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柑橘黄龙病病原CLIBASIA＿03230基因的克隆及其编码蛋白的原核表达 被引量：1
1
作者 赵国欢 张小兵 +1 位作者 李凡 李为民 《云南农业大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2019年第1期9-14,共6页
【目的】柑橘黄龙病(Citrus Huanglongbing,HLB)是由韧皮部杆菌(Candidatus Liberibacter spp.)引发的重要柑橘病害。本试验利用生物信息学方法分析韧皮部杆菌全基因组,推测CLIBASIA_03230基因(命名为Clsp11)编码分泌蛋白,克隆该基因并... 【目的】柑橘黄龙病(Citrus Huanglongbing,HLB)是由韧皮部杆菌(Candidatus Liberibacter spp.)引发的重要柑橘病害。本试验利用生物信息学方法分析韧皮部杆菌全基因组,推测CLIBASIA_03230基因(命名为Clsp11)编码分泌蛋白,克隆该基因并构建其原核表达载体,表达、纯化Clsp11蛋白,以用于制备特异抗体。【方法】利用CTAB法从感染柑橘黄龙病病原的长春花中提取总DNA,以此为模板经PCR扩增Clsp11,并克隆至pMD18-T载体,挑取阳性克隆测序验证;利用无缝克隆技术将Clsp11克隆至原核表达载体pET30a,通过PCR和酶切鉴定筛选阳性克隆,命名为pET30a-Clsp11;转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导,表达N-端融合6×His标签的Clsp11重组蛋白,SDS-PAGE电泳检测,分析目的蛋白的表达水平,并利用镍柱进行纯化。【结果】Clsp11蛋白成功表达,IPTG诱导5 h表达量显著提高,主要以包涵体形式存在于宿主菌中。【结论】本研究克隆了柑橘黄龙病病原Clsp11基因,构建了原核表达载体pET30a-Clsp11,并成功表达、纯化了Clsp11重组蛋白,为进一步制备特异性抗体和研究Clsp11生物学功能奠定了基础。 展开更多
关键词 柑橘黄龙病 clsp11 基因克隆 原核表达
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