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绵羊BMPR1B基因真核表达及产物互作蛋白的鉴定 被引量：6
1
作者 贾建磊 陈倩 +2 位作者 靳继鹏 袁赞 张利平 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第12期94-104,共11页
旨为研究BMPR1B蛋白及其相互作用蛋白在绵羊卵巢卵母细胞发育及排卵的作用通路。通过构建BMPR1B基因真核表达体系并表征BMPR1B蛋白质,利用CoIP-MS技术鉴定母羊卵巢提取物中与BMPR1B特异性相互作用的蛋白质,构建目的蛋白质互作网络,通过... 旨为研究BMPR1B蛋白及其相互作用蛋白在绵羊卵巢卵母细胞发育及排卵的作用通路。通过构建BMPR1B基因真核表达体系并表征BMPR1B蛋白质,利用CoIP-MS技术鉴定母羊卵巢提取物中与BMPR1B特异性相互作用的蛋白质,构建目的蛋白质互作网络,通过生物信息学分析并预测BMPR1B蛋白及其相互作用蛋白在绵羊卵巢卵母细胞发育及排卵的作用通路。母羊卵巢提取物中23种蛋白质与BMPR1B蛋白具有关联性,其中6种目的蛋白(BMP2、BMP4、GDF5、GDF9、RhoD和HSP10)与BMPR1B具有特异性相互作用,通过生物信息学分析表明目的蛋白在TGF-β信号转导通路、卵巢类固醇生成通路和MAPK信号转导通路构成复杂且紧密的交互网络,基于互作结果设计BMPR1B蛋白调节绵羊卵母细胞的发育和排卵的代谢途径。BMPR1B蛋白与绵羊产羔性状途径中Smads家族蛋白具有交互作用,在绵羊卵母细胞发育和排卵中具有重要作用。 展开更多
关键词 绵羊 BMPR1B 互作蛋白 coip-ms 生物信息学
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免疫共沉淀结合质谱筛选绵羊BMPR-1B互作蛋白的研究 被引量：1
2
作者 贾建磊 丁强 +2 位作者 赖勇 张勇 张利平 《家畜生态学报》 北大核心 2017年第3期10-13,共4页
为研究与绵羊骨形态发生蛋白受体1B(BMPR-1B)相互作用的蛋白,试验通过构建的pcDNA3.1a-BMPR-1B真核表达载体并在Sf9昆虫细胞中特异性表达,采用免疫共沉淀的方法富集绵羊卵巢中与BMPR-1B蛋白的结合蛋白,SDS-PAGE凝胶电泳分离免疫共沉淀... 为研究与绵羊骨形态发生蛋白受体1B(BMPR-1B)相互作用的蛋白,试验通过构建的pcDNA3.1a-BMPR-1B真核表达载体并在Sf9昆虫细胞中特异性表达,采用免疫共沉淀的方法富集绵羊卵巢中与BMPR-1B蛋白的结合蛋白,SDS-PAGE凝胶电泳分离免疫共沉淀复合物,MALDI-TOF/TOF结合数据库检索方法筛选鉴定与BMPR-1B相互作用蛋白。结果表明,试验获得的GDF5、BMP2、BMP4、RhoD和HSP 10蛋白与BMPR-1B互作,GDF5和BMP4作为BMPR-1B蛋白的配体来发挥其生物学功能,BMP2、RhoD和HSP 10在卵泡发育上起重要作用。RhoD和HSP 10与棉羊繁殖主效基因相关联。研究结果为进一步研究BMPR-1B的功能和研究BMPR-1B作为绵羊高繁主效基因的机理和分子调控机制提供了新的思路与方法。 展开更多
关键词 BMPR-1B 真核表达 免疫共沉淀 质谱 相互作用蛋白
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MMS21通过维持MCM2-7复合物稳定性促进肝细胞癌增殖活性 被引量：1
3
作者 李文佳 朱元昕 胡开顺 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期203-211,共9页
【目的】探讨SUMO E3泛素连接酶MMS21在肝细胞癌的表达及发挥作用机制。【方法】利用GEPIA2和CPATC数据库分析MMS21在肝细胞癌中的mRNA和蛋白表达变化及与患者预后的关系;设计两条siRNA分别敲低肝癌细胞内源性MMS21的表达,并采用流式细... 【目的】探讨SUMO E3泛素连接酶MMS21在肝细胞癌的表达及发挥作用机制。【方法】利用GEPIA2和CPATC数据库分析MMS21在肝细胞癌中的mRNA和蛋白表达变化及与患者预后的关系;设计两条siRNA分别敲低肝癌细胞内源性MMS21的表达,并采用流式细胞技术检测细胞周期分布比例;进行BrdU染色和DNA fiber实验检测细胞增殖能力与DNA合成速度;构建带有MYC标签的MMS21蛋白过表达载体,并在细胞系SK-hep1中建立其稳定表达的细胞株;利用Co-IP联合质谱分析的方法鉴定MMS21的互作蛋白组并进行信号通路富集分析;采用West⁃ern Blot,检测MMS21对细胞周期相关蛋白的影响。