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CircAPLP2通过靶向miR-455-3p激活Notch信号通路对子宫内膜癌的增殖和转移的影响
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作者 崔志利 安欣 +1 位作者 刘文利 李静霞 《安徽医药》 2026年第2期296-300,共5页
目的 探讨环状RNA淀粉样前体样蛋白2(circAPLP2)通过靶向微RNA(miR)-455-3p对子宫内膜癌(EC)恶性生物学行为的作用。方法 2023年9月至2024年1月,从TCGA-UCEC中下载miRNA表达数据,筛选目标miRNA。Starbase数据库预测miRNA上调调控分析。... 目的 探讨环状RNA淀粉样前体样蛋白2(circAPLP2)通过靶向微RNA(miR)-455-3p对子宫内膜癌(EC)恶性生物学行为的作用。方法 2023年9月至2024年1月,从TCGA-UCEC中下载miRNA表达数据,筛选目标miRNA。Starbase数据库预测miRNA上调调控分析。利用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测miR-455-3p和circAPLP2 mRNA的表达。蛋白质印迹法分析细胞周期相关蛋白和Notch信号通路相关蛋白的表达。利用生信预测以及双萤光素酶报告基因分析以验证miR-455-3p与circAPLP2的靶向关系。克隆形成实验检测EC细胞的增殖,流式细胞术检测EC细胞周期进程,划痕愈合实验测定EC细胞的迁移,Transwell分析法评估EC细胞的侵袭能力。结果 miR-455-3p在EC细胞中低表达(0.62±0.08、0.51±0.06、0.71±0.09、0.46±0.06比1.01±0.11),明显低于人正常子宫内膜上皮细胞系的1.01±0.11。过表达miR-455-3p抑制EC细胞的增殖、迁移和侵袭,敲低miR-455-3p的表达则增强EC细胞的增殖、迁移和侵袭。此外,circAPLP2作为miR-455-3p的分子海绵。敲低circAPLP2和PBK则能逆转过表达miR-455-3p对EC细胞增殖和转移的抑制作用。结论 circAPLP2通过靶向miR-455-3p激活Notch信号通路促进EC的增殖和转移,这可能为认识EC恶性进展提供了一个新的途径。 展开更多
关键词 子宫内膜肿瘤 环状RNA淀粉样前体样蛋白2 微RNA-455-3p NOTCH信号通路 增殖 转移
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circAPLP2对结直肠癌细胞SW480侵袭与转移的影响及其机制 被引量:2
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作者 张鲁青 项利迪 +1 位作者 缪淳迪 柯孔亮 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期577-586,共10页
目的 探讨circAPLP2对结直肠癌细胞SW480侵袭与转移的调控作用及其分子机制。方法 采用在线数据库Starbase预测circAPLP2与miR-497-5p的结合位点,TargetScan预测miR-497-5p与FGFR1的结合位点。采用qRT-PCR检测LoVo、DLD1、SW480、SW620... 目的 探讨circAPLP2对结直肠癌细胞SW480侵袭与转移的调控作用及其分子机制。方法 采用在线数据库Starbase预测circAPLP2与miR-497-5p的结合位点,TargetScan预测miR-497-5p与FGFR1的结合位点。采用qRT-PCR检测LoVo、DLD1、SW480、SW620、Caco-2、HCoEpiC细胞中circAPLP2、miR-497-5p的相对表达水平,Westernblotting检测FGFR1蛋白的相对表达水平。取SW480细胞,设置:(1)siNC组(转染siControl)与sicircAPLP2组(转染sicircAPLP2),采用qRT-PCR检测circAPLP2、miR-497-5p、FGFR1 mRNA的相对表达水平,Western blotting检测FGFR1蛋白的表达;(2)Vector组(转染对照空载质粒)与circAPLP2组(转染circAPLP2过表达质粒),采用qRT-PCR检测miR-497-5p、FGFR1mRNA的相对表达水平,Westernblotting检测FGFR1蛋白的相对表达水平;(3)siNC组(转染阴性对照)、sicircAPLP2组(转染sicircAPLP2)与sicircAPLP2+miR-497-5p inhibitor组(转染sicircAPLP2),采用Transwell实验检测细胞侵袭能力,划痕实验检测细胞迁移能力,Western blotting检测上皮-间质转化(EMT)标志蛋白(E-cadherin、Twist1、N-cadherin、Vimentin)的表达;(4)NC-miRNA组(转染NC-miRNA)、miR-497-5pmimics组(转染miR-497-5pmimics)与NC-inhibitor组(转染NC-inhibitor)、miR-497-5p inhibitor组(转染miR-497-5p inhibitor),采用qRT-PCR和Western blotting检测FGFR1的表达;(5)pcDNA-Control组(转染pcDNA-Control)与pcDNA-FGFR1组(转染pcDNA-FGFR1),采用Western blotting检测FGFR1蛋白的相对表达水平;(6)NC-miRNA组(转染阴性对照)、miR-497-5p mimics组(转染miR-497-5p mimics)与miR-497-5pmimics+pcDNA-FGFR1组(共转染miR-497-5pmimics和pcDNA-FGFR1),采用Transwell实验检测细胞侵袭能力,划痕实验检测细胞迁移能力,Western blotting检测FGFR1和EMT标志蛋白(E-cadherin、Twist1、N-cadherin、Vimentin)的表达。将circAPLP2-W T或circAPLP2-MT报告质粒、FGFR1-W T或FGFR1-MT报告质粒分别与miR-497-5p mimics和circAPLP2共转染SW480细胞48 h,采用荧光素酶报告基因检测系统检测荧光素酶的活性。结果 在线数据库Starbase、TargetScan分析结果显示,circAPLP2与miR-497-5p、miR-497-5p与FGFR1存在结合的位点。与人结肠上皮细胞HCoEpiC比较,结直肠癌细胞LoVo、DLD1、SW480、SW620、Caco-2中circAPLP2相对表达水平明显升高,miR-497-5p相对表达水平明显降低,FGFR1蛋白相对表达水平明显升高(P<0.05)。敲低circ APLP2的表达后,与siNC组比较,sicircAPLP2组侵袭细胞数减少(P<0.001),划痕愈合率降低(P<0.001),E-cadherin蛋白表达增加,Twist1、N-cadherin、Vimentin蛋白表达降低(P<0.05)。双荧光素酶报告实验结果显示,miR-497-5pmimics明显降低了circAPLP2-MT荧光素酶的活性(P<0.001)。miR-497-5p inhibitor可逆转sicircAPLP2对结直肠癌细胞EMT、迁移和侵袭的抑制作用,表现为侵袭细胞数增多(P<0.001),划痕愈合率升高(P<0.01),E-cadherin表达降低,Twist1、N-cadherin、Vimentin蛋白表达增加(P<0.05)。双荧光素酶报告实验结果显示,miR-497-5pmimics明显降低了FGFR1-MT荧光素酶的活性(P<0.001)。过表达FGFR1可逆转miR-497-5p过表达对结直肠癌细胞迁移和侵袭的抑制作用,表现为侵袭细胞数增多(P<0.001),划痕愈合率升高(P<0.01),E-cadherin表达降低,Twist1、N-cadherin、Vimentin蛋白表达增加(P<0.05)。结论 circAPLP2在结直肠癌细胞中表达水平升高,可能通过竞争性结合miR-497-5p促进FGFR1的表达,从而促进结直肠癌细胞的EMT、侵袭和迁移。 展开更多
关键词 结直肠癌 circaplp2 miR-497-5p 成纤维细胞生长因子受体1 侵袭转移
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