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D型产气荚膜梭菌Clostripain蛋白的原核表达及其免疫保护效果评价
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作者 谢嘉辉 秦赫 +6 位作者 王鹏雁 王澳红 朱钰 邓秋艳 吕悦 樊泰山 蒋建军 《微生物学通报》 北大核心 2026年第3期1515-1528,共14页
【背景】D型产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)对反刍动物的危害极大,现有的亚单位疫苗多基于已被深入研究的α蛋白、ε蛋白等主要毒力因子,但这些疫苗也存在一定的保护局限性,它们大多仅针对单一毒素诱发的疾病,虽能提供部分保护... 【背景】D型产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)对反刍动物的危害极大,现有的亚单位疫苗多基于已被深入研究的α蛋白、ε蛋白等主要毒力因子,但这些疫苗也存在一定的保护局限性,它们大多仅针对单一毒素诱发的疾病,虽能提供部分保护,却难以抵御其他毒素或多种毒素协同感染所导致的疾病。因此,挖掘新的功能未知且具备良好免疫原性的蛋白,可以为亚单位疫苗的研发提供新思路与候选材料。【目的】采用原核表达系统表达并纯化Clostripain蛋白,随后用该蛋白免疫小鼠,以评估其免疫保护效力。【方法】通过软件分析出Clostripain蛋白B细胞抗原表位高得分区域,对该蛋白进行原核表达及纯化,用纯化的蛋白免疫小鼠,检测抗体滴度,并检测小鼠血清中各细胞因子的表达水平。随后,用D型产气荚膜梭菌感染小鼠,计算小鼠存活率,观察小鼠组织病理变化,以此评价该蛋白的免疫保护效果。【结果】首先,通过预测B细胞线性表位和构象表位,发现Clostripain蛋白具备良好的抗原表位。随后,对该蛋白进行原核表达并纯化。SDS-PAGE结果显示,其条带大小约为79 kDa,Western blotting结果显示出现单一清晰条带。经测定D型产气荚膜梭菌对小鼠LD_(50)为2.90×10^(6)PFU/只。重组蛋白免疫小鼠后多克隆抗体效价达到1:409600。细胞因子检测结果显示,IL-4和IL-10表达含量较高,与对照组差异显著,说明该蛋白主要诱导Th2型细胞因子表达,介导体液免疫。攻毒试验中免疫组小鼠存活率为80%。病理组织切片分析免疫组小鼠各组织无严重病变。【结论】本研究通过pET-32a-Clo重组质粒诱导表达并纯化Clostripain蛋白,重组蛋白免疫的小鼠能产生较高滴度的抗体,具备较好的攻毒保护效果,为后续产气荚膜梭菌致病机制及疫苗的研发奠定了基础。 展开更多
关键词 D型产气荚膜梭菌 保护性抗原 clostripain 原核表达 抗体效价 免疫保护
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