【结果】在肝细胞癌中,与癌旁组织(160例)相比,MMS21在癌组织(369例)中显著高表达(P<0.05),其高表达与患者不良预后相关(P<0.01)。在肝癌细胞系中,使用两条siRNA分别敲低内源MMS21的表达后,SK-hep1细胞中G1期的细胞比例显著上升(P<0.001;P<0.01),S期比例显著下降(P<0.01;P<0.05),G2/M期比例下降(P<0.05;P<0.05);HepG2细胞中G1期的细胞比例显著上升(P<0.001;P<0.001),S期比例显著下降(P<0.01;P<0.01),G2/M期比例下降(P<0.05;P<0.05);SK-hep1细胞的DNA合成速度明显减慢(P<0.0001;P<0.0001);SK-hep1和HepG2细胞增殖能力显著下降(P<0.01;P<0.001;P<0.001;P<0.001)。质谱鉴定MMS21的互作蛋白组,共鉴定到641个高可信度蛋白;通路富集分析表明,这些结合蛋白显著富集于细胞周期相关的生理过程;进一步的Western Blot结果表明:MMS21的缺失能抑制S期和G2/M期的周期蛋白表达量,降低微小染色体维持蛋白家族(MCMs)的蛋白水平。【结论】SUMO E3连接酶MMS21在肝细胞癌中高表达,并与患者不良预后相关;MMS21与肝癌细胞的增殖密切相关,能够维持细胞周期蛋白和复制复合物MCM蛋白稳定性,促进肝癌细胞的增殖能力。 展开更多
关键词 肝癌 MMS21 增殖 coip-ms 微小染色体维持蛋白家族
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过表达LRRFIP1对肝癌细胞Huh7生物学行为的影响 被引量：1
4
作者 宋萨 许悦欢 +7 位作者 张瑶尧 吴莹莹 艾明凤 谢嘉琳 邱藓婷 李奕宝 周素芳 晁耐霞 《广西医科大学学报》 CAS 2023年第2期206-213,共8页
目的:探讨LRRFIP1表达上调对肝癌细胞Huh7的生物学行为影响,并初步探索其相关机制。方法:构建LRRFIP1过表达的稳定细胞株,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)和蛋白免疫印迹法(western blotting)检测过表达效率,细胞增殖实验(CCK-8)... 目的:探讨LRRFIP1表达上调对肝癌细胞Huh7的生物学行为影响,并初步探索其相关机制。方法:构建LRRFIP1过表达的稳定细胞株,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)和蛋白免疫印迹法(western blotting)检测过表达效率,细胞增殖实验(CCK-8)检测过表达LRRFIP11对Huh7细胞增殖能力的影响;平板克隆形成实验检测过表达LRRFIP1对Huh7细胞克隆形成能力的影响;流式细胞术检测过表达LRRFIP1对Huh7细胞周期和凋亡的影响;划痕实验和Transwell实验检测过表达LRRFIP1对细胞迁移和侵袭能力的影响;检测与上皮间质转化(EMT)相关的蛋白E-cadherin、N-cadherin,Vimentin和Snail的表达;免疫共沉淀和蛋白质谱技术串联(CoIP-MS)法筛选可能与LRRFIP1互作蛋白。结果:过表达LRRFIP1促进了Huh7细胞的增殖(P<0.001)和克隆形成能力(P<0.001),抑制了细胞凋亡(P<0.01);过表达LRRFIP1导致Huh7细胞G0/G1期比例减少,S期增加(P<0.001,P<0.01)。此外,过表达LRRFIP1组细胞的迁移(P<0.05)和侵袭(P<0.001)数量显著低于对照组;western blotting实验结果显示,与对照组相比,过表达LRRFIP1组细胞上皮细胞标志蛋白E-cadherin表达显著升高(P<0.001),间充质细胞标志蛋白N-cadherin和Vimentin表达显著减低(P<0.001,P<0.01),EMT相关转录因子Snail蛋白表达显著降低(P<0.001)。最后,过表达LRRFIP1后我们采用CoIP-MS法筛选出80个可能与其互作蛋白,GO分析显示Huh7细胞株中下拉LRRFIP结合蛋白富集于27个生物过程、11个细胞组分和9种分子功能。KEGG通路注释显示这80种蛋白主要富集于ECM-受体相互作用信号通路;STRING和Cytoscape分析Hub基因。结论:LRRFIP1过表达促进了肝癌细胞Huh7的增殖和克隆形成能力,抑制其凋亡、迁移、侵袭能力;LRRFIP1可能与eEF1A1相互作用,从而影响肝癌的发生发展。 展开更多
关键词 LRRFIP1 原发性肝癌 HUH7 增殖 迁移 coip-ms
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