者表达随之减弱。结论 C5a/C5aR通路能通过MAPK信号途径中的P38信号完成对FGL2的调节作用进而参与结肠癌的发病进程。展开更多
文摘目的:Graves眼病是一种复杂的器官特异性自身免疫性疾病,发病机制尚不明确。补体系统中的核心成分5/5a(component 5/5a,C5/C5a)可能在该疾病的病理过程中发挥重要作用。本研究旨在利用孟德尔随机化(Mendelian randomization,MR)方法探究C5/C5a与Graves眼病的因果关系,以期为Graves眼病的诊断与治疗提供新的理论依据。方法:基于全基因组关联分析(genome-wide association study,GWAS)的汇总数据,以补体C5/C5a作为暴露因素,Graves眼病作为结局因素,分析补体C5/C5a与Graves眼病的因果关系,利用共定位分析得出假设的后验概率(posterior probability of hypothesis,PPH),进一步验证补体C5与Graves眼病的遗传关联。结果:Wald比率法模型显示补体C5与Graves眼病呈显著正相关(OR=4.109,95%CI 1.990~8.486,P<0.001),逆方差加权法(inverse variance weighted,IVW)模型显示C5a与Graves眼病同样呈正相关(OR=2.901,95%CI 1.225~6.869,P=0.015),共定位分析显示补体C5与Graves眼病在给定的遗传窗口内共享同一个单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)rs7036980,PPH4为0.81(>0.80为概率高)。结论:补体C5/C5a的高水平显著增加Graves眼病的发生风险,通过靶向补体C5的抑制剂可以有效降低Graves眼病的发生风险。
文摘目的探讨补体C5a及受体(C5aR)对人肾间质成纤维细胞(human renal interstitial fibroblasts,hRIFs)增殖及纤维化相关因子表达的影响。方法原代培养hRIFs细胞,对细胞进行鉴定后,检测C5aR表达情况;同用C5a和C5aR拮抗剂分别对hRIFs处理后检测细胞增殖、细胞外基质蛋白(fibronectin,Collagen-I)以及转化生长因子-β1(TGF-β1)的蛋白表达情况。结果hRIFs细胞vimentin蛋白表达阳性,desmin蛋白表达阴性,C5aR表达于hRIFs细胞表面。MTS实验结果显示:与对照组相比,C5a纯品(浓度分别为10,15,20nmol/L)刺激后第2h,8h的A值差异无统计学意义(P>0.05),刺激后第24h的A值(0.217±0.037 vs 0.613±0.016,0.793±0.041,0.887±0.039)显著升高,差异有统计学意义(t=4.891,4.211,8.408,均P<0.05)。与C5a纯品组相比,C5a纯品+C5aR拮抗剂组的A值明显降低(0.887±0.039 vs 0.424±0.016),差异有统计学意义(t=8.657,P<0.05)。Western-Blot结果显示,与对照组相比,补体C5a(20nmol/L)刺激后第24h,fibronectin(26091±128 vs 15400±105),Collagen-I(31229±129 vs 24823±136)以及TGF-β1(27855±161 vs 20326±152)蛋白表达水平都有明显增加,差异具有统计学意义(t=4.891,5.820,2.311,均P<0.05)。与C5a纯品组相比,C5a纯品+C5aR拮抗剂组fibronectin(22188±132 vs 26091±128),Collagen-I(27181±113 vs 31229±129)以及TGF-β1(25013±139 vs 27855±161)蛋白表达水平显著降低,差异具有统计学意义(t=2.349,1.618,3.774,均P<0.05)。结论补体C5a-C5aR相互作用可导致hRIFs细胞增殖、促纤因子TGF-β1表达升高及细胞外基质蛋白生成增加,对肾间质纤维化具有重要意义。